补肾活血中药对实验性血瘀证大鼠内皮细胞功能的影响

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摘要：目的：观察补肾活血中药对实验性血瘀证大鼠血管内皮细胞功能的影响。方法：采用补肾活血中药药液灌服实验性血瘀证大鼠模型，将动物随机分为对照组、模型组、大剂量和小剂量共4组，每组10只。造模成功后。给药组灌服药物40天，然后下腔静脉取血，测定各观察指标和主动脉血管壁组织学变化。结果：补肾活血中药组血脂、血流变、内皮功能、凝血纤溶各项指标及组织形态学均有明显变化，接近正常组，与模型组有显著差异。结论：补肾活血中药有降低血液黏度、调节血脂和改善血管内皮细胞功能的作用。

关键词：血瘀证大鼠；补肾活血中药；血管内皮细胞功能

中图分类号：R285.5　文献标识码：A　文章编号：1673－7717(2007)09－1920－03

随着社会发展，人口老龄化趋势加快，防治老年病已成为医学界的重要研究领域。本实验是对实验性血瘀证大鼠内皮细胞功能进行研究，验证补肾活血中药对老年病的防治作用，为临床防治老年性疾病提供有价值的治疗方法。

1　材料与方法

1．1 实验动物

采用Wistar大鼠，雄性，12个月龄，48只，体重250－300g，由山东省医学科学院实验动物研究所提供，一级动物。动物观察室为清洁级。

1．2　实验试剂

胆固醇、甘油三酯、载脂蛋白试剂盒，上海长征一康仁医学科学有限公司提供；高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇试剂盒，北京中生生物工程高技术公司提供；内皮素、6－酮－前列腺素F1α。补血栓素B2放免药盒、NO试剂盒，总医院科技开发中心放免所提供；t－PA试剂盒，上海医科大学分子遗传学研究室提供。

1．3　中药制剂

补肾活血液主要药物为：熟地、枸杞、仙灵脾、菟丝子、当归、丹参、桃仁、郁金、毛冬青。将药物放入多功能提取罐中，用65％乙醇热回流提取2次，第1次加8倍量65％乙醇，提取3h，放出药液；第2次加6倍量65％乙醇，提取2h，放净药液。两次药液一并滤出，70－75℃回收乙醇，回收后再减压浓缩(700C，0.06mPa)至0.8g／mL，真空包装备用。

1．4　动物高脂餐的制备

取猪油300g，加热融化，徐徐加入250g胆固醇，不断搅拌，待溶解后，慢慢加入50g胆盐和20g丙硫氧嘧啶(用前研术)，充分搅匀，再加入190mL吐温80和190mL丙二醇，不断搅拌至完全溶解，冷却，如不足1000mL，加蒸馏水补足。冰箱保存，用时加热化开。

1．5　实验分组及给药方法

将实验Wistar大鼠在实验环境下给予基础饲料常规饲养1周。随机分4组，各组比例为1:1，均为10只，各组均加20％脱落率，共48只。A－空白对照组(基础饲料+5mL／kg蒸馏水灌胃)，其余大鼠高脂餐饲养2周后再随机分3组，B－模型对照组(高脂饲料+5mL／kg蒸馏水灌胃)，C－中药大剂量组(高脂饲料+实验药物40mL／kg灌胃)、D－中药小剂量组(高脂饲料+实验药物20mIMkg灌胃)，给药加天后，各组动物均在腹腔麻醉后下腔静脉取血，备实验室化验测定各观察指标，然后处死，取各组实验动物的主动脉血管进行组织病理学检测。

1．6　标本检测

1．6．1　一般状态　每日观察动物外观变化，包括皮毛色泽、疏密、粪便形态、精神状态、实验前后体重变化变化等。

1．6．2　实验室　检查测定血液流变学、血小板聚集性和黏附性；测定血脂、血浆内皮功能(TXB2，6－keto－PGF1α，NO，ET－1)和PAI－1、t－PA等各项指标。

1．6．3　病理形态学观察　取主动脉血管壁组织进行检测，观察普通光镜血管内膜及电镜下内皮细胞的变化。

1．7　统计学处理

用Excel软件进行t检验，以x±s表示结果。

2　结　果

2．1　一般状况

实验结束时，治疗组与对照组比较无显著性差异，模型组精神萎靡、懒动、毛发稀松、大便溏稀、舌质紫黯。

2．2　指标测定

对实验大鼠血液流变学、血小板聚集性和黏附性、血脂、血浆内皮功能(TXB2，6－keto－PGFIα，NO，ET－1)和PAI－1、t－PA等各项指标的测定。

2．3　组织形态学检测

2．3．1　光镜下检测　取正常组、模型组、大剂量组和小剂量组大鼠各8只，在完成其他实验后处死，将主动脉取出10mm，放入中尔马林液中24h，做石蜡包埋，以主动脉血管横切面做常规切片，苏木素－伊红染色。在光镜下观察动脉血管内皮细胞损伤程度、血管壁增厚情况、泡沫细胞沉积及内弹力膜中断情况，将其分为轻(+)、中(++)、重(+++)3级。

2．3．2　透射电镜下检测 实验动物模型组细胞核凹陷不平，常染色质边聚，成团块状，核固缩，细胞器减少，胞浆溶解，线粒体呈空泡样、肿胀，嵴减少。内质网肿胀，细胞膜破裂，有调亡小体形成。补肾活血组内皮细胞排列较整齐、紧密，细胞完整，无肿胀，未见有调亡小体形成。

3　讨　论

随着社会老龄化，一些常见的老年病如高脂血症、心脑血管疾病、糖尿病、慢性肾功能不全等逐渐发生，严重危害着老年人的身体健康。根据中医辨证除了它特征性的原发病症以外，几乎都共同存在不同程度的肾虚血瘀证候。现代医学分析提示不同的疾病，在神经内分泌、免疫、合成代谢、氧自由基代谢方面发生紊乱，导致血液流变学异常，微循环障碍，血液浓、黏、凝、聚，血流缓慢，流态异常等病理改变。因此笔者认为老年人诸病源于肾虚，血瘀也可责之于肾虚，故治疗上采取补肾活血法治之。通过临床观察，以补肾活血法治疗多种老年病有确切疗效，故而提出从肾虚血麝论治老年病的观点。本实验通过复制大龄血瘀证大鼠模型，从血脂、血流变、内皮功能、凝血纤溶系统的影响各方面进行实验观察，以便从中年起即进行预防性治疗，防治老年病的发生发展，起到延缓衰老的作用。

所选处方为临床常用补肾活血中药，方中有熟地、枸杞、淫羊藿、菟丝子、当归、丹参、桃仁、郁金、毛冬青等。熟地与枸杞补血滋阴，益精填髓。现代药理研究证明其补血作用可以增强机体免疫功能，并有抑制血小板凝集，激活纤维蛋白溶酶原，对纤溶系统有活化作用，从而抑制血栓形成。并有抗肿瘤及延缓衰老的作用。淫羊藿与菟丝子有补肾壮阳、强筋健骨之功效。现代药理研究其具有扩张血管作用，促进骨生长，提高机体免疫活性，抗氧化作用；还有抑菌抗病毒、强心、降压等作用。当归、丹参、桃仁、郁金、毛冬青诸药，主要功效为补血活血、化瘀解毒等，药理研究表明均具有抗血小板聚集作用，抗血栓作用，改善微循环，抗氧化损伤作用和多途径发挥心肌保护作用。还具有调整、改善血脂代谢作用，通过保护或提高抗氧化酶的活力，减少脂类过氧化物的产生，发挥抗自由基损伤的作用。通过这些作用可以有效保护血管内皮细胞的损害，防止血管硬化闭塞和血栓形成。诸药配伍阴阳相济，则肾中精气充足，气血运行通畅，此方功效是补肾活血，标本兼顾。

本研究结果证实补肾活血方可以改善大鼠血瘀模型血液流变状态，全血黏度、血浆黏度、血小板聚集率与模型组比较，均有显著降低(P＜0.05，P＜0.01)，大、小剂量组间无显著性差异。对血脂调节的影响也明显，模型大鼠的TC、TG、LDL－c显著升高，HDL－c显著降低，与正常组比较有显著性差异(P＜0.01)。补肾活血组可以有效降低TC、TG、LDL－c，升高HDL－c，与模型组比较有极显著性差异(P＜0.01)。大、小剂量组之间无显著性差异。对血浆内皮功能的影响表现为治疗后，大、小剂量组均能显著降低ET－1、TXB2，升高NO、6－Keto－PGF1α大剂量组优于小剂量组，组间比较有显著性差异(P＜0.01)。表明补肾活血法能通过调节血管收缩与舒张因子(ET－1与NO)的平衡，修复血管内皮损伤，改善血瘀证大鼠的内皮细胞功能。对纤溶系统PAI－1、t－PA、Fbg的影响主要是补肾活血组可以提高t－PA活性，降低血中Fog的含量，大、小剂量组与模型组比较，均有显著性差异(P＜0.05，P＜0.01)，这可能与益肾活血方有保护血管内皮，促进t－PA释放、抑制pAI活性、减轻非特异反应，使Fbg减少，改善了红细胞压积及顺应性，稳定细胞表面阴电荷量等多种因素有关。大剂量组优于小剂量组(P

总之，补肾活血中药治疗不仅能降脂、降黏，还能有效改善血管内皮功能、调节凝血纤溶系统的平衡，从而抗动脉硬化，减少血栓形成。本研究旨在探讨老年病与肾虚血瘀之间的发展变化规律，为补肾活血法治疗老年病提供实验依据。研究结论证明，补肾活血中药可以作为防治老年病的有效方法和途径之一。