顶空气相色谱法测定氨磷汀中有机溶剂的残留

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摘 要：目的：建立顶空气相色谱（HS-GC）测定氨磷汀中残留溶剂甲醇、乙醇方法。方法：采用 RTX-624色谱柱（30m×0.53mm×3.0？m），N2为载气，氢火焰离子化检测器，水为溶剂，顶空进样，外标法计算残留溶剂的含量。结果：甲醇、乙醇均能完全分离；甲醇在36.3～362.5μg/ml ，乙醇在30.1～1803.9μg/ml的范围内线性关系良好；平均加样回收率甲醇为105.0%（RSD=3.2%，n=9），乙醇为103.9%（RSD=5.4%，n=9）。

关键词：氨磷汀 顶空气相色谱法 有机溶剂残留量

氨磷汀是一种细胞保护剂类药物，对大多数抗肿瘤细胞毒类药物或放射治疗所产生的毒副作用，能明显保护正常细胞免受损害，而不影响其抗肿瘤活性，且毒性较小，用于肿瘤放疗或细胞毒性化疗的辅助治疗。但由于在合成中使用了甲醇、乙醇、等有机溶剂，根据目前新药审批对有机溶剂残留量的要求，必须对原料药中的有机溶剂残留量进行考察，因此开发和制定了用顶空气相色谱法测定氨磷汀中有机溶剂残留量的方法，并进行了方法学验证。

一、仪器与试药

1.仪器 Agilent7890A型气相色谱仪及工作站，Agilent7694E顶空进样器；

2.试药 氨磷汀原料药3批，分别为120312、120313、120314。

二、色谱条件及顶空条件

色谱柱：RTX-624（6%氰丙基苯基-94%二甲基聚硅氧烷）毛细管色谱柱（30m×0.53mm×3.0μm）；进样口温度：150℃；检测器温度：280℃；柱温程序：40℃保持3分钟，然后以25℃/min升温至200℃，保持5分钟；分流比：4：1；柱头压：4.0psi；进样量：1ml顶空气体；顶空瓶温度：70℃；定量环温度：85℃；传输管温度：105℃；样品平衡时间：30分钟。

三、试验内容

1.系统适用性实验：（可接受标准：甲醇、乙醇的理论塔板数应大于5000，重复进样6针的RSD%≤10%，残留溶剂与相邻峰的分离度应大于1.5）。

根据《中国药典》残留溶剂限度规定，精密称取甲醇34.7mg、乙醇155.1mg至100ml容量瓶中，用纯化水稀释并定容；连续进样6针，计算峰面积的RSD%，确认甲醇、乙醇与相邻峰的分离度及柱效。

结果：峰面积的RSD%，甲醇、乙醇与相邻峰的分离度及柱效均符合规定。

2.精密度试验

方法精密度：（可接受标准：每个残留溶剂含量的RSD%≤10.0%）（未检出的残留溶剂不需要验证）

精密称取批号为120312、120313、120314的样品各一份，每份0.2g，分别连续进6针，分别计算每批样品甲醇、乙醇峰面积的RSD%。此三批样品中甲醇、乙醇均未检出。

3.最小检测限（LOD）与方法定量限（LOQ）： 以稀释溶媒（纯化水）为空白，连续进样3次，记录在被测溶剂出峰时间范围内的仪器噪声水平，并计算平均噪声。精密称取甲醇28.0mg、乙醇120.6mg置100ml容量瓶中，用纯化水稀释并定容，逐步稀释至一定浓度并进样。计算其峰高与噪声的比值，其信噪比（S/N）在3±1，即2～4时的样品浓度即为最小检测浓度，其相当于理论样品浓度的比值为最小检测限（最少测定2次）；其信噪比（S/N）在10±1，即9～11时的样品浓度即为定量限浓度，其相当于理论样品浓度的比值为定量限（最少测定3次），最小检测限甲醇为84.0ppm、乙醇为78.4ppm；定量限甲醇为336.0ppm，乙醇为313.6ppm.。

4.线性（可接受标准：线性回归的相关系数应≥0.9990）

4.1线形回归点的选取：选择甲醇浓度为0.03mg/ml、0.072mg/ml、0.18mg/ml、0.30mg/ml、0.36mg/ml五点为线形回归点；选择乙醇浓度为0.03mg/ml、0.15mg/ml、0.30mg/ml、1.5mg/ml、1.8mg/ml五点为线形回归点。

4.2溶液的配制：精密称取甲醇604.2mg置100ml容量瓶中，用水稀释并定容，作为储备液①；精密称取乙醇3006.5mg置100ml容量瓶中，用水稀释并定容，作为储备液②；精密吸取6ml储备液①置100ml容量瓶中，用水稀释并定容，作为储备液③；精密吸取5ml储备液②置100ml容量瓶中，用水稀释并定容，作为储备液④。

精密吸取6ml储备液①，6ml储备液②分别置100ml容量瓶中，用水稀释并定容，作为浓度点Ⅰ；

精密吸取5ml储备液①，5ml储备液②同法制成为浓度点Ⅱ；

精密吸取5ml储备液③，2ml储备液④同法制成为浓度点Ⅲ；

精密吸取2ml储备液③，1ml储备液④同法制成为浓度点Ⅳ；

精密吸取10ml储备液③，2ml储备液④同法制成为浓度点Ⅴ。

进样：取Ⅰ-Ⅴ系列溶液，依次进样，每个浓度点进样两次，计算每个浓度点的峰面积平均值。

4.3以溶剂浓度对相应的平均峰面积做回归曲线，计算回归方程及相应的线性回归系数，其中甲醇为

回归方程：A= 751.03C ╞ 6.3686 ；相关系数r=0.9991。乙醇回归方程为：A = 1373.5X ╞ 17.57；相关系数r=0.9998。

5.方法准确度（可接受标准：80%≤回收率≤120%）

5.1浓度的选取：选择溶剂的LOQ、100%规格、120%规格3个溶液浓度点。

5.2配液及进样：①选择一批有代表性的氨磷汀样品，定量称样12份，每份精密称取0.2g，分别置100ml容量瓶中，用纯化水稀释至刻度，配制成残留溶剂测试样品溶液。②配制相应浓度的溶液（LOQ、100%规格、120%规格）。③在12份残留溶剂测试溶液中选择9份溶液分别定量添加LOQ、100%规格、120%规格3个溶液的标准溶液，每个浓度的溶液添加3份，制成方法准确度验证的样品溶液。④另外3份作为空白对照，所配溶液各进一针。

5.3分别测得的平均加样回收率甲醇为105.0%（RSD=3.2%，n=9），乙醇为103.9%（RSD=5.4%，n=9）。

四、结论

通过上述的验证，说明本文所建立的甲醇、乙醇的顶空气相色谱法灵敏度高、准确性好，方法简便，适用于氨磷汀残留溶剂的检验。

参考文献

[1] 李浩春.《分析化学手册-气相色谱分析》.第二版. 北京：化学工业出版社，1999.

[2]中国药典[S].2010年版.二部.附录Ⅷ：61.