一种准确测定灵孢多糖含量的方法

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摘 要：目的：建立准确测定灵孢多糖含量的方法。方法：采用蒽酮硫酸法，紫外分光光度计在620nm检测吸收度，以测得的吸收度与其对应的浓度计算回归方程，回归曲线的相关系数不得低于0.99。对此方法改进，摸索出影响含量结果不稳定的因素，准确测定含量。结果：重复性，精密度均符合规定。结论：本方法可用于准确测定灵孢多糖的含量。

关键词：灵孢多糖；含量；分析

多糖的含量测定方法有蒽酮硫酸法、苯酚硫酸法、滴定法。灵孢多糖注射液的含量测定方法采用蒽酮硫酸法[1]，采用此法测定含量结果不稳定，重复性及重现性均较差，通过对方法中冰水浴温度、溶液摇匀方式、测定时间摸索，现方法重复性，精密度实验结果均符合规定。实验方法如下。

1 实验条件

1.1 仪器 TU-1801紫外可见分光光度计

SK-Ⅰ快速混匀器

1.2 试药

硫酸（分析纯）

批号：20130129

来源： 国药集团化学试剂有限公司

蒽酮（分析纯）

规格：25克

批号：050619

来源： 上海化学试剂采购供应五联化工厂

D-无水葡萄糖

批号：110833-200904

来源：中国食品药品检定研究院

2 方法

溶液的制备：（1）对照品溶液的制备：按照对照品的说明书， 干燥葡萄糖对照品，取0.1g，精密称定，置50ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，作为对照品溶液。（2）供试品溶液的制备：精密量取灵孢多糖溶液（4.5mg/ml）1.5ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，作为供试品溶液。（3）0.2%蒽酮试剂的制备：取蒽酮0.2g，溶于100ml浓硫酸中，蒽酮试剂使用前一小时配制好，蒽酮试剂放置时间太久会变色，影响含量测定。（4）空白对照溶液：水。（5）标准曲线的制备。精密量取对照品溶液1.0、2.0、4.0、6.0和8.0ml，分别置100ml量瓶中，加水稀释至刻度。精密量取上述对照品溶液1.0ml，分别置具塞试管中，置冰水浴中，分别加入5.0ml蒽酮试剂，摇匀，各管加完后浸入沸水浴中，加热1分钟，加塞。自水浴重新沸腾起，开始记时，10分钟后取出，用自来水冷却，室温放置10分钟，立即在620nm的波长处分别测定吸收度，以测得的吸收度与其对应的浓度计算回归方程，回归曲线的相关系数不得低于0.99。

按（5）项下方法，供试品每次四个管，三次试验含量结果见表1。

结果表明：三次试验中，每次四支管平行性较差。试验过程中发现采用冰袋加入自来水的方式制备的冰水浴温度高于零度，加入蒽酮试剂后，蒽酮颜色迅速加深，蒽酮试剂已与多糖反应，加入蒽酮后手动无法混匀，振摇后仍有分层，对此方法在这两点进行改进：采用加入冰块的方式，制备冰水浴，测定温度为零度；采用快速混匀器，几秒钟即可混匀。改进后：蒽酮试剂加入后，溶液颜色为蒽酮试剂的颜色，无加深。

按（5）项下方法，供试品每次四个管，三次试验含量结果见表2。

结果表明：三次试验中，每次四支管平行性仍较差。供试品测定时发现，吸收值极不稳定，上下浮动幅度较大，测定结果不准确。为保证室温放置10分钟后能够立即测定，将空白对照溶液和对照品溶液的六支管与供试品的四支管分别放入沸水浴中，保证了供试品溶液室温放置10分钟后立即测定。

按（5）项下方法，供试品每次四个管，五次试验含量结果见表3。

结果表明：经两次改进方法后，五次试验，每次四支管平行性很好，相对标准偏差即变异系数最大为2.11%，重复性实验结果较好，五次试验，以每次试验结果的平均值计算相对标准偏差，结果为1.28%。试验结果稳定。

3 结束语

本试验按照质量标准极易忽视冰水浴、摇匀、室温放置10分钟立即测定，这三点，对照品溶液制备的标准曲线截距应趋于零。

参考文献

[1]化学药品地方标准上升国家标准[S].灵孢多糖注射液.