珠子参叶化学成分研究

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[摘要]研究珠子参叶的化学成分。采用硅胶，Sephadex LH-20，ODS柱色谱和半制备型高效液相色谱等方法进行分离纯化，根据理化性质和波谱数据分析鉴定了7个化合物的结构5，7-二羟基-8-甲氧基黄酮（1）、人参皂苷Rs2（2）、西洋参皂苷Rl（3）、人参皂苷Rs1（4）、三七皂苷Fe（5）、人参皂苷Rd2（6） 和gypenosiden IX（7）。化合物1为首次从人参属植物中分离得到，2～7均为首次从该植物中分离得到。

[关键词]珠子参；化学成分；黄酮；皂苷

珠子参叶，亦称汉中参叶，为五加科植物珠子参Panax japonicus C. A. Mey. var. major（Burk）C. Y. Wu et K. M. Feng的干燥带茎叶。其原植物珠子参主要分布在我国四川、云南、陕西、湖北等省，又名扣子七、钮子七、珠儿参，为秦巴山区特色中药“太白七药”中的一种。珠子参叶作为民间药，具有清肺止咳、生津、润喉、防暑、滋补强壮等功效。在民间多用其泡茶饮，用以保护嗓音[1]。自20世纪80年代起，作为人参属的同属植物，珠子参的根茎及其叶子被人们予以广泛研究。经前人化学研究发现，珠子参叶中主要化学成分多为达玛烷型三萜皂苷[2-5]，有着极高的开发和利用价值。鉴于秦巴山区有着丰富的珠子参叶资源，为了更合理的开发利用珠子参叶，作者对其化学成分进行了进一步研究，从其乙醇提取物中分离得到7个化合物，运用现代波谱技术和化学方法分析鉴定了它们的结构，分别是5，7-二羟基-8-甲氧基黄酮（1）、人参皂苷Rs2（2）、西洋参皂苷Rl（3）、人参皂苷Rs1（4）、三七皂苷Fe（5）、人参皂苷Rd2（6）和gypenosiden IX（7）。其中，化合物1为首次从人参属植物中分离得到，2～7均为首次从该植物中分离得到。

1材料

XT5显微熔点测定仪（温度未校正，北京科仪电光仪器厂）；WFH-203三用紫外分析仪（上海精科实业有限公司）；Burker AVANCE 500型核磁共振波谱仪（瑞士Burker公司）；Quatrro质谱仪（Micromass公司）；LC3000 型高效液相色谱仪（北京创新通恒），YMC-Pack Pro C18半制备色谱柱（10 mm×250 mm，5 μm）；D-10l大孔吸附树脂（天津南开大学化工厂）；柱色谱硅胶（100～200，200～300目）和薄层色谱用硅胶G（青岛海浪硅胶干燥剂厂）；ODS（日本YMC公司）、Sephadex LH-20柱（Pharmacia公司）；预制硅胶板HSGF254（烟台市芝罘黄务硅胶开发试验厂）；RP-18高效薄层预制板（德国Merck公司）。本实验所用试剂均为天津科密欧公司分析纯和色谱醇产品。

药材于2011年8月采于陕西眉县太白山北坡，经陕西中医学院生药教研室王继涛高级实验师鉴定为珠子参P. japonicus var. major的叶，植物标本现保存于陕西中医学院标本馆，标本号ZZS201108。

2 提取与分离

珠子参干燥叶5 kg，用8倍量70%乙醇回流提取3次，每次1.5 h。合并提取液，减压浓缩得浸膏700 g。提取物以适量蒸馏水溶解，经D-101大孔吸附树脂（2 kg）柱色谱吸附，依次用水，30%，70%，95%乙醇洗脱，收集70%乙醇洗脱部分蒸干得浸膏105 g。取其中80 g，采用硅胶柱色谱分离，以氯仿-甲醇-水（1∶0∶0～0∶1∶1）梯度洗脱， 经TLC检测合并流分，共得到10个组分（A～J）。将组分A（3.12 g）进行硅胶柱色谱分离，以石油醚-乙酸乙酯（1∶0～0∶1）梯度洗脱，得Fr.A-1～Fr.A-5。采用Sephadex LH-20凝胶色谱柱对Fr. A-3（1.17 g）分离纯化，以氯仿-甲醇（1∶1）洗脱，得Fr.A-3-1～Fr.A-3-6。其中，Fr. A-3-3（235 mg）经HPLC制备（85%甲醇），得到化合物1（65 mg）。组分I（12.50 g）经硅胶柱色谱分离，以氯仿-甲醇-水（8∶2∶1～6.5∶3.5∶1）梯度洗脱得Fr. I-1～Fr.I-7。Fr. I-4（4.60 g）经ODS开放柱色谱（甲醇-水 40∶60～75∶25），得Fr. I-4-1～Fr. I-4-6。其中，Fr. I-4-5（560 mg）经HPLC制备（60%甲醇），得到化合物2（86 mg）。Fr. I-6（3.40 g）经ODS开放柱色谱（甲醇-水40∶60～85∶15），得Fr. I-6-1～Fr. I-6-7。其中，Fr. I-6-4（834 mg）经HPLC制备（60%甲醇），得到化合物3（12.5 mg）；Fr. I-6-6（658 mg）经HPLC制备（60%甲醇），得到化合物4（67 mg）。组分H（7.80 g）经硅胶柱色谱分离，以氯仿-甲醇-水（10∶1∶1～7∶3.5∶1）梯度洗脱得Fr. H-1～Fr. H-6。Fr. H-4（2.30 g）经ODS开放柱色谱（甲醇-水40∶60～85∶15），得Fr. H-4-1～Fr. H-4-5。其中，Fr. H-4-3（325 mg）经HPLC制备（68%甲醇），得到化合物5（25 mg）。其中，Fr. H-4-4（658 mg）经HPLC制备（65%甲醇），得到化合物6（67.3 mg）和化合物7（23.5 mg）。

3结构鉴定

化合物1黄色无定形粉末（甲醇），mp 203～205 ℃。盐酸-镁粉反应呈阳性，Molish反应呈阴性，10%硫酸-乙醇显黄色。ESI-MS m/z 307[M+Na]+，283[M-H]-；1H-NMR（Pyr-d5，500 MHz）δ：3.9（3H，s，8-OCH3），6.3（1H，s，H-3），10.8（1H，br s，7-OH），12.5（1H，s，5-OH）； 13C-NMR（Pyr-d5，125 MHz）δ：163.0（C-2），105.1（C-3），182.0（C-4），156.2（C-5），99.1（C-6），157.4（C-7），127.8（C-8），149.6（C-9），103.8（C-10），130.8（C-1′），129.3（C-2′），126.3（C-3′），122.0（C-4′），126.3（C-5′），129.3（C-6′），61.1（8-OCH3）。以上数据与文献[6]中数据一致，故鉴定5，7-二羟基-8-甲氧基黄酮。

化合物2白色无定形粉末（甲醇），mp 210～212 ℃。Liebermann-Burchard和Molish 反应呈阳性，10%硫酸-乙醇显紫红色。ESI-MS m/z 1 126[M+Na]+，1 102[M-H]-；1H-NMR（Pyr-d5，500 MHz）δ：0.85（3H，s，19-Me），0.96（3H，s，18-Me），0.98（3H，s，30-Me），1.11（3H，s，29-Me），1.30（3H，s，28-Me），1.63（3H，s，26-Me），1.65（3H，s，21-Me），1.68（3H，s，27-Me），2.03（3H，s，CH3CO-），4.93（1H，d，J=7.6 Hz，Glc1-H-1），5.15（1H，d，J=7.6 Hz，Glc2-H-1），5.34（1H，br t，J=6.7 Hz，H-24），5.39（1H，d，J=7.7 Hz，Glc3-H-1），5.68[1H，d，J=1.6 Hz，Ara（f）-H-1]； 13C-NMR（Pyr-d5，125 MHz）数据见表1。以上数据与文献[7]中数据一致，故鉴定为人参皂苷Rs2。

化合物3白色无定形粉末（甲醇），mp 216～218 ℃。Liebermann-Burchard和Molish 反应呈阳性，10%硫酸-乙醇显紫红色。ESI-MS m/z 1 156[M+Na]+，1 132[M-H]-；1H-NMR（Pyr-d5，500 MHz）δ：0.85（3H，s，19-Me），0.99（3H，s，18-Me），1.00（3H，s，30-Me），1.15（3H，s，29-Me），1.32（3H，s，28-Me），1.65（3H，s，26-Me），1.69（3H，s，21-Me），1.69（3H，s，27-Me），2.03（3H，s，CH3CO-），4.96（1H，d，J=7.6 Hz，Glc1-H-1），5.03（1H，d，J=7.0 Hz，Glc2-H-1），5.17（1H，d，J=7.8 Hz，Glc4-H-1），5.34（1H，br t，J=7.1 Hz，H-24），5.41（1H，d，J=7.7 Hz，Glc3-H-1）； 13C-NMR（Pyr-d5，125 MHz）数据见表1。以上数据与文献[8]中数据一致，故鉴定为西洋参皂苷R1。

化合物4白色无定形粉末（甲醇），mp 205～207 ℃。Liebermann-Burchard和Molish 反应呈阳性，10%硫酸-乙醇显紫红色。ESI-MS m/z 1 126[M+Na]+，1 102[M-H]-；1H-NMR（Pyr-d5，500 MHz）δ：0.84（3H，s，19-Me），0.98（3H，s，18-Me），1.00（3H，s，30-Me），1.12（3H，s，29-Me），1.28（3H，s，28-Me），1.60（3H，s，26-Me），1.65（3H，s，21-Me），1.65（3H，s，27-Me），2.03（3H，s，CH3CO-），4.92（1H，d，J=7.6 Hz，Glc1-H-1），4.95[1H，d，J=6.1 Hz，Ara（p）-H-1]，5.12（1H，d，J=7.8 Hz，Glc2-H-1），5.32（1H，br t，J=7.0 Hz，H-24），5.37（1H，d，J=7.7 Hz，Glc3-H-1）； 13C-NMR（Pyr-d5，125 MHz）数据见表1。以上数据与文献[7]中数据一致，故鉴定为人参皂苷 Rs1。

化合物5白色无定形粉末（甲醇），mp 185～186 ℃。Liebermann-Burchard和Molish 反应呈阳性，10%硫酸-乙醇显紫红色。ESI-MS m/z 939[M+Na]+，915[M-H]-；1H-NMR（Pyr-d5，500 MHz）δ：0.82（3H，s，19-Me），0.97（3H，s，18-Me），0.97（3H，s，30-Me），1.01（3H，s，29-Me），1.32（3H，s，28-Me），1.63（3H，s，26-Me），1.65（3H，s，21-Me），1.68（3H，s，27-Me），4.96（1H，d，J=7.8 Hz，Glc1-H-1），5.16（1H，d，J=7.8 Hz，Glc2-H-1），5.33（1H，br t，J=7.0 Hz，H-24），5.69[1H，d，J=1.6 Hz，Ara（f）-H-1]；13C-NMR（Pyr-d5，125 MHz）数据见表1。以上数据与文献[9]中数据一致，故鉴定为notoginsenoside Fe。

化合物6白色无定形粉末（甲醇），mp 189～190 ℃。Liebermann-Burchard和Molish 反应呈阳性，10%硫酸-乙醇显紫红色。ESI-MS m/z 939[M+Na]+，915[M-H]-；1H-NMR（Pyr-d5，500 MHz）δ：0.82（3H，s，19-Me），0.97（3H，s，18-Me），0.98（3H，s，30-Me），1.01（3H，s，29-Me），1.32（3H，s，28-Me），1.63（3H，s，26-Me），1.66（3H，s，21-Me），1.67（3H，s，27-Me），4.96（1H，d，J=7.8 Hz，Glc1-H-1），5.01[1H，d，J=6.2 Hz，Ara（p）-H-1]，5.15（1H，d，J=7.8 Hz，Glc2-H-1），5.34（1H，br t，J=7.0 Hz，H-24）；13C-NMR（Pyr-d5，125 MHz）数据见表1。以上数据与文献[10]中数据一致，故鉴定为人参皂苷 Rd2。

化合物7白色无定形粉末（甲醇），mp 193～194 ℃。Liebermann-Burchard和Molish 反应呈阳性，10%硫酸-乙醇显紫红色。ESI-MS m/z 939[M+Na]+ ，915[M-H]-；1H-NMR（Pyr-d5，500 MHz）δ：0.83（3H，s，19-Me），0.97（3H，s，18-Me），1.00（3H，s，30-Me），1.01（3H，s，29-Me），1.32（3H，s，28-Me），1.62（3H，s，26-Me），1.67（3H，s，21-Me），1.67（3H，s，27-Me），4.75（1H，d，J=7.6 Hz，Glc1-H-1），4.96（1H，d，J=7.8 Hz，Xly -H-1），5.15（1H，d，J=7.8 Hz，Glc2-H-1），5.34（1H，br t，J=7.0 Hz，H-24）； 13C-NMR（Pyr-d5，125 MHz）数据见表1。以上据与文献[11]中数据一致，故鉴定为gypenosiden IX。

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Chemical constituents of leaves of Panax japonicus var. major

HE Rui1， LIU Qi1， LIU Yin-huan1， CHAI Jiang1， 2， ZHAO Dong-dong1， WANG Wei1，2，

CUI Jiu-cheng1，2， SONG Xiao-mei1，2*， YUE Zheng-gang2，3*

（1.School of Pharmacy， Shaanxi University of Chinese Medcine， Xianyang 712046， China；

2. Collaborative Innovation Center for Chinese Medicine in Qinba Mountains， Xi′an 710032， China；

3. School of Pharmacy， the Fourth Military Medical University， Xi′an 710032， China）

[Abstract] Seven compounds were isolated from the leaves of Panax japonicus var. major by chromatographic methods including silica gel， Sephadex LH-20， ODS and semi-preparative HPLC. Their structures were elucidated by their physical and chemical properties and spectral data analysis as 5， 7-dihydroxy-8-methoxyl flavone（1）， ginsenoside Rs2（2）， quinquenoside R1（3）， ginsenoside Rs1（4）， notoginsenoside Fe（5）， ginsenoside Rd2（6） and gypenosiden IX（7）. Among them， compound 1 was obtained from the Panax genus for the first time， and compounds 2-7 were isolated from this plant for the first time.

[Key words] Panax japonicus var. major； chemical constituents； flavones； saponins

doi：10.4268/cjcmm20140918