采用薄层层析―硅胶柱层析法考察不同展开剂的层析效果

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摘要：目的 研究探讨采用薄层层析-硅胶柱层析法考察不同展开剂的层析效果。方法 以超临界二氧化碳萃取得到的青蒿素粗品作为研究对象，分别采用薄层层析和硅胶柱层析的方法对不同展开剂的层析效果进行研究，选择最合适的展开剂。结果 观察五种展开剂下，青蒿素样品溶液经薄层层析后的结果，可见展开剂为石油醚-乙酸乙酯（80：20）和正己烷-乙醚（80：20）的情况下，溶质的溶解性和选择性都比较好，可以作为柱层析的洗脱剂。观察两种洗脱剂下的柱层析分离效果，可见选择石油醚-乙酸乙酯（80：20）作为洗脱剂青蒿素的收率以及纯度等均显著高于正己烷-乙醚（80：20）为洗脱剂的情况。结论 在进行中药材的提取纯化过程中，通过薄层层析-硅胶柱层析的方法对不同展开剂的层析效果进行考察，获得最优工艺条件，可以提高其纯化程度。

关键词：薄层层析；硅胶柱层析；展开剂；层析效果

中草药是我国传统医学的瑰宝，在现代医学的体系下，中草药的有效成分提取、鉴别与纯化是其发展的一个方向。在其提取过程中常常需要使用层析法来进行初步的鉴定，而随着植化工作的不断深入研究，选择合适的展开剂是对药物的研究发展有重要的意义。展开剂的选择不恰当，不仅费时，还造成了药物的浪费。利用薄层层析的方法研究不同展开剂的比移值，是物质鉴定的重要参数[1]。这个参数的确定不仅与被测物质的极性、固定相吸附剂的吸附能力有关，也与展开剂的极性、洗脱能力等有关[2]，本文以超临界二氧化碳萃取得到的青蒿素粗品作为研究对象，在被测物、固定相吸附剂等都确定的条件下，研究获得青蒿素纯品应选择的最佳展开剂。具体报告如下。

1资料与方法

1.1一般资料 实验对象：黄花蒿全草（经自然晒干后做粉碎、筛分处理）、青蒿素对照品（青蒿素的含量可达99.8%）。试剂：石油醚、乙酸乙酯、乙醚、正己烷、丙酮，均为分析纯。

实验材料和仪器：粗孔柱层析硅胶，粒度在100目～200目之间，为试剂级薄板、低压层析玻璃柱、电子天平、旋转蒸发器。

1.2方法 薄层层析：称取硅胶并以蒸馏水调匀（避免气泡的产生），将其均匀涂布在洗干净的薄板上，并控制硅胶层的厚度在0.25mm左右。薄板在室温下晾干之后，高温活化、干燥后备用于备用。选择100μl的移液器将样品青蒿素溶液和青蒿素对照品溶液点在距离薄板下缘1cm处，要求点样时对样品浓度、点样斑点大小2～3mm[3]、点与点之间的距离（一般为2cm左右）等进行严格控制。待薄板上的溶液发挥干燥之后将其置于不同展开剂饱和的层析瓶中（展开剂包括5种，分别包括石油醚-丙酮，比例为70：30；石油醚-乙醚，比例为60：40；石油醚-乙酸乙酯，比例为80：20，正己烷-乙醚，比例为80：20；正己烷-乙酸乙酯，比例为85：15），注意点样点不能被展开剂所浸润，盖好盖子静置展开，直到展开液前沿线到达薄板的上缘后可以停止，取出薄板，均匀喷洒显色剂[4]（1%的香草醛浓硫酸），室温下将其晾干后，可见青蒿素斑点呈现鲜黄色，之后变成蓝色。计算不同展开剂下的比移值（Rf值）。根据不同展开剂下青蒿素的比移值、组分斑点的相对距离等，选择柱层析的洗脱剂。

柱层析：将硅胶进行烘干预处理，通过干法将其装入低压层析玻璃柱中，作为固定相，层析玻璃柱的规格为2.0cm×50cm，压紧硅胶。使用电子天平称取青蒿素的粗提物，用少量洗脱剂将其溶解，置入层析柱中，然后采用对应的洗脱剂对其进行柱层析，做好计时与取样工作，分段收集样品组分，并使用薄层层析法对柱层析中收集得到的组分进行定性。将含有不同分段中获得的青蒿素的洗脱液合并，使用旋转蒸发仪将其蒸干，测定青蒿素的含量，并对其纯度、回收率等分别进行计算。观察不同洗脱剂的效果。

2结果

观察五种展开剂下，青蒿素样品溶液经薄层层析后的结果，可见展开剂为石油醚-乙酸乙酯（80：20）和正己烷-乙醚（80：20）的情况下，溶质的溶解性和选择性都比较好，可以作为柱层析的洗脱剂。见表1。

观察石油醚-乙酸乙酯（80：20）和正己烷-乙醚（80：20）两种洗脱剂下的柱层析分离效果，结果可见选择石油醚-乙酸乙酯（80：20）作为洗脱剂青蒿素的收率以及纯度等均显著高于正己烷-乙醚（80：20）为洗脱剂的情况。见表2。

3讨论

在进行天然药物提取分离和纯化的过程中，固定相的选择、层析中的进样量、洗脱剂的极性、洗脱剂的流速等都会对最终结果造成影响[5]。本文主要研究的是洗脱剂（展开剂）对其的影响。考虑固定相、进样量、流速等条件均固定的情况下，先通过薄层层析对不同展开剂的展开效果进行考察，观察不同展开剂对青蒿素样品的溶解性，选择性等，既要保证其能有效溶解青蒿素，还要求薄板上青蒿素的斑点与其他斑点具有良好的区分度，避免溶液中其他组分对其的影响和干扰。石油醚-乙酸乙酯（80：20）和正己烷-乙醚（80：20）这两种展开剂青蒿素溶解性好，比移值适中，且青蒿素斑点上方最近斑点和下方最近斑点的比移值与青蒿素斑点之间可以有效区分，将其作为柱层析洗脱剂考察青蒿素的回收率和纯度，再对两种溶剂进行比较，最终确定石油醚-乙酸乙酯（80：20）作为洗脱剂的良好效果。

参考文献：

[1]胡淼，钱国平，苏宝根，等.硅胶柱层析纯化青蒿素[J].华西药学杂志，2005，20（4）：283-285.

[2]刘碗晖，严铭铭，赵大庆.硅胶薄层层析展开剂构成的变化对不同极性成分值的影响[J].长春中医药大学学报，2007，23（3）：20-22.

[3]刘俊梅，胡耀辉.薄层层析在多元醇检测中的应用 [J].食品苦科技，2007，27（6）：224-225.

[4]刘纪红，严守雷.莲藕多酚薄层层析分离鉴定研究[J].安徽农业科学，2008，36（15）：6308-6309.

[5]徐伟，范志诚，马思慧.柱层析分离红曲色素及其组分的抑菌性对比[J].酿酒，2010，37（6）：50-52.编辑/王海静