透明质酸钠注射液细菌内毒素检查法的研究

开篇：润墨网以专业的文秘视角，为您筛选了一篇透明质酸钠注射液细菌内毒素检查法的研究范文，如需获取更多写作素材，在线客服老师一对一协助。欢迎您的阅读与分享！

[摘要] 目的:建立透明质酸钠注射液的细菌内毒素检查法。方法:按2005版《中国药典》二部中的“细菌内毒素检查法”,用不同厂家的鲎试剂对不同批号的透明质酸钠注射液分别进行干扰试验。结果:透明质酸钠注射液的检测浓度≤5 mg/ml时对细菌内毒素检查法无干扰。结论:透明质酸钠注射液按限值L=0.05 EU/ml进行细菌内毒素检查是可行的。

[关键词] 透明质酸钠注射液;细菌内毒素检查法;鲎试剂;干扰试验

[中图分类号]R927.1 [文献标识码]A [文章编号]1673-7210(2009)07(b)-045-03

Study on the test method of bacterial endotoxin in Sodium Hyaluronate Injection

PAN Weisong1, XIAO Ying2

(1.Institute for Drug Control of Guangzhou, Guangzhou 510610, China; 2.College of Pharmacy, Ji'nan University, Guangzhou 510632, China)

[Abstract] Objective: To establish a bacterial endotoxin test for Sodium Hyaluronate Injection. Methods: According to the Bacterial Endotoxins Test in Chinese Pharmacopoeia edition 2005, different batches of Sodium Hyaluronate Injections from different LAL manufacturers were underwent the interference tests. Results: There was no interference in the bacterial endotoxin test when the concentration of Sodium Hyaluronate Injection is less than or equal to the detection limit 5 mg/ml. Conclusion: Carrying out the bacterial endotoxin test by the limit L of 0.05 EU/ml is feasible for Sodium Hyaluronate Injection.

[Key words] Sodium Hyaluronate Injection; Bacterial endotoxin test method; TAL; Interference experiment

透明质酸钠是广泛存在于人体内的生理活性物质,是由葡萄糖醛酸和乙酰氨基乙糖组成双糖单位聚合而成的一种黏多糖。透明质酸钠注射液是透明质酸的注射用制剂,关节腔内注射可用于变形膝关节病和肩关节周围炎的辅助治疗,关节腔内给予外源性的透明质酸钠,可保护软骨、抑制炎症反应、利于软骨修复、改善功能,从而可以缓解症状,增加关节活动度[1]。透明质酸钠注射液也可作为眼科手术辅助用药,前房内注射可用于白内障囊内、囊外摘除术,抗青光眼手术,角膜移植手术等,也可用于术后肠粘连[2]。为探讨采用细菌内毒素检查法检测透明质酸钠注射液的可行性,笔者参照2005 版《中国药典》二部中“细菌内毒素检查法”的应用指导原则,对本品进行了细菌内毒素检查方法学的研究,现报道如下:

1 仪器与试药

1.1 仪器

SUB14恒温水浴锅(英国 GRANT公司);MSI旋涡混合器(广州IKA公司)。

1.2 试药

细菌内毒素工作标准品(规格:140 EU/支,批号:150601-200758)及细菌内毒素检查用水(BET水,规格:50 ml/支,批号0612130)均购自中国药品生物制品检定所;鲎试剂(TAL)A(湛江安度斯生物有限公司,规格:0.1 ml/支,批号:0802201,灵敏度:0.25 EU/ml);TAL B(厦门市鲎试剂实验厂有限公司,规格:0.1 ml/支,批号:080103,灵敏度:0.25 EU/ml);透明质酸钠注射液(规格:2 ml∶20 mg,批号:096200、095910、095600、112800、113300、113700)。

2 方法与结果

2.1 细菌内毒素限值的确定

根据企业所附标准:透明质酸钠注射液细菌内毒素限值为0.05 EU/mg。

2.2 鲎试剂灵敏度复核试验

按照 2005版《中国药典》二部附录“细菌内毒素检查法”规定,进行鲎试剂的标示灵敏度(λ)复核。结果见表 1。

表 1 鲎试剂灵敏度复核试验结果(EU/ml)

Tab.1 TAL sensitivity test results for review(EU/ml)

由表1可见,2批鲎试剂经细菌内毒素工作标准品检查,λC均在0.5λ～2.0λ之间,结果均符合规定。

2.3 干扰预试验[3]

2.3.1 荧光素钠注射液有效稀释浓度(MVC)的计算:根据公式MVC=λ/L,其中L为透明质酸素钠注射液的细菌内毒素限值0.05 EU/mg,λ为鲎试剂标示灵敏度,目前市售鲎试剂灵敏度λ通常在0.50～0.03 EU/ml,则透明质酸钠注射液的对应有效稀释浓度为:C0.5=0.5/0.05=10.000 mg/ml,C0.25=0.25/0.05=5.000 mg/ml,C0.125=0.125/0.0500=2.500 mg/ml,C0.06=0.06/0.05=1.250 mg/ml,C0.03=0.03/0.05=0.625 mg/ml。

2.3.2 预试验:将上述系列浓度溶液记为NPC。同时在上述NPC液中加入细菌内毒素标准溶液,使每一浓度的试验液中均含有2λ浓度的细菌内毒素,记此系列溶液为PPC。取两个不同厂家的鲎试剂,分别与上述PPC和NPC进行反应,每一浓度重复两管,并设阳性和阴性对照。结果见表2。

由预干扰试验结果可以初步了解:两个厂家的鲎试剂对透明质酸钠注射液的细菌内毒素的试验结果在10 mg/ml以下浓度时均无干扰。

2.4 正式干扰试验

为了最终确认透明质酸钠注射液是否存在干扰因素的影响,笔者进行了正式干扰试验:取透明质酸钠注射液用BET水分别进行稀释,使其最终干扰试验浓度为5 mg/ml,按2005版《中国药典》二部附录中的“细菌内毒素检查供试品干扰试验项”进行试验,结果见表3。由表3可知,透明质酸钠注射液在5 mg/ml 浓度时Es/Et均在0.5～2.0范围之内,确认在5 mg/ml及以下浓度时无干扰。

2.5 样品细菌内毒素检查

按2005版《中国药典》中“细菌内毒素检查法”,使用2批不同厂家的鲎试剂分别对样品进行细菌内毒素检查,并同时设立样品的自身阳性对照品,结果见表4。

3 讨论

由干扰预试验结果可以初步发现,透明质酸钠注射液在10 mg/ml以下稀释浓度时对两个厂家生产的鲎试剂均无干扰作用。正式干扰试验用5 mg/ml样品浓度且用两个厂家的鲎试剂结果Es/Et均在0.5～2.0范围之内,确认在5 mg/ml及以下浓度时无干扰,限值定为0.05 EU/mg。透明质酸钠注射液可适用细菌内毒素检查法,鲎试剂灵敏度应为0.25 EU/ml或0.25 EU/ml以上[4-8]。

[参考文献]

[1]赵明杰,刘斌,周丰慧.透明质酸钠注射液治疗膝骨性关节炎的临床观察[J].实用医学杂志,2006,22(22):2661-2663.

[2]沈龙.临床应用透明质酸钠预防术后肠粘连的效果分析[J].中国现代药物应用,2008,2(5):99.

[3]国家药典委员会.中国药典[S].二部.北京:化学工业出版社,2005:附录85.

[4]郑霞,赵毓梅,刘春.葛根素注射液细菌内毒素检查[J].中国药房,2007,18(16):1254-55.

[5]王梅娟,谢斌.醒脑静注射液细菌内毒素检测方法的建立[J].中国医药导报,2008,5(34):12-13.

[6]汪穗福,苏广海,劳海燕,等.对中国药典(2005年版一部)细菌内毒素检查法的建议[J].中医药信息,2004,21(1):57-58.

[7]钟.医用透明质酸钠预防粘连性肠梗阻的疗效观察[J].当代医学:学术版,2008,19(8):109-110.

[8]张伟健,王辉,李镇伟,等.医用透明质酸钠防止腹部手术肠粘连的效果[J].广东医学,2007,28(6):67-68.

(收稿日期:2009-02-27)