石榴皮、石榴瓤及石榴籽的化学成分比较研究

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[摘要] 为比较石榴皮、石榴内瓤和石榴籽化学成分的差异，研究建立了石榴皮饮片的HPLC指纹图谱，对三者的化学成分进行了比较，并对没食子酸和鞣花酸含量进行测定。结果表明，HPLC图谱可见石榴皮与石榴瓤之间化学成分无明显差别，仅成分含量有所不同，而石榴籽与其他二者化学成分存在较大的差异。石榴皮中没食子酸和鞣花酸的质量分数分别为0.33%，0.59%，石榴瓤中没食子酸和鞣花酸的质量分数分别为0.52%，0.38%。石榴籽中仅检测到鞣花酸，质量分数为0.01%。由此可见，在石榴皮饮片净制过程中应去净石榴籽，以免影响饮片质量和临床疗效。内瓤在保证充分干燥的前提下，可以保留。

[关键词] 石榴皮；石榴瓤；石榴籽；HPLC指纹图谱；没食子酸；鞣花酸

石榴皮始载于《雷公炮炙论》，为石榴科植物石榴Punica granatum L.的干燥果皮，具有涩肠止泻、止血、驱虫等功效，是临床常用的传统中药之一。石榴皮约占到石榴质量的20%～30%[1]，石榴皮饮片的制备方法，2010年版《中国药典》描述如下“除去杂质，洗净，切块，干燥”[2]。《全国中药炮制规范》中要求“除去杂质，去净残留的内瓤及种子，洗净，切块，干燥，或洗净，干燥后捣碎”[3]。然而在对市场销售的石榴皮饮片调研中发现，市售石榴皮饮片中往往都含有大量石榴瓤和石榴籽，有一些样品中瓤和籽的量甚至超过了15%。

掺杂了大量内瓤和种子的石榴皮饮片是否会对其质量产生影响，石榴瓤和种子中化学成分与石榴皮又有何差异呢？针对上述问题，本研究建立了石榴皮饮片HPLC指纹图谱，采用该色谱条件对三者化学成分进行了比较，同时测定了石榴皮主要成分没食子酸和鞣花酸在三者中的含量情况，初步探讨了石榴皮、内瓤和籽化学成分的异同，本研究可为石榴皮饮片的净制提供一定的试验依据。

1 材料

Waters 2695高效液相色谱仪；Waters 2996 DAD检测器；R200D 1/10万电子天平（德国Sartorius）；LC-350A超声波中药处理机（济宁市中区鲁超仪器厂）。

没食子酸对照品（中国食品药品检定研究院，批号110831-200302）；鞣花酸对照品（Alfa Aesar，批号10149850）；乙腈为色谱纯；水为超纯水；甲醇、磷酸均为分析纯。试验用石榴皮饮片均为市售品，批号（产地）分别为110301（河北）、100401（河北）、100907（河北）、1004253（河北）、20100718（四川）、090401（安徽）、001006832（安徽）、110704（山东）、100603（山东），经山东省中医药研究院林慧彬研究员鉴定，为石榴科植物石榴P. granatum 的干燥果皮。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

Phenomenex hyperclone C18色谱柱（4.6 mm×250 mm， 5 μm）；以乙腈（A）-0.1%磷酸溶液（B）为流动相，梯度洗脱，0～20 min，1%A，20～80 min，1%～15%A，80～100 min，15%～30%A，流速1.0 mL·min-1；柱温25 ℃。

2.2 对照品溶液的制备

2.2.1 没食子酸对照品溶液的制备 取没食子酸对照品适量，精密称定，加水制成每1 mL含对照品3.3 mg的溶液。

2.2.2 鞣花酸对照品溶液的制备 取糅花酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含对照品0.16 mg的溶液。

2.3 供试品溶液的制备

取石榴皮样品粉末（过40目筛）0.25 g，精密称定，精密加入甲醇25 mL，称重，超声提取1 h，放凉，再次称重，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，滤液过0.45 μm微孔滤膜，即得。

2.4 测定方法

分别精密吸取对照品和供试品溶液各2 μL，注入高效液相色谱仪。

2.5 方法学考察

2.5.1 精密度试验 取同一份石榴皮（批号110704）供试品溶液2 μL，连续进样5次，以糅花酸峰（9号峰）为参照峰，计算各共有峰相对保留时间和相对峰面积。结果表明，各共有峰相对保留时间和相对峰面积基本一致，RSD均小于3.0%，表明仪器精密度良好。

2.5.2 稳定性试验 取同一份石榴皮供试品溶液，室温下保存，分别于0，2，4，8，12 h测定，各共有峰相对保留时间和相对峰面积的RSD均小于3.0%，表明指纹图谱稳定性符合要求，样品在12 h内稳定性良好。

2.5.3 重复性试验 精密称取同一石榴皮饮片粉末6份，以2.3项下方法制备供试品溶液，记录HPLC图谱，各共有峰相对保留时间和相对峰面积的RSD均小于3.0%，表明方法重复性良好。

2.6 石榴皮饮片指纹图谱测定

取搜集的各批次石榴皮饮片，分别制备供试品溶液，进样。将所得图谱以AIA格式依次导入国家药典委员会编写的《中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版》软件。以批号110301的饮片色谱图作为参照图谱，进行指纹匹配。采用平均数法生成对照图谱。石榴皮饮片HPLC指纹图谱叠加图和对照图谱见图1。9个批次饮片与对照图谱之间的相似度依次为0.952，0.979，0.935，0.994，0.906，0.994，0.930，0.989，0.979。9批石榴皮饮片指纹图谱共有峰（9个）的相对保留时间和相对峰面积统计结果见表1，2。

2.7 石榴皮、石榴瓤和石榴籽的HPLC图谱比较

取同一批石榴皮样品（批号110704），从该样品中仔细分离石榴皮、瓤和籽，粉碎，过40目筛，各取0.25 g，精密称定，以2.3项下方法制备供试品溶液。依照指纹图谱色谱条件进行测定，色谱图见图2。

由图2可见，在石榴皮饮片指纹图谱9个共有峰中，2，3，8，9号色谱峰的峰面积石榴皮大于石榴瓤，1，4，5，6，7号色谱峰的峰面积则是瓤大于皮，方框标记处的色谱峰石榴瓤均明显大于石榴皮。在该色谱条件下，石榴籽仅检测到少量鞣花酸（9号峰）。

2.8 没食子酸和鞣花酸含量测定

在同一色谱条件下，对没食子酸和鞣花酸的含量进行测定，结果见表3。同批样品中，没食子酸质量分数石榴瓤大于石榴皮，鞣花酸含量则石榴皮最高，石榴籽中没食子酸未检出，鞣花酸质量分数仅为0.01%。

3 小结与讨论

本研究建立了石榴皮饮片HPLC指纹图谱。该图谱中各色谱峰的保留时间适中，分离度较好，基线稳定，方法学考察结果符合指纹图谱要求，因此可用于石榴皮饮片质量控制。采用该色谱条件对9个批次不同产地石榴皮饮片进行了指纹图谱分析，将石榴皮饮片指纹图谱评价标准暂定为9个特征峰。

采用建立的HPLC指纹图谱色谱条件，对同一批石榴皮药材中石榴皮、石榴瓤和石榴籽的化学成分进行了比较，结果表明，在石榴皮饮片指纹图谱研究暂定的9个特征峰中，4个色谱峰的峰面积石榴皮大于石榴瓤，另外5个则瓤大于皮，除了这9个特征峰，比较其他色谱峰的峰面积，可见石榴瓤明显大于石榴皮。而在石榴籽的HPLC图谱中，仅检测到极小的鞣花酸的色谱峰。石榴皮、瓤和籽中没食子酸和鞣花酸含量比较结果表明，石榴皮中没食子酸和鞣花酸的质量分数分别为0.33%，0.59%，石榴瓤中没食子酸和鞣花酸的质量分数分别为0.52%，0.38%。石榴籽中几乎未检测到没食子酸，鞣花酸质量分数仅为0.01%。

通过上述研究可见，石榴瓤和石榴皮的化学成分无明显不同，二者区别仅在于成分含量的差异，从HPLC图谱看，多数成分石榴瓤中的含量甚至要高于石榴皮。因此推测，石榴皮饮片制备时，是可以保留石榴内瓤的，但前提是必须对饮片充分干燥，因为在搜集样品时发现，一些未除尽石榴瓤的石榴皮饮片中，内瓤部分如果干燥不彻底，极易生虫，会影响饮片的质量和贮存。

石榴籽部分在建立的HPLC指纹图谱色谱条件下，几乎未检测到任何成分，提示在石榴皮饮片制备时，石榴籽必须作为杂质除去。

[参考文献]

[1] 杨丽平，杨永红. 石榴皮的研究进展[J]. 云南中医中药杂志，2004，25（3）：45.

[2] 中国药典. 一部[S]. 2010： 87.

[3] 中华人民共和国卫生部药政管理局编. 全国中药炮制规范[S]. 北京：人民卫生出版社，1988：144.

Comparative study of chemical composition of pomegranate peel

pomegranates inside and pomegranate seeds

ZHOU Qian， SUN Li-li*， DAI Yan-peng， WANG Liang， SU Ben-zheng

（Shandong Academy of Chinese Medicine， Jinan 250014， China）

[Abstract] An HPLC fingerprint of pomegranate peel was established. Using chromatographic conditions， we compared the chemical composition of pomegranate peel， inside and seeds，and simultaneously determined the contents of gallic acid and ellagic acid. By comparison， we found that there were no significant differences between pomegranate peel and inside， but there was a big difference between pomegranate seeds and another two. The contents of gallic acid and ellagic acid of pomegranate peel respectively were 0.33%，0.59%， while in pomegranate inside the result respectively were 0.52%，0.38%. Content of ellagic acid from pomegranate seeds was only 0.01%. By study， we thought that when pomegranate peel was processed， pomegranate seeds should be removed，while pomegranate inside could be retained on the premise of full drying.

[Key words] pomegranate peel； pomegranates inside； pomegranate seeds； HPLC fingerprint； gallic acid； ellagic acid

doi：10.4268/cjcmm20131325