哈萨克民药柯孜木克颗粒的抗炎作用机制研究
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摘要 目的：探讨新疆哈萨克族民族传统医药柯孜木克颗粒的抗炎作用机制。方法：分别制作角叉菜胶、蛋清致小鼠足趾肿胀炎症模型，并测定小鼠炎性组织中PGE2、组胺、5-羟色胺含量。结果：柯孜木克颗粒小、中、大剂量(400，800，1600mg/kg)对炎症递质PGE2有剂量依赖性的抑制作用(P＜0.05)。对蛋清致小鼠足趾肿胀炎症模型小鼠炎性组织中组胺和5-羟色胺的释放有不同程度的抑制作用(P＜0.01)。结论：柯孜木克颗粒可能通过抑制内源性炎性递质PGE2组胺和5-羟色胺的释放而发挥抗炎作用。
关键词柯孜木克颗粒抗炎作用机制
doi:10.3969/j.issn.1007-614x.2012.18.001
Abstract Objective:To study the anti-inflammatory activity and the anti-inflammatory mechanisms of the KeZimu particle,a kind of traditional Kazakh medicine.Method:Edema in feet induced by carrageenan and egg albumen in mice,then determine the amount ofPGE2、Histame、5-HT.Results:Ke Zimuparticle showed inhibitions of inflammatory activities in PGE2 ,especially the large dose compared with saline group of statistically significant differences (P＜0.05).It can also reduce the amount of Histame、5-HT(P＜0.01).Conclusions:The mechanism of anti-inflammatory action of Ke Zimu particle has the obvious related to his reduction of PGE2、Histame、5-HT.
Key Words KeZimu particle;Anti-inflammatory effect;Mechanism
柯孜木克颗粒是新疆哈萨克民族传统医药研究的验方，组方为黑果越菊、沙生蜡菊、木贼三种药材。据哈萨克医学文献记载及临床研究结果证实，柯孜木克颗粒可用于尿道感染、膀胱炎、肾盂肾炎和肾病综合征，前列腺肥大，小便不畅等，本课题对柯孜木克颗粒的抗炎作用作了系统的实验研究，证实了其具有良好的抗炎作用。从炎性介质方面对其进行药理作用机制研究，结果报告如下。
资料与方法
试剂与仪器：柯孜木克颗粒，角叉菜胶，新鲜蛋清，地塞米松，0.9%氯化钠，酸化正丁醇，正庚烷，半胱氨酸5%，OPT盐酸溶液0.004%，NaIO4溶液0.02%，荧光机，离心机，天平，剪刀，UV2501分光光度计，水浴锅。
实验动物：雄性Wistar大鼠，6～8周龄，50只，体重200±20g；BLAB/C小鼠80只，6～8周龄，体重20±2g；由新疆医科大学实验动物中心提供。
方法：①测定角叉菜胶致大鼠炎性足组织中PGE2含量：取雄性Wistar大鼠50只，体重分别为200±20g，随机分为5组。即生理盐水组、大剂量组(1600mg/kg)、中剂量组(800mg/kg)、小剂量组(400mg/kg)和地塞米松组(20mg/kg)。分组给药柯孜木克颗粒组，未次给药0.5小时后，各鼠右后足跖皮下注射1%角叉菜胶0.1ml/只，从右后足掌心向掌跖关节方向进针，致炎，注射60分钟、120分钟、180分钟、240分钟后分别测量右后足的周长，记录数据。各鼠注射致炎剂以后的后足周长减去正常的周长，即为各个时间的右后足肿胀度。末次测量足跖周长后处死大鼠，在踝关节上1cm处剪下炎性肿胀足跖，称重，剪碎后加5ml生理盐水研磨成匀浆液，离心，取上清夜0.1ml加0.5mol/L KOH-甲醇溶液2ml，在50℃异构化20分钟，用KOH-甲醇溶液稀释至20ml。用KOH-甲醇溶液作调零管，于波长278nm处测定其光密度(A)值。以每克组织相当的吸收光密度值表示PGE2的含量。测定PGE2的含量。②测定蛋清致小鼠炎性足组织中5-羟色胺含量：取BLAB/C小鼠40只，随机分为5组。同上。给药8天。末次给药45分钟，每只小鼠右后足皮下注射10%新鲜蛋清0.1ml。致炎后40分钟沿踝关节处剪下致炎足，称重，划破皮肤后浸泡于酸化正丁醇２ml中2.5小时，再用超声处理20分钟，去掉致炎足，浸液离心。取上清液1.5ml，加入正庚烷3ml和0.1mol/L盐酸1.2ml，振摇5分钟，离心(3000r/分，5分钟)后取水相5ml加入0.2ml5%半胱氨酸，再加0.004%的OPT盐酸溶液6ml，混匀，并加入0.2ml 0.02%的NaIO4溶液，沸水浴10分钟，在激发光波长365nm，发射光波长480nm下测定荧光强度，用荧光强度(int)表示炎性足组织中5-羟色胺的相对含量，比较给药组和空白组5-羟色胺相对含量的差异。③测定蛋清致小鼠炎性足组织中组胺含量：取BLAB/C小鼠40只，随机分为5组。同上。每天灌胃给药1次，共8天。末次给药后45分钟，每只小鼠右后足皮下注射10%新鲜蛋清0.1ml。致炎后40分钟沿踝关节处剪下致炎足，称重，划破皮肤组后浸泡于酸化正丁醇2ml中2.5小时，再用超声处理20分钟，去掉致炎足，浸液离心。取上清液1.5ml，加入正庚烷3mL和0.1mol/L盐酸1.2ml，振摇5分钟，离心(3000r/分，5分钟)离心后取水相5mL，加入3ml三蒸水稀释，再加0.4mol/L NaOH碱化，混匀，并迅速加入0.1%OPT溶液0.1ml，立即混匀，并在21～22℃反应1分钟，然后加入0.5mol/L盐酸1ml酸化以终止缩合反应，在激发光波长360nm，发射光波长440nm下测定荧光强度，用荧光强度(int)表示炎性足组织中组胺的相对含量(荧光法)，比较给药组和空白组中组胺相对含量的差异。