茭白中农药残留酶速测法假阳性消除研究

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[摘 要] 酶速测方法是基于不同有机磷农药和氨基甲酸酯农药对胆碱酯酶活性抑制程度不同而对农药残留快速检测的方法。但茭白等样本经常出现检测假阳性问题。本实验针对茭白在农药残留酶速测中出现的假阳性问题，对样本前处理方法进行改进，以消除实验中出现的假阳性。研究了茭白样本剪切长度以及在加酶前对样本提取液进行加热处理后的效果。实验结果表明，该方法在一定范围内可以消除茭白的假阳性问题。

[关键词] 酶速测 假阳性 茭白

[中图分类号] TS207.53 [文献标识码] A [文章编号] 1003-1650 （2013）06-0120-01

为了快速测定蔬菜中有机磷农药和氨基甲酸酯类农药残留，保障食品安全，农药残留的酶速测技术得到了飞快发展，但此方法在测定某些特殊种类的蔬菜样本时，容易出现假阳性，干扰测定结果，从而导致农药残留数据可靠性降低，结果评价误差增大，同时，对市场现场检测执法带来了很大困扰。用酶速测方法快速测定蔬菜中农药残留时韭菜、茭白、萝卜等样品经常出现假阳性结果。酶速测磷和氨基甲酸酯类农药对胆碱酯酶的活性有抑制作用，其抑制率与农药浓度呈正相关，用特制的分光光度计（农残速测仪）测定吸光值的变化，计算出抑制率，从而判断出蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯的残留情况。为了消除茭白中农药残留测定假阳性问题，本实验对酶速测法前处理环节进行研究和改进。

一、材料与方法

1.仪器与试剂

RP-410NM农药残毒快速检测仪北京瑞利分析仪器公司；电子天平（准确度0.1g）上海精密科学仪器有限公司；恒温水浴上海爱朗仪器有限公司；移液枪（2～50μl，1～5ml）；不锈钢取样器以及其他玻璃仪器。酶速测试剂（深圳兆赫实业有限公司）：pH8磷酸盐缓冲液溶解；丁酰胆碱酯酶：用磷酸盐缓冲液溶解，ΔA值控制在0.4～0.8之间；底物：碘代硫化丁酰胆碱（BTCI），用磷酸盐缓冲液溶解；显色剂：二硫代二硝基苯甲酸（DTNB），用磷酸盐缓冲液溶解。

2.检测过程

取2g切碎的茭白样本，放入提取瓶内，加入20ml磷酸盐缓冲液，2500r/min涡旋振荡2min，倒出提取液，静止3～5min；于小试管内分别加入50μl酶液，3ml样本提取液，50μl显色剂，于37～38℃下放置30min后再分别加入50μl底物，倒入比色杯中，用酶速测仪进行测定。

二、结果与分析

1.前处理条件优化研究

1.1茭白样品切碎长度对抑制率的影响

将不含农药残留的茭白样品分别切成1.0cm和2.5cm长，按1.2进行检测，结果见表1。

从表1中可以看出，样品长度为1.0cm时抑制率明显的高于样品长度为2.5cm时的抑制率。由于中华人民共和国农业行业标准NY/T 448-2001（蔬菜上有机磷和氨基甲酸酯类农药残留快速检测方法）中样品切碎长度要求为1～1.5cm，而且在实际测定中样品长度太长不利于农药残留测定，因此选择样品长度1.0cm继续进行加热与不加热对抑制率影响的比较。

1.2样品提取液不同温度处理对抑制率的影响

选用茭白剪切长度为1.0cm，按1.2在不同温度下对样品提取液加热1min，测定其抑制率，结果见表2。

1.3在同一温度下对样品提取液加热不同时间的抑制率在80℃对样品提取液分别加热1、2、3min后，测定其抑制率的变化，结果见表3。

从表2可以看出，加热对抑制率的影响。随着加热温度越高，抑制率降低，假阳性影响减小。室温下平均抑制率为50.8%，而加热后抑制率显著降低，90℃时平均抑制率仅为16.1%。由于80℃和90℃处理时抑制率相差不大。考虑到温度太高可能会造成样品中残留农药的分解，因此选择8 0℃进行下一步研究。

从表3中可以看出，加热温度不变时，加热时间对抑制率的影响不是很明显，因此选择加热时间较短处理比较合理。本研究选择加热时间为1min。

通过以上研究确定农药残留速测法优化条件：样品长度1cm左右，加热温度80℃，加热时间1min。

三、结论

本实验研究了样品剪切长度、加热处理对茭白在酶速测检测中假阳性消除效果。该方法表明，加热处理可以在一定程度上消除酶速测中假阳性影响，从而提高酶速测对茭白样品中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留快速检测的准确性。

参考文献

[1]沈海斌，樊晓青，郁樊敏，等.几种蔬菜对酶的抑制率实验初报[J].上海蔬菜，2004（5）：15-17.

[2]藤葳，柳琪，张海松，等.NY/T 448-2001标准方法的验证分析[J].食品研究与开发，2003，24（2）：95-96.

[3]NY/T 448-2001蔬菜上有机磷和氨基甲酸酯类农药残毒快速检测方法[S].