E—Cadherin、CD44v6在肾脏恶性肿瘤中的表达及意义

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[摘要] 目的 探讨E-cadherin和cd44v6在肾脏恶性肿瘤中的表达及临床意义。 方法 选择肾脏恶性肿瘤组织30例和正常肾组织10例，采用免疫组织化学法检测肾脏恶性肿瘤组织和正常肾组织中E-Cadherin、CD44v6的表达，比较两组之间的差异，并分析E-Cadherin和CD44v6与肾脏恶性肿瘤的临床分期、病理分级及淋巴结转移的关系。 结果 肾脏恶性肿瘤组织E-Cadherin表达显著低于对照组（P < 0.01），CD44v6表达显著高于对照组（P < 0.05）。E-Cadherin表达在不同病理分级之间差异不显著（P > 0.05），CD44v6表达在不同病理分级之间差异显著（P < 0.01）。E-Cadherin、CD44v6表达在不同临床分期之间比较差异有统计学意义（P < 0.05）；E-Cadherin在有淋巴结转移的肾脏恶性肿瘤组织表达显著低于无淋巴结转移（P < 0.05）。 结论 E-Cadherin表达下调和CD44v6升高在肾脏恶性肿瘤的发生、发展、浸润等过程中发挥重要的作用。

[关键词] 上皮钙黏附素；CD44基因含v6外显子的变异体；肾脏恶性肿瘤

[中图分类号] R737.11 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2013）08-0014-03

肿瘤的侵袭、转移是一个复杂的过程，是肿瘤患者病情恶化、死亡的主要原因之一。近年来，关于细胞黏附能力在肿瘤转移、侵袭过程中的作用逐渐受到医学界的重视，因此关于与细胞黏附相关的分子的研究逐渐增多。上皮钙黏附素（E-Cadherin）是与细胞黏附能力相关的重要分子之一[1]。CD44是细胞表面的跨膜蛋白，也是一种黏附分子，能够介导细胞与细胞、细胞与基质间相互作用。CD44基因含v6外显子的变异体（CD44v6）的变异部分位于胞外近膜，对黏附作用具有重要的影响。有研究显示，CD44v6能够促使肿瘤浸润生长和转移。本文探讨E-Cadherin和CD44v6在肾脏恶性肿瘤中的表达，并探讨其与临床分期、病理分级等关系。现将实验结果分析报道如下。

1 资料与方法

1.1 病理资料

肾脏恶性肿瘤组30例肾脏恶性肿瘤病理标本来自于2007～2012年在我院进行手术治疗患者的石蜡标本。患者30例，其中男23例，女7例，年龄36～70岁，平均61岁。所有患者均经病理诊断明确。采用Fuhman[2]病理分级法进行分级，Ⅰ级10例，Ⅱ级15例，Ⅲ级5例。采用Robson肿瘤分期法进行分期：Ⅰ期8例，Ⅱ期10例，Ⅲ期9例，Ⅳ期3例。10例患者存在淋巴结转移。选择正常肾组织标本10例作为对照组。

1.2 标本制作

肾组织采用福尔马林液固定，然后石蜡包埋。5 μm厚连续切片，共4张。1张采用HE染色，核实诊断。余3张行免疫组织化学染色，检测E-Cadherin、CD44v6。

1.3 实验方法

1.3.1 试剂 采用免疫组化法，S-P免疫组化试剂盒由上海活乐生物科技有限公司提供，E-Cadherin、CD44v6鼠抗人单克隆抗体由福州迈新生物有限公司提供。

1.3.2 方法 切片脱蜡，100%的酒精浸泡15 min，按照95%-90%-80%-70%的酒精浓度梯度依次进行浸泡，各5 min，然后蒸馏水冲洗。pH为6.0的柠檬盐缓冲液1 L置于压力锅中，加热沸腾后，将组织切片放置在切片架上放入沸腾的缓冲液中，扣上压力阀，从喷气开始计时，2 min后关火，冷却，取出玻片。蒸馏水冲洗，PBS缓冲液冲洗，各2次，每次冲洗3 min。所有切片均加入50 μL的过氧化酶阻断液，室温下放置10 min，PBS缓冲液冲洗3次，每次3 min。甩掉PBS缓冲液后，所有切片均加入50 μL解非免疫性动物血清，室温下孵育10 min。甩掉血清，所有切片均分布加50 μL的鼠抗αE-Cad血清（第一抗体），室温孵育60 min，PBS缓冲液冲洗3次，每次5 min。甩掉PBS缓冲液，每片加入50 μL生物素标记的第二抗体，室温孵育10 min，PBS缓冲液冲洗3次，每次3 min。甩掉PBS缓冲液，每片加入50 μL的链亲和素，室温孵育10 min，PBS缓冲液冲洗3 min，共3次。甩掉PBS缓冲液，每片加入100 μL的AEC溶液，显微镜下观察，10 min后苏木素复染，然后进行自来水冲洗，最后封片。

1.4 病理特点

E-Cadherin位于细胞膜上，阳性：镜下细胞膜出现均匀一致的颗粒，呈棕黄色；阴性为无棕黄色颗粒，或者着色区和无色区相间，且阳性染色的细胞少于90%。CD44v6也定位于细胞膜，阳性细胞细胞膜呈现出棕黄色，阳性细胞超过10%为阳性。

1.5 统计学方法

采用SPSS 16.0统计学软件进行数据处理，计数资料采用χ2检验。P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 E-Cadherin和CD44v6在肾脏恶性肿瘤中表达的病理结果

肾脏恶性肿瘤组织E-Cadherin表达可见细胞膜出现棕黄色均匀一致的颗粒，见图1。肾脏恶性肿瘤组织CD44v6表达可见阳性细胞呈棕黄色，见图2。

2.2 E-Cadherin和CD44v6在肾脏恶性肿瘤和正常肾组织中的表达差异

肾脏恶性肿瘤组织E-Cadherin表达8例阳性，占26.7%，正常肾组织7例阳性，占70.0%，两组差异有统计学意义（P < 0.01）。肾脏恶性肿瘤CD44v6表达17例阳性，占56.7%，正常肾组织2例阳性，占20.0%，两组差异有统计学意义（P < 0.05）。见表1。

2.3 E-Cadherin和CD44v6在不同病理分级中的表达差异

病理分级为Ⅰ级肾脏恶性肿瘤组织E-Cadherin表达3例阳性，占30.0%，Ⅱ级4例阳性，占26.7%，Ⅲ级1例阳性，占20.0%，不同病理分级间比较，差异不显著（P > 0.05）。病理分级为Ⅰ级肾脏恶性肿瘤组织CD44v6表达3例阳性，占30.0%，Ⅱ级11例阳性，占73.3%，Ⅲ级3例阳性，占60.0%，不同病理分级间比较，差异显著（P < 0.01）。见表2。

2.4 E-Cadherin和CD44v6在不同临床分期中的表达差异

临床分期为Ⅰ期的肾脏恶性肿瘤组织中E-Cadherin表达4例阳性，占50.0%，Ⅱ期2例阳性，占20.0%，Ⅲ期1例阳性，占11.1%，Ⅳ期1例，占33.3%。不同临床分期之间比较，差异有统计学意义（P < 0.05）。临床分期为Ⅰ期的肾脏恶性肿瘤组织中CD44v6表达3例阳性，占37.5%，Ⅱ期6例阳性，占60.0%，Ⅲ期7例阳性，占77.8%，Ⅳ期3例，占100.0%。不同临床分期之间比较，差异有统计学意义（P < 0.01）。见表3。

2.5 E-Cadherin和CD44v6与淋巴结转移的关系

有淋巴结转移的肾脏恶性肿瘤组织1例阳性，占10.0%，无淋巴结转移的患者7例阳性，占35.0%，两组间比较，差异显著（P < 0.05）。有淋巴结转移的肾脏恶性肿瘤组织6例阳性，占60.0%，无淋巴结转移的患者11例阳性，占55.0%，两组间比较，差异不显著（P > 0.05）。见表4。

3 讨论

Cadherin家族（Ca2+ dependent cell adhesion molecules family）是一组介导细胞间相互聚集的黏附分子，对于生长发育过程中细胞的选择性聚集具有至关重要的作用。Cadherin分子均为单链糖蛋白，约由723～748个氨基酸构成，为Ⅰ型膜蛋白，由胞膜外区、穿膜区和胞浆区三部分组成。Cadherin家族共有3个成员，E-Cadherin是其中之一，主要分布在上皮组织内，主要介导同型细胞的黏附，对维持上皮细胞的正常结构具有重要的意义，具有抑制肿瘤细胞转移的作用。E-Cadherin在原发病灶中的表达表现为4种形式，均质性在全部肿瘤细胞表达，据造型或均质性降低，完全无表达，在细胞口表达，但没有黏附功能。因此，当E-Cadherin在细胞中表达下降导致功能障碍时，肿瘤细胞呈浸润生长，容易发生远处转移。有研究显示，在乳腺导管癌中，高分化组E-Cadherin成均质性全部表达，而低分化组表达减少或缺如[3]。海鸥等[4]研究E-Cadherin与胃癌浸润转移的关系，结果显示，胃癌E-Cadherin的表达率显著低于正常胃黏膜，其与胃癌的分型、细胞分化程度、胃癌浸润深度、淋巴结转移、TNM分期等均有相关性。孟继虹[5]研究E-Cadherin在白血病细胞中的表达，白血病患者的E-Cadherin表达显著低于正常人。本文的研究结果也显示，肾脏恶性肿瘤组织中E-Cadherin的表达显著低于正常肾组织，而其与病理分级关系不明显。但是其表达与临床分期和淋巴结转移具有相关性，临床分期Ⅰ期的患者表达最高，而有淋巴结转移的患者表达低于无淋巴结转移的患者，说明E-Cadherin表达下调，功能障碍，导致癌细胞的黏附功能下降，促进了癌细胞的转移，促进肿瘤的生长[6]。

CD44为分布极为广泛的细胞表面跨膜糖蛋白，主要参与异质性黏附，即肿瘤细胞与宿主细胞和宿主基质的黏附，异质性黏附在肿瘤细胞侵袭转移中起促进作用[7]。CD44蛋白的主要功能主要有介导淋巴细胞与毛细血管后小静脉中的高柱状内皮细胞结合，使淋巴细胞穿过血管壁回到淋巴组织，参与淋巴细胞的激活过程，与细胞外基质中的透明质酸、层黏连蛋白等基质分子结合，与细胞骨架蛋白结合，参与细胞伪足形成，并与细胞的迁移运动有关[8]。CD44v6在恶性肿瘤组织中阳性表达率高低不一，但阳性表达者较易发生脉管浸润和远处转移，预后不良。有研究认为，CD44v6与细胞的转移、浸润生长等有关。丁雪松[9]对非小细胞肺癌中CD44v6的表达进行研究，结果显示，阳性表达高达69.23%，与临床分期、淋巴结转移呈正相关，而与病理分期、主治分化关系不大，其在良性肺疾病中无表达。徐玉雪[10]对卵巢上皮性肿瘤中的CD44v6表达进行研究，结果显示，卵巢上皮性肿瘤组织中CD44v6表达高达78.26%，显著高于良性肿瘤，而正常卵巢的表达率为0，其与临床分期关系不大，与淋巴结转移有相关性，与腹水也有相关性。本研究结果显示，肾脏恶性肿瘤组织CD44v6的表达显著高于正常人，并且与病理分级、临床分期相关，但与淋巴结转移不相关，考虑可能与本文纳入的研究对象较少有关。

综上所述，多种因素参与肿瘤的发生、发展、转移，而E-Cadherin表达的下降和功能下调及CD44v6异常高表达都对肿瘤的发展、浸润具有重要的意义。本研究的不足之处是纳入的标本较少，进一步的研究还需要后续大样本的分析。

[参考文献]

[1] 马杰，王玲玲，岳欣，等. 上皮钙黏附素在胃癌中的表达及其临床意义[J]. 湖南中医药大学学报，2009，29（9），17-20.

[2] Fuhrman SA，Lasky LC，Limas C. Prognostic significance of morphologic paramaeters in renal cell carcinoma[J]. Am J Surg Pathol，1982，6（2）：655-663.

[3] Gamallo C，Palscios J，Suare A，et al. Correlation of E-cadhcerin expression with differentitation grade and histological type in breast carcinoma[J]. Am J Pathol，1993，142（4）：987-993.

[4] 海鸥，宋梅，王德春，等. Ecadherin表达与胃癌浸润转移的关系[J]. 武警医学院学报，2009，18（2）：90-92.

[5] 孟继虹. Ecadherin在白血病细胞的表达[M]. 北京：中国协和医科大学，2007：33.

[6] 王成，于聪慧，李琳. E-cadherin和N-cadherin在原发性肝细胞癌中的表达[J]. 诊断病理学杂志，2007，14（1）：60-64.

[7] 邵建富，王敬瑄，郑宝军，等. CD44v6和ICAM-1在胃癌组织中的表达及意义[J]. 河北医药，2012，34（22）：3370-3372.

[8] 方兴贵，郭平. CD44在肿瘤干细胞的研究进展[J]. 医学综述，2012，18（20）：3385-3387.

[9] 丁雪松. CD44v6与Ezrin在非小细胞肺癌中的表达及临床意义[D]. 重庆：重庆医科大学，2009：2.

[10] 徐玉雪. CD44v6与PCNA在卵巢上皮性肿瘤中的表达及临床意义[D]. 大连：大连医科大学，2009：16-17.

（收稿日期：2013-01-17）