对高效液相色谱法检测脱氢乙酸方法的探究

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摘要：目前在食品中检测脱氢乙酸的方法主要是依据GB/T23377-2009《食品中脱氢乙酸的测定 高效液相色谱法》，而在众多的文献资料中，对于脱氢乙酸在液相色谱法方面的检测条件都提出了一些新的观点，本文对脱氢乙酸在液相色谱法相关检测条件通过正交实验的方法[1]，来分析、优选出最佳的检测条件。

关键词：高效液相 脱氢乙酸 检测 正交实验

1、绪论

在食品中脱氢乙酸检测的国家标准[2]中，液相色谱检测主要条件为：色谱柱C18（5um，250×4.60mm）；柱温30℃；流动相选用甲醇：0.02mol/L乙酸铵（10：90）；流速1.0mL/min；进样量10ul；检测波长293nm，而在相关的文献资料中对于流动相配比、流速、检测波长均有不同的见解。针对脱氢乙酸的检测方法通过正交实验设计进行优选出较好的检测条件。

2、材料与方法

2.1实验仪器与材料

高效液相色谱仪： LC20A，带紫外检测器，日本岛津；

脱氢乙酸标准物质：CDCP-O-59-2G，国家标物中心；

甲醇：色谱纯；

乙酸铵：分析纯；

2.2实验方法

针对检测波长（230nm、293nm、310nm[3]）、流动相配比（5：95、10：90、15：85）与流速（0.8ml/min、1.0ml/min、1.2ml/min）三个关键因素进行中的三个条件进行自由组合，对浓度为10ug/ml的脱氢乙酸标准溶液进行上机测试，对所得出的检测强度进行分析，筛选出强度最大的条件组合。由于自由组合后检测工作量繁重，因此引用正交实验方法，对上述三个因素进行实验设计（实验计划表见表1）

通过正交设计的直观分析结果见表2

表23、结果分析

从表2可以看出，检测波长、流动相配比与流速均对脱氢乙酸最大强度有不同的影响。波长中均值1>均值2>均值3，说明均值2，即波长为230nm；流速中均值2>均值3>均值1，即流速为1ml/min；配比中均值3>均值1>均值2，即流动相配比为甲醇：0.02mol/L乙酸铵（10：90）。因此，通过正交实验筛选出脱氢乙酸液相色谱法最佳检测条件，即：色谱柱C18（5um，250×4.60mm）；柱温30℃；流动相选用甲醇：0.02mol/L乙酸铵（10：90）；流速1.0mL/min；进样量10ul；检测波长230nm。

通过正交实验所筛选的最佳检测条件与GB/T23377-2009《食品中脱氢乙酸的测定 高效液相色谱法》进行对照后，唯一不同的检测波长，即293nm与230nm的区别，因此对浓度为10ug/ml的脱氢乙酸标准溶液分别在该两处进行比较（图谱见图1）。

由上图中可看出脱氢乙酸在波长230nm处明显高于293nm。

同时，对波长230nm的检测条件用10ug/kg的标准溶液进行连续10次的精密度测试，对10次图谱进行了比较（见图2），重现性较好，测得最大响应值分别为68152、68229、68103、65600、65225、67158、66955、66586、67201、68245，计算其相对标准偏差RSD%为1.6%。

4、结论

结合相关的文献资料，通过运用正交实验的方法，对脱氢乙酸在高效液相色谱法的检测条件进行了优选，筛选出最佳的检测条件，即检测波长在230nm明显优于国家标准中规定的293nm。对以后的相关检测标准的修订能够起到指导作用。

5、讨论

在相关的文献资料中，已经对脱氢乙酸、苯甲酸、山梨酸、糖精钠的同时测定进行了相关的研究[4]，那么，能否对脱氢乙酸与GB/T5009.29-2003苯甲酸、山梨酸、糖精钠的检测标准能否统一，还需要进一步的研究。

参考文献：

[1]刘瑞江等；正交试验设计和分析方法研究，2010.9.20。

[2] GB/T23377-2009《食品中脱氢乙酸的测定 高效液相色谱法》

[3] 明立艳； 张忠义；高效液相色谱法测定食品中脱氢乙酸含量，2009.3.5。

[4] 谭朝勤、吴新；高效液相色谱法同时测定面包糕点中苯甲酸（钠）、山梨酸（钾）、安赛蜜、糖精钠和脱氢乙酸（钠）的含2009.6.25。