高效液相色谱法测定鼻通丸中木兰脂素含量

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摘 要：目的：建立鼻通丸中木兰脂素的含量测定方法。方法：采用高效液相色谱（HPLC）法，岛津C18柱（200 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈-四氢呋喃-0.1%冰醋酸溶液（35∶1∶65）；检测波长：278 nm；柱温：35℃；流速：0.8 ml/min。结果：中木兰脂素进样量线性范围为74.8～1122 ng，y=407.01x+1418.3，R2=0.9997，平均加样回收率为100.82%，RSD为1.25%（n=6）。结论：HPLC法简单可行、结果可靠，专属性强，灵敏度高，重复性好，可用于定量控制鼻通丸的质量。

关键词：鼻通丸 木兰脂素 高效液相色谱法

中图分类号：R19 文献标识码：A 文章编号：1672-3791（2014）01（c）-0255-02

鼻通丸用于清风热，通鼻窍。用于外感风热或风寒化热，鼻塞流涕头痛流泪，慢性鼻炎。本方由7味药组成。本方为治外感风寒，邪郁化热引起的鼻塞、鼻渊等症的有效成药。方中苍耳子、辛夷、白芷辛散，疏风散寒通窍，为君药；辅以薄荷、黄芩散风清热，为臣药；鹅不食草祛湿化浊，为佐药；甘草为使，调和诸药。诸药合用，共奏疏风清热，通鼻窍之用。经过多年的临床应用收到良好的治疗效果，为了控制制剂的质量，我采用高效液相色谱法对方中的君药辛夷药材中的木兰脂素的含量进行了相应的测定，而这样就是为了保证制剂的质量问题。本文主要论述了对鼻通丸中的木兰脂素的含量运用高效液相色谱法中的外标法进行测定，根据测定结果可知，本文采用本方法在操作上简单、可靠，同时的在灵敏上也比较准确，可以作为该制剂含量的测定方法。

1 仪器与试药

日本岛津全自动高效液相色谱仪，型号：LC-20AT，配备LC工作站；UV―2600型紫外分光光度计。木兰脂素对照品（中国食品药品检定研究院，批号为110709-200505，供含量测定用）；鼻通丸（北京同仁堂股份有限公司同仁堂制药厂，产品批号为20120501、20120106、201201007）；乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：岛津C18柱（200 mm×4.6 mm，5μm）；流动相：乙腈-四氢呋喃-0.1%冰醋酸溶液（35∶1∶65）；检测波长：278 nm；柱温：40℃；流速：0.8 mL/min；进样量：10 μL。按外标法一峰面积计算含量。

2.2 溶液制备

对照品溶液的制备：取木兰脂素约10 mg的对照品，进行精密的称定，放置到量瓶为25 mL当中，加入甲醇进行溶解，并且稀释至刻度值，将其摇至均匀，在对其进行精密吸取1 ml溶液，放置到量瓶为10 ml中，再次加入甲醇溶液进行溶解，稀释到刻度值，摇至均匀，就得到了对照品的溶液。

供试品溶液的制备：取本品10丸，剪碎，研细，细粉末约3 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密量取50 ml甲醇，加入锥形瓶中，称定重量。加热回流30 min，放冷，称定重量，以甲醇补充失去的重量，摇匀，滤过，取续滤液5 ml，蒸干，加水10 ml，加热使其溶解，加三氯甲烷提取3次，每次10 ml，合并三氯甲烷液，减压回收三氯甲烷，残渣加甲醇10 ml，作为供试品溶液。

阴性对照溶液的制备：取1个处方量的苍耳子、白芷、薄荷、黄芩、鹅不食草、甘草的药材，按样品制备方法制备出缺辛夷的阴性样品，按供试品溶液配制方法配制，作为缺辛夷的阴性样品溶液。

2.3 方法学考察

2.3.1 阴性干扰试验

取供试品溶液、对照品溶液及阴性对照品溶液，按拟订的色谱条件测定。供试品溶液与对照品溶液色谱图中具有相同保留时间的色谱峰，而阴性无干扰。

2.3.2 线性关系考察

精密称取木兰脂素对照品9.35 mg，置25 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，精密吸取对照品溶液0.2，0.5，1.0，2.0，3.0 ml，分别置10 mL量瓶中，作为系列对照品溶液，分别吸取10 μL，以进样量（ng）为横坐标、峰面积积分值为纵坐标绘制标准曲线。

得回归方程y=407.01x+1418.3，R2= 0.9997。结果表明木兰脂素进样量线性范围是74.8～1122 ng。

2.3.3 精密度试验

取木兰脂素对照品溶液。精密吸取对照品溶液10 μL，连续进样6次，依法测定。结果的RSD=0.31%（n=6），表明仪器精密度良好。

2.3.4 稳定性试验

精密吸取同一供试品溶液，在放置0，1，2，4，8 h时分别进样测定。结果含量的RSD=1.31%（n=5），表明供试品溶液在8 h内稳定。

2.3.5 重现性试验

分别称取同批号样品6份，研细，制备供试品溶液。按供试品溶液制备方法制备溶液，依法进样测定。结果含量的RSD= 0.93%（n=6），表明方法重现性良好。

2.3.6 加样回收试验

在已知含量的样品粉末中，加入一定量的木兰脂素对照品，按供试品溶液制备方法制备溶液，依法测定并计算回收率（如表1）。

由结果可见，回收率平均值为100.82%，在95%～105%之间，RSD值为1.25%。测定方法回收率良好。

2.4 样品含量测定（如表2）

3 讨论

取木兰脂素对照品适量，用甲醇溶解，在200～400 nm波长范围内扫描，结果木兰脂素在278 nm处有最大吸收，故选278 nm作为检测波长。

在试验过程中，曾采用甲醇-水（20∶80）、乙腈-0.3%磷酸酸溶液（80∶20）等多种流动相，结果色谱峰分离效果均不理想而未被采用。文中选用的流动相乙腈-四氢呋喃-0.1%冰醋酸溶液（35∶1∶65）分离效果较好，且保留时间较短。实验中还考察了不同柱温（10、25、35、40 ℃）对色谱分离效果的影响，结果各柱温对分离效果、保留时间的影响有明显区别，柱温为35 ℃分离效果好。因此确定以柱温为35 ℃。

参考文献

[1] 中华人民共和国药典（一部）[M].化学工业出版社，2010.