菘蓝组培再生体系的建立
开篇：润墨网以专业的文秘视角，为您筛选了一篇菘蓝组培再生体系的建立范文，如需获取更多写作素材，在线客服老师一对一协助。欢迎您的阅读与分享！
摘要：以菘蓝（Isatis indigotica）无菌苗的叶片和叶柄为外植体，分别接种到添加不同生长调节剂浓度的MS培养基上，研究不同生长调节剂配比对菘蓝愈伤组织诱导与分化的影响，建立菘蓝组培再生体系。结果表明，叶片是菘蓝愈伤组织形成的最佳外植体，菘蓝愈伤组织诱导的最佳培养基为MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L，愈伤组织分化的最佳培养基为MS+6-BA 1.5 mg/L+NAA 1.0 mg/L。以1/2MS培养基添加0.1 mg/L NAA可使再生植株的生根率达到92.3%。
关键词：菘蓝（Isatis indigotica）；无菌苗；培养基；愈伤组织；再生植株
中图分类号：S567.1+9 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2016）14-3716-04
DOI：10.14088/ki.issn0439-8114.2016.14.044
Abstract： To study the effects of growth regulator on callus induction and differentiation，so that establish tissue culture regeneration system of Isatis indigotica，the leaves and petioles of Isatis indigotica aseptic seedings were cut and inoculated on MS medium supplemented with different growth regulator. The results showed that the leaf is the optimum explant for callus formation of Isatis indigotica and the optimum medium for callus induction and differentiation is MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L，MS+6-BA 1.5 mg/L+NAA 1.0 mg/L，respectively. When the shoots were cultured on 1/2MS medium supplemented with 0.1 mg/L NAA， the rooting rate could reach 92.3%.
Key words： Isatis indigotica； aseptic seedling； medium； callus； regenerated plant
菘蓝（Isatis indigotica Fort，2n=14）是十字花科菘蓝属二年生草本植物，是一种用途较广的中药材[1]，多分布于河南、河北、北京、黑龙江、江苏、甘肃等地[2]。其干燥根入药，称为板蓝根，干燥叶入药，称为大青叶[3]。菘蓝中含有靛蓝、靛玉红、蒽醌类、β-谷甾醇和多种氨基酸，具有清热解毒、凉血利咽、抗病毒细菌的作用[4]，同时，在防治流感、乙肝、流行性腮腺炎等病毒性疾病方面有着广泛的应用[5]。菘蓝中的成分靛玉红能有效遏制肿瘤，对治愈慢性粒细胞白血病有一定疗效[6]；靛红是单胺氧化酶的抑制剂[7]。菘蓝多糖能加强人体的免疫功能[8]。此外，板蓝根在预防严重急性呼吸综合征（SARS）方面发挥着很大作用[9]。Yang等[10]从菘蓝根中提取的抗病毒成分Clemastanin B可以抵抗人类和禽流感病毒和乙型病毒。Shan等[11]的研究表明，从菘蓝根中提取的α-葡聚IIP-A-1是一种有效的辅和治疗性疫苗的候选佐剂。Yang等[12]从菘蓝根中提取出3种新的吲哚类生物碱，对一氧化氮产生具有抑制作用。Liu等[13]从菘蓝根中提取出7种具有抗流感病毒和柯萨奇病毒活性的物质-糖苷双吲哚类生物碱。在菘蓝的遗传转化方面，许铁峰等[14]用根癌农杆菌EHA105转化获得转bar基因的四倍体菘蓝植株。唐俊等[15]用根癌农杆菌转化获得草甘膦抗性的菘蓝植株。Xiao等[16]用含有bar基因作为筛选标记基因的根癌农杆菌转化菘蓝，获得的转Bt Cry1Ac和半夏凝集素（Pta）基因的四倍体菘蓝增强了对蛾和蚜虫的抗性。再生体系的建立是植物遗传转化的前提，需进行愈伤组织的诱导。研究者利用子叶[17]、下胚轴[17]、叶片[18，19]、叶柄[18]、上胚轴[20]为外植体研究了不同生长调节剂及组合对菘蓝愈伤组织诱导的影响。
本研究以菘蓝无菌苗作为培养材料，研究不同生长调节剂组合对菘蓝愈伤组织诱导和分化的影响，探讨菘蓝组培再生体系的建立，以期为菘蓝快速繁殖和高产栽培，高效益、规模化生产提供技术支持，为菘蓝细胞的大规模培养以及靛玉红、靛蓝等重要成分的产业化应用提供原材料，为菘蓝遗传转化提供必要基础。
1 材料与方法
1.1 试验材料
颗粒饱满、大小基本一致、无病斑的菘蓝种子无菌条件下培养所得的实生苗。
1.2 试验方法
将挑选出的菘蓝种子先用自来水清洗，再用无菌水浸泡4 h，转移到超净工作台中进行消毒处理。用无菌水冲洗种子5次，再用75%的乙醇溶液表面消毒30 s，无菌水冲洗2次，然后用10%的NaClO溶液浸泡20 min，无菌水冲洗5次；最后，用无菌滤纸吸干种子表面的水分后，接种于MS基本培养基进行培养以获得无菌苗。
挑选长势较好的无菌苗叶片与叶柄作为外植体，将幼嫩叶片切成面积为1～2 cm2的小块并使叶片正面朝上，将叶柄切成长度为1～2 cm的小段，分别接种于添加不同生长调节剂浓度组合的MS培养基上（表1），每个处理5瓶，每瓶接种3个。MS基本培养基均添加蔗糖30 g/L，琼脂7.0 g/L，pH 5.8，高压蒸汽灭菌。25 ℃下进行暗培养5 d，然后光照培养，光照强度1 800 lx，光照12 h/d。