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两种方法对阿米巴包囊染色效果的比较

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【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】1004-7484(2013)03-0585-01

在临床检验,寄生虫学教学与研究工作中,制备染色清晰又可长期保存的标本,对现实重提形态结构和鉴别虫种非常重要。有关原虫的染色重点在细胞核的染色,其染料有苏木精、胭脂红、甲苯胺蓝等,其中以哈氏(Harris)、费氏(Delafield)、梅氏(Mayer)苏木等应用最多,我们收集并含有溶组织内阿米巴和结肠内阿米巴包囊的粪便,分别采用快速染色法和梅氏苏木精染色法进行染色,比较其染色效果,结果报告如下:

1.染色方法及染色步骤

1.1 快速染色法

据Lawless报道【1】,配制固定染色液:丙酮、冰醋酸各50ml,乙醛溶液10ml,肖氏液890ml(肖氏液由氯化高汞饱和于蒸馏水中2份加95%酒精1份组成,临用时每100ml加冰醋酸5ml),酸复红1.25g,耐绿0.5g,储存于棕色玻瓶中备用。

染色步骤:先取粪便直接涂于盖玻上呈薄层状,待干燥之前,即加固定染色液盖满涂片,经2分钟使之固定和染色,再把标本片放在酒精灯上慢慢加热,至有蒸气出现为止(切勿煮沸),即以自来水缓缓冲洗,然后放入50%和70%酒精中,各经30秒钟,再放入90%及纯酒精中,各15秒钟,再用纯二甲苯透明1分钟,最后用中性树胶封固于载玻片上,便可镜检,全过程只需10分钟。

1.2 梅氏苏木精染色法【2】

染液配制:苏木精1.0g,碘酸钠0.2g,钾明矾50.0g,蒸馏水100.0ml。先取钾明矾溶于蒸馏水中,再放苏木精,最后加碘液钠,不断振荡,溶解后保存于棕色瓶中,用纱布遮口,让其氧化成熟后(约2个月)可用。

染色步骤:先取粪便直接涂于盖玻片上呈薄层状,待干前,用42℃肖氏液固定5分钟,再以2%碘酒精脱汞(数小时或过夜),置70%酒精中,经60%,50%,40%和30%酒精,每次10分钟,移入水中,再放入染液中染色2天,用自来水充分洗净(约10分钟),后用1%盐酸褪色,流水冲洗后,再经逐级酒精脱水,二甲苯透明,各1―2分钟,最后用中性树胶封固于载玻片上便可镜检,全过程需2天以上。

2.结果

两种染色方法所染的玻片标本,顺序观察溶组织内阿米巴包囊120个和结肠内阿米巴包囊120个(其中一组为121个),按附表项目进行观察记录,加以比较。

结肠内阿米巴两种染色法经卡方检验=23.48 P

3.讨论

通过细胞核(核膜,染色质粒的清晰与否和核仁的显示与否),细胞质,囊壁的比较观察,表明两种染色方法对溶组织内阿米巴包囊的染色效果,除细胞质在梅氏染色法较好外,其余大致相仿,差别无显著性(P>0.05)。但对结肠内阿米巴包囊染色效果,则以快速染色法较好,对包囊的结构显示较为满意(P

参考文献:

[1] 薛燕萍,黄松如,甘少伯(译).肠道寄生虫指南(世界卫生组织) [M].常1版.北京:人民出版社,1998.

[2] 王维忠,徐新力,单颖,等.活体溶组织内阿米巴滋养体简易染色方法的研究[J].热带医学杂志,2005,5(3):289―290.