鸡大肠杆菌的分离鉴定与药敏试验
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[摘要]本试验通过收集承德某地养鸡场临床疑似患大肠杆菌病的死鸡的引脏、脾脏和淋巴结，进行分离培养、生化鉴定、动物试验通过药敏试验，分离出了1株大肠杆菌。药敏试验表明，病原茵对庆大霉素和恩诺沙星极为敏感而对链霉素、四环素、阿莫西林等药物的敏感性较低。
[关键词]鸡；大肠杆菌；分离；鉴定
鸡大肠杆菌病是某些致病性血清刑的埃希氏大肠杆菌引起的禽类传染病的总称。本病的感染途径很多，主要通过消化道和呼吸道感染，也可通过种蛋垂直传播等，临床上可引起急性败血症、眼炎、心包炎、肝周炎、输卵管炎、气囊炎、关节炎等多种病型。目前该病仍然是影响我国养禽业发展的主要疾病之一，造成了相当大的经济损失Ⅲ。对该病的预防和治疗主要是依靠一些抗菌药物，尤其是抗生素，导致耐药菌株越来越多，并且不断产生一些新的耐药菌株，从而使这些抗生素在临床上的应用效果很差。因此，临床治疗大肠杆菌病最好先进行药敏试验，选择敏感药物治疗该病才有较好的疗效。我们采集相应病料经微生物学检查、动物实验等方法诊断为大肠杆菌，现将分离鉴定及试验结果报道如下。
一、材料与方法
1.病料
承德某规模化鸡场病鸡。无菌采集发病鸡的肝脏、脾脏、淋巴结以及十二指肠作为病料。
2.试剂
普通营养琼脂培养基、麦康凯琼脂培养基、普通肉汤培养基[3-4]等均为自制。葡萄糖、麦芽糖、甘露醇、乳糖、蔗糖、枸橼酸盐等购自杭州天和微生物试剂有限公司。
3.方法
(1)形态学观察
取病料直接涂片，革兰氏染色镜检，观察记录菌体形态和染色特征。
(2)细菌的分离培养
以无菌操作的方法，采取病死鸡的肝脏、脾脏、淋巴结以及十二指肠的病料，划线接种于普通营养琼脂培养基、麦康凯琼脂培养基上，37℃恒温培养24h后观察细菌的生长及菌落特征。取初步分离的细菌划线接种于麦康凯琼脂培养基上，37℃培养24h，挑选典型菌落进一步培养。
(3)细菌生化试验
按照参考文献的方法进行糖类发酵试验、吲哚试验、M.R试验、V-P试验、枸橼酸盐利用试验和三糖铁试验生化培养取微量生化管及齐种生化培养基，将分离菌纯培养物的菌种接入后封日，置于37℃培养箱中培养18～24h，观察结果。
(4)血清型鉴定
按照大肠杆菌0抗原鉴定使用说明书操作方法进行细菌的血清型鉴定。
(5)药敏试验
无菌操作下取大肠杆菌纯培养物，均匀涂抹于营养琼脂平板，然后用无菌镊子取各种抗菌素将药敏纸片平均分布于培养基表面，倒置平板置于℃恒温培养18h后测量抑菌圈直径。
二、结果于分析
1.形态学观察
经镜检可见到革兰氏阴性，两端钝圆，长约1.5～3.0υm的短小杆菌，多单在，偶有2～3个菌体相连，无芽孢。
2.大肠杆菌
麦康凯琼脂上形成红色、圆形隆起、光滑湿润、边缘整齐、直径为1.5～2.5mm的小菌落；在伊红美蓝琼脂上形成紫黑色、具有金属光泽的小菌落；在普通琼脂斜而上的菌落为灰白色；在普通肉汤中旱均匀浑浊，管底有灰白色沉淀，并有粪臭味。
3.细菌生化试验
生化试验结果表明，在病料中分离的细菌能够分解葡萄糖、乳糖、蔗糖、麦芽糖和甘露醇，并能够产酸产气；而且该细菌能够产生吲哚，M.R试验阳性、V-P试验阴性，不能利用枸橼酸盐、不能产生硫化氢。初步证明所分离的细菌为大肠杆菌。
4.药敏试验的结果
按抑菌圈直径大小作为判定敏感度高低的标准，结果见表(1)。表1常用药物敏感程度
三、讨论
药敏实验发现，该大肠杆菌对庆大霉素、环丙沙星敏感性高考虑使用；而对磺胺嘧啶钠、青霉素、阿莫西林产生耐药，该养殖户应少用。该养殖户还应注意正确的用药措施，长时间使用某种药物易产生耐药性，细菌耐药性的发生和发展正是抗菌药物广泛应用，特别是滥用药物的结果。因此广大养殖户在治疗大肠杆菌病时必须注意用药问题，加强抗菌药物的质量监督，合理选用药物，在有限的条件下尽量避免耐药菌株的产生。近些年来，利用中草药防治鸡大肠杆菌病取得了明显的效果。
参考文献
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