肾穿组织综合病理技术方法探讨
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【中图分类号】R657.4【文献标识码】B【文章编号】1008-6455（2011）08-0439-01
近年来随着肾穿技术的广泛开展，肾活检组织病理检查已成为肾脏疾病诊断和研究不可缺少的重要内容［1］，我科自1996年～2009年对2149例肾活检标本应用综合病理技术，及时全面地保证了肾活检病理诊断，现介绍如下：
1 资料与方法
1.1 一般资料：收集1996年～2009年本院及外院送检肾穿刺活检标本共2149例，其中：男性1046例，女性1103例，男女之比1:1.05；年龄范围1岁～75岁，平均年龄为33.54岁，分别做光镜和电镜检查。应用规范的专项肾穿刺病理申请单和报告单模式，保证临床信息全面可靠。
1.2 方法：应用快速制样技术完成光镜和电镜的制备［2］，全过程在1.5d内完成。肾穿组织以FAA液（10%甲醛10ml、冰醋酸5ml、95%酒精85ml）固定2h，微波快速脱水、透明、浸蜡2h后包埋，2μm连续切片，分别作HE、Masson（马松三色）、PAS（过碘酸雪夫）、PASM（六胺银）染色，部分病例进行刚果红染色。免疫组化S-P法染色：选用抗体IgA、IgG、IgM、C3、COⅣ，部分病例增加乙型肝炎病毒抗原（HBsAg和HBcAg）检查（试剂均购自福州迈新公司）。电镜组织切成1mm3组织块2～4粒，立即投入4%戊二醛缓冲液固定2h，1%四氧化锇后固定30min，快速制样；LKB-V型超薄切片机半薄切片观察并定位，超薄切片70nm，醋酸铀及柠檬酸铅染色，日本JEOL-1010透射电镜观察。病例诊断参考WHO1995年肾脏疾病分类标准，由学习过肾穿病例诊断的主治医师、主任医师，应用逐级阅片（HE切片、特染、免疫组化、半薄切片和超薄切片）方法，结合临床实验室结果，进行综合病例诊断。
2 结果
2149例肾活检中光镜标本肾小球少于5个且无电镜资料的归入未明确诊断80例（5.9%）；完整光镜和电镜样品2069例中256例（13.83%）电镜未找到肾小球，综合病例诊断1594例，占全部资料的74.17%。
3 讨论
肾穿刺活检组织新鲜，具有适合病理光镜和电镜检查的特点，为及时全面地提供高质量的各项技术切片，保证肾活检病理诊断的及时性和准确性，我们在工作中结合肾活检组织固定、HE切片、特染染色、免疫组织化学染色和电镜技术的特点，将各项方法相互结合形成综合技术，为肾活检综合病理诊断创造了较好的条件。
3.1 及时选择适宜固定液：对一次性穿刺的肾组织经分离取材后，选用FAA固定液固定光镜肾组织，选用4%戊二醛缓冲液做为电镜组织固定液，组织固定时间均为2h，较好地保证肾活检组织结构完好性。
3.2 同步光镜、电镜组织快速制样：光镜组织采用微波快速制样，全过程30min左右，缩短制样时间，浸蜡及包埋采用石蜡松香，以加强切片的延展性。电镜组织采用快速制样技术，全过程1.5d完成，与光镜HE、特染、免疫切片同时提交，为医生综合诊断提供条件。
3.3 光镜组织集中制片：HE、特染、免疫组化切片一次性完成，即省时，切片质量好，减少肾小球丢失率。切片时选用精度达到1μm性能良好的切片机，切片厚度为2μm；蜡块修切平整后力争一次性制片20余张；选用防脱载玻片，分别捞到10张玻片上，每张保证2张切片；因切片菲薄，为避免皱折选用由20℃～45℃水温二次展片法捞片；以备HE、特染及免疫组化染色。
3.4 同步式HE、特染染色：HE染色及三种特染同时展开，每一染色法使用固定专用配套的染色缸防止交叉影响。其中PAM染色采用二次染液法，即：工作液染色过程中，待切片出现淡黄色时立即更换新配制工作液继续染至出现黑色沉淀，避免过染的问题。
3.5 石蜡切片免疫组织化学染色法：肾穿组织免疫方法可采用荧光法和免疫组化法，我们体会冰冻荧光免疫法虽方法相对简单，单需增加冰冻切片等工作程序，切片不能长期保存，若肾穿标本量少则难于保证需要。免疫组织化学法不但能将形态学改变与免疫特征结合起来，易于保存并便于观察；从技术工作角度可在石蜡切片过程中一次性完成制片，克服冰冻荧光免疫分次制片和肾标本量少的问题；我们采用S-P即用法，各抗体在肾组织中均能较好的显示免疫特征。
3.6 专项技术专人负责是质量保证：工作中定技术岗，利用专项业务提高综合技术水平；同时参加医师读片，增加辨认肾组织结构及各项染色特征的能力，及时把握各项技术条件指标，增加工作的主动性，保证肾穿综合技术水平稳定有序发展。
参考文献
［1］ 王泊云，李玉松等主编. 病理学技术［M］. 人民卫生出版社，2001:948-953
［2］ 唐新萍，邹赛英，邱敬芝，等. 肾穿组织快速电镜制样技术探讨［J］. 西北国防医学杂志，2004:25（4）：318