黔产野生和栽培钩藤中生物碱类成分薄层色谱分析研究
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摘 要 目的：为考察贵州野生和栽培钩藤药材质量的稳定性和一致性，建立薄层色谱特征图谱。方法：硅胶G薄层板；氯仿―丙酮―氨水(50∶20∶0．3)为展开剂；稀碘化铋钾溶液为显色剂；双波长锯齿扫描，检测波长520nm，参比波长650nm。结果：不同样品均含有生物碱，其薄层色谱特征图谱显示一定的相似性和差异性。结论：该方法可以有效地鉴别钩藤药材，并为质量评价提供依据。
关键词 钩藤 生物碱 薄层色谱
钩藤为茜草科植物钩藤Uncaria rhynchophylla(Miq.)Jacks.、大叶钩藤Uncaria macr-ophylla Wall.、毛钩藤Uncaria hirsuta Havil.、华钩藤Uncaria sinensis(Oliv.)Havil.或无柄果钩藤Uncaria sessilifructus Roxb.的干燥带钩茎枝。用于头痛眩晕，感冒夹惊，惊痫抽搐，妊娠子痫，高血压等［1］。化学研究表明，钩藤茎枝中含有多种吲哚类生物碱，其中钩藤碱、异钩藤碱为其主要有效成分［2］。现代药理研究表明，钩藤具有降压、抗心律失常、镇静、抗癫痫和抗癌等多种药理作用［3］。质量评价方面，《中国药典》一部（2005版）尚未收载其薄层鉴别和含量测定方法。因此为了考察钩藤药材的质量是否稳定和一致，我们建立了其薄层色谱特征图谱。
1 仪器及试药
CS-9301PC双波长飞点薄层色谱扫描仪（日本岛津公司），CAMAG LINOMAT V半自动点样仪（瑞士卡玛公司），CX-300型超声波清洗机（中国北京创新德超声电子研究所），硅胶G薄层板（中国青岛海洋化工厂）。钩藤、华钩藤、毛钩藤和攀枝钩藤由贵阳中医学院药学系生药教研室付志明老师采集于贵州省贵阳市、剑河县、三都县（见表1），并经贵阳中医学院药学系生药教研室刘教授鉴定。钩藤对照药材（批号1190-200101）购自中国药品生物制品检定所，氯仿、丙酮、氨水等试剂均为分析纯。
2 方法和结果
2．1 对照品溶液的制备取钩藤对照药材粉末3．0g，用0．1mol・L-1浓氨试液浸润（2h以上），用30ml氯仿超声提取40min，过滤，滤液水浴挥干，残渣用3．6％HCl超声溶解，过滤，滤液用浓氨水调pH9～10，用氯仿萃取3次，每次5ml，氯仿水浴挥干，残渣用2ml氯仿溶解，作为对照品溶液。
2．2 供试品溶液的制备分别取各地采集的钩藤药材粉碎至中粗粉（过40目筛），称取3．0g，用0．1mol.L-1浓氨试液浸润（2h以上），用30ml氯仿超声提取40min，过滤，滤液水浴挥干，残渣用3．6％HCl超声溶解，过滤，滤液用浓氨水调pH9～10，用氯仿萃取3次，每次5ml，氯仿水浴挥干，残渣用2ml氯仿溶解，作为供试品溶液。
2．3 薄层色谱试验条件硅胶G薄层板（100mm×100mm；100mm×200mm），点状点样，点样量10μl。展开剂为氯仿-丙酮-氨水（50∶20∶0．3），展开，晾干后，喷以稀碘化铋钾溶液至斑点显橙红色［4］，加同样大小玻璃板密封。反射法双波长锯齿形扫描，λS=520nm,λR=650nm,狭缝0．4mm×0．4mm。
2．4 薄层色谱试验结果依照上述试验条件获得的色谱图像见图1、图2，从色谱图上可以观察到钩藤对照药材的5个生物碱斑点，其他黔产钩藤药材中均含有生物碱，但斑点的大小和Rf值各异，有与对照药材在相同位置上显相同颜色的斑点，也有与对照药材在不同位置上的相同颜色的斑点，显示了钩藤各品种药材质量的差异性。为了提高辨认的专属性，还将黔产各品种钩藤药材和钩藤对照药材进行了薄层色谱扫描图的叠加，见图3。
2．5 钩藤生物碱类成分薄层色谱特征图谱建立及识别钩藤生物碱类成分的薄层色谱图像以可见光色谱信息最丰富（图1、图2），荧光色谱不明显。在可见光色谱图中，可以明显观察到钩藤对照药材的5个大小不等的橙红色斑点，其编号及Rf值用Px(Rf)表示，依次为P1（0．18）、P2（0．25）、P3（0．37）、P4（0．56）、P5（0．66）；野生的钩藤、毛钩藤、攀枝钩藤均可观察到3个不同大小的橙红色斑点，且分别是与对照药材相对应的P1（0．18）、P2（0．25）和P4（0．56）斑点；而野生的华钩藤则可以观察到4个大小不等的橙红色斑点，分别是P2（0．25）、P4（0．56）、P5（0．66）和P6（0．47），其中P2（0．25）、P4（0．56）、P5（0．66）是与钩藤对照药材的共有斑点，P6（0．47）则是其特有斑点；栽培的华钩藤可以观察到3个大小不等的斑点，分别是P2（0．25）、P5（0．66）和P6（0．47），P2（0．25）、P5（0．66）为共有斑点，P6（0．47）为特有斑点。共有斑点说明了各品种药材所含有的相同化学成分，特有斑点则表明其特有的化学成分，斑点大小不同说明了其成分含量高低各异，这也正是色谱特征图谱研究中相似性和模糊性的体现［5］。同时为了更直观的表现各斑点（相当于薄层扫描图上的峰）的相似性和模糊性，我们从峰面积大致地比较了各峰的“表现丰度”，见图4、图5。
3 讨论
3．1 钩藤碱、异钩藤碱易溶于氯仿、丙酮、乙醇和苯，微溶于乙醚和乙酸乙酯［6］。经过酸碱交替提取、氯仿萃取，很大程度上排除了中性及酸性成分的干扰。
3．2 比较了氯仿―丙酮―氨水（50∶20∶0．3）、氯仿―丙酮―乙酸乙酯―氨水（65∶20∶0．2∶0．5）、氯仿―甲醇―氨水（9∶0．5∶0．5）、氯仿―乙酸乙酯―氨水（10∶3∶0．3）等多个不同组分、不同比例的展开系统，以氯仿―丙酮―氨水（50∶20∶0．3）系统的分离效果最佳。展开剂选用碱性，避免了钩藤生物碱的拖尾现象，选用生物碱专属显色剂稀碘化铋钾溶液，使鉴别效果更加灵敏、稳定，斑点更清晰。
3．3 薄层色谱作为中药的鉴别，已有30多年的历史，这一较为古老的色谱技术由于可以提供彩色图像、形象直观，具有其他色谱技术所不能的特点而被中药分析广泛使用。用于中药特征图谱分析，它的这一优势更能得到充分发挥。特征图谱强调的是整体性和模糊性，它既可以表达有良好重现性的指纹特征，又能包容样品之间的差异。比如中药色谱特征图谱多数是在缺乏足够的化学参照物，甚至没有化学参照物的情况下进行的，这就是其模糊性的一个表现［7］。因此在选择色谱方法以及优化色谱条件时只能尽可能提高色谱分离度，力求更多成分在色谱中展现出来，以提供更多信息。但由于色谱分离度及选择色谱条件难以避免的局限性，所以很难说哪个色谱特征图谱是最好的。这种带有“模糊性”的问题只能逐步解决，而不可能毕其功于一役。黔产野生和栽培钩藤中生物碱类成分薄层色谱分析研究就是一个例证。
参考文献
1 国家药典委员会.中华人民共和国药典［S］.一部.北京：化学工业出版社,2005：180.
2 楼之岑,秦波.常用中药材品种整理和质量研究(北方编)［M］.第2册.北京：北京大学医学出版社,1995：955～1002.
3 黄青萍,蔡乐.钩藤的药理作用及临床应用［J］.广西中医药,2003,26(4)：6～8.
4 中国医学科学院药物研究所.薄层层离及其在中草药分析中的应用［M］.北京：科学出版社,1978：102～103.
5 谢培山.色谱指纹图谱分析是中草药质量控制的可行策略［J］.中药新药与临床药理,2001,12(3)：141～151.
6 国家医药管理局中草药情报中心站.植物药有效成分手册［M］.北京：人民卫生出版社,1986：892.
7 谢培山.中药色谱指纹图谱［M］.北京：人民卫生出版社,2005：5～17.
(收稿日期：2000年5月16日)