气相色谱法测定维生素K1中残留溶剂的含量
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[摘要] 目的：测定维生素K1中甲醇、正己烷、乙酸乙酯和甲苯的含量。方法：采用毛细管气相色谱法，OV-101色谱柱，程序升温，载气为氮气，检测器为FID，外标法计算含量。结果：在选定的色谱条件下，测得各有机溶剂的含量与峰面积线性关系良好（r＞0.99）；甲醇、正己烷、乙酸乙酯和甲苯的平均加样回收率分别为100.60%、98.65%、101.42%、101.62%。三批样品中4种有机溶剂残留量均符合规定。结论：经方法学验证，该方法灵敏、准确，适用于本品有机溶剂残留的测定。
[中图分类号]R927 [文献标识码]A [文章编号]1673-7210（2008）07（b）-035-02
Determination of residual organic solvents in Vitamin K1 by gas chromatography
MAO Ying1, BI Zhong-zhou1, DENG Zhi-jian2
(1.Henan Sunny Pharmaceutical Co. LTD., Kaifeng 475000, China;2.The First Affiliated Hospital of Xinxiang Medical College, Weihui 453100, China)
[Abstract] Objective: To determine the contents of the residual methanol, n-hexane, ethyl acetate and toluene in Vitamin K1. Methods:The capillary gas chromatography method was established with FID detector. The capillary column was OV-101 with programmed temperature rising. The carrier gas was nitrogen, the residues were calculated by an external standard method. Results:The linearity of all the four solvents was fairly good. The average recoveries of methanol, n-hexane, ethyl acetate and toluene were 100.60%, 98.65%, 101.42%, 101.62% respectively.The contents of the four residual organic solvents in three bathes of samples all reached the standard requirements. Conclusion:The method is proved to be accurate, sensitive and reliable.It is suitable for the test analysis of the four kinds of solvents.
[Key words] Vitamin K1; Residual organic solvents; Gas chromatography
维生素K1是脂溶性维生素，应用广泛。但维生素K现行的药品标准中亦未修订其残留溶剂项。由于维生素K1在生产过程中使用到国际协调组织(ICH)规定的二类溶剂甲醇（限度为0.3%），正己烷（限度为0.029%），甲苯（限度为0.089%）和三类溶剂乙酸乙酯（建议限度为0.5%），故应在质量标准中加以监控。笔者报道的气相色谱法专属性强，能在同一试验中同时测定四种溶剂的含量，程序升温，方法简便准确。
1 仪器与试药
GC1102气相色谱仪配手动进样装置（上海分析仪器厂）；OV-101 毛细管柱(30 m ×0.53 mm×10 μm，大连化物所)。
甲醇（分析纯，上海振兴化工一厂，批号20070345）；正己烷[分析纯，中国医药(集团)上海化学试剂公司，批号071022]；甲苯[分析纯，中国医药(集团)上海化学试剂公司，批号071202]；乙酸乙酯[分析纯，中国医药(集团)上海化学试剂公司，批号070103]；二甲亚砜[分析纯，中国医药(集团)上海化学试剂公司，批号070523]；维生素K1原料（河南大明制药有限公司，批号070701）。
2 方法与结果
2.1 色谱条件与测定法
色谱柱：OV-101 毛细管柱(30 m ×0.53 mm×10 μm)。柱温起始40℃，维持3 min，以20℃/min升至80℃，随后升至150℃，维持5 min。以高纯氮气为载气，流量为10 ml/min，进样口温度为200℃，氢火焰离子化检测器温度200℃，分流比50∶1。
分别精密称取甲醇对照品75 mg、甲苯对照品22.2 mg、正己烷对照品7.25 mg、乙酸乙酯对照品125 mg，置25 ml量瓶中，加二甲亚砜溶解并稀释至刻度，摇匀，作为储备液；精密吸取1.0 ml置10 ml量瓶中，加二甲亚砜溶解并稀释至刻度，摇匀，对照品溶液；取维生素K1供试品约1.0 g，精密称定，置10 ml量瓶中，加二甲亚砜溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
分别精密量取对照品溶液和供试品溶液1 μl，注入气相色谱仪，记录色谱图见图 1 ，用外标法以峰面积计算。
2.2 色谱参数、检测限和定量限
维生素K1供试品溶液的色谱图如图 1所示。对照品溶液的色谱图中有四种被测溶剂的峰，甲醇峰、正己烷峰、乙酸乙酯峰和甲苯峰柱效分别为2 600、1 800、3 000和2 000，分离度均大于1.5，拖尾因子均在0.95~1.05。甲醇、正己烷、乙酸乙酯和甲苯最低检测浓度分别为0.080 5、0.007 5、0.081 4、0.094 8 g/L。
2.3 重现性与精密度试验
取对照品溶液重复进样5次，测得甲醇、正己烷、乙酸乙酯和甲苯峰面积的RSD分别为 2.1%、2.3%、1.8%、1.6%。将同一份均匀样品，在不同仪器、不同操作条件下测得3份结果，计算甲醇、正己烷、乙酸乙酯和甲苯的RSD分别为2.2%、2.0%、1.8%、1.9%。
2.4 线性关系考察
精密吸取上述对照液0.125、0.625、1.250、2.500、5.000 ml，用二甲亚砜稀释到10 ml，充分混匀，进样1 μl。计算得到各待测溶剂的线性回归方程。结果见表1。
2.5 回收率试验
精密称定维生素K1对照品0.15 g，精密加入对照液0.75 ml，加入二甲亚砜置10 ml量瓶中至刻度，混匀，进样1 μl，计算甲醇、正己烷、乙酸乙酯和甲苯的平均加样回收率分别为100.60%、98.65%、101.42%、101.62%。
2.6 稳定性试验
将依法配制的样品溶液，在室温 25℃下放置 6 h，放置前后测甲醇、正己烷、乙酸乙酯和甲苯含量结果的RSD分别为1.35%、1.20%、2.35%和1.76%。说明本测定法的溶液在6 h内稳定。
2.7 样品含量测定
按上述色谱条件与测定法测定维生素K1样品三批，采用外标一点法计算样品中各溶剂残留量，结果甲醇、正己烷、乙酸乙酯和甲苯含量均低于检测限，含量分别为0.040%、0.002%、0.110%、0.001%，均符合 ICH 建议的限度。
3 讨论
测定时，柱温的选择是关键，采用程序升温的方法可以改变峰形和出峰速度。先在柱温40℃维持3 min，使低沸点组分流出，逐渐升至150℃，维持5 min，加快高沸点组分流出。
[参考文献]
[1]国家药典委员会.中国药典[M].北京：化学工业出版社，2005.附录54.
[2]沙云菲.马来酸替加色罗中有机溶剂残留量的气相色谱法测定[J].复旦学报，2004，31(1):93.
（收稿日期：2007-11-16）
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