禽流感疫苗免疫后抗体水平的监测

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摘要：从常熟地区抽取五家蛋鸡养殖场的蛋鸡血清，用血凝抑制试验测定其禽流感H5亚型的抗体水平，目的是了解该地区的禽流感免疫情况和禽流感发病情况。结果是鸡场1有4份样品的抗体效价为3log2，其余4家养殖场的抗体效价均在4log(包括4log2)和9log(包括9log2)之间，五家养殖场的平均抗体效价均在6log到9log2之间。从结果可以看出,鸡场1、4的鸡抗体效价过低,对禽流感的抵抗力较弱，鸡场2、3、5的鸡免疫效果较好，近期内对禽流感有一定的抵抗力。

关键词：禽流感；H5亚型；检测；抗体效价

中图分类号：S85 文献标识码：A 文章编号：1674-0432（2010）-09-0226-2

0 前言

禽流感是由正粘病毒科流感病毒属A型病毒所引起的一种禽类传染病，是禽类的一种全身性疾病。1878在意大利首次发现该病，在欧洲，美洲，北非，东南亚中东和俄罗斯等地也相继发生，1997年香港首先报道了人感染禽流感的事件。禽流感病毒的H5和H7亚型主要引起高致病性禽流感，被世界动物卫生组织列为A类传染病,我国也将此病列为I类传染病。

虽然早在1901年即分离了禽流感病毒，但直到1955年才明确它与人及哺乳动物流感的关系。20世纪70年代开始注意在水禽广泛存在的禽流感病毒是流感病毒的“基因库”，并对家禽业构成潜在的威胁。高致病性禽流感病毒主要通过空气进行传播，病毒借助表面的血凝素，与呼吸道黏膜上皮细胞表面的相应受体结合，吸附在宿主的呼吸道上皮细胞上，引起上皮细胞增生、坏死、黏膜局部充血、水肿和浅表溃疡等卡他性病变。禽类发生高致病性禽流感时，发病急、发病率和死亡率很高，目前尚无好的治疗办法。

传染源主要为患禽流感或携带禽流感病毒的家禽，另外野禽或猪也可成为传染源，许多家禽都可感染病毒发病。高致病性禽流感大范围流行,在全球造成了巨大的损失，为了防止禽流感的发生，我国从2005年开始实施强制免疫措施。实践证明，疫苗免疫接种是预防和控制禽流感最有效的途径。2004-2005年全国发生了多起高致病禽流感疫情，给养殖户带来巨大的损失。本文针对蛋鸡免疫问题，随机从常熟地区的五家蛋鸡养殖场的29100只鸡中抽取168血清样品，用血凝抑制试验对其抗体水平进行检测，以了解该地区的禽流感免疫情况。

1 材料和方法

1.1 试剂

禽流感病毒H5亚型的标准抗原的标准抗原购自中国哈尔滨维型科生物技术开发公司；U型96孔血凝板购自江苏省海门市实验仪器厂；0.1mol/L pH7.2的PBS；1%红细胞悬液。

1.2 试验鸡

从常熟地区的五家蛋鸡养殖场随机抽取的商品蛋鸡，SPF鸡为饲养的试验用鸡。

1.3 试验方案

对抽取的样品进行的抗体水平进行检测,具体试验鸡的抽样数量、饲养数量、禽流感免疫情况及日龄见表1。

1.4 抗体检测

按照GT/T1963-2003颁布的高致病性禽流感诊断技术方法检测血清样品的H5抗体效价。用96孔微量反应板进行血凝抑制试验，试验用4HAU稀释的诊断抗原,以完全抑制4HAU抗原的血清最高稀释倍数为HI滴度,并按常规方法进行阴性和阳性对照。

2 结果

2.1 结果

3 讨论

鸡场1、2、3、4、5的平均HI效价依次为6.375、7.4043、7.107、6.9209、8.4211。从HI的检测结果可以看出，鸡场1的抗体水平最低，鸡场1的蛋鸡日龄较大，免疫时间较长，在近期内没有进行二次免疫，如果遇到禽流感强毒流行时，禽群可能存在潜在的感染和发生禽流感的危险；鸡场2的免疫效果较好，在近期对禽流感有较强的抵抗力，由于其抗体水平偏低而且其免疫的时间较长，应继续对该鸡场进行监测，适时地指导其进行二次免疫；鸡场3的鸡的日龄较小，是在近期内做的禽流感免疫，对禽流感有一定的抵抗力；鸡场4是近期做的禽流感免疫，免疫的效果未能达到令人满意的程度；鸡场5的抗体效价在5家养殖场中最高，对禽流感有很强的抵抗力，即使遇到禽流感强毒流行也有相当强的抵抗力。

养殖场3和养殖场4的日龄相仿，都是在近期内进行的免疫，但在免疫的效果上存在很大的差异。在免疫方法上，鸡场3免疫时使用的肌肉注射的方法，鸡场4使用饮水的方法进行的免疫。用饮水的方法进行免疫，水的品质对免疫的效果会产生一定的影响。饮水的量也会对免疫的效果产生影响，饮水的量过少，每只鸡不能吸收足够到疫苗，不能刺激机体产生抗体；饮水的量过多，会使疫苗的量浓度低，疫苗在环境中暴露的时间过长，容易受到污染。

鸡场1和鸡场2所饲养的数量相同，蛋鸡的日龄都较大，都是在21龄进行禽流感免疫，均采用饮水的方法。鸡场1的免疫结果不如鸡场2，鸡场1的免疫时间比鸡场2长，可能对其抗体水平产生影响。从饲养的环境上看，鸡场1的鸡舍通风条件不好，鸡舍的卫生状况较差，在采用饮水免疫时会对免疫的效果产生一定的影响。

红细胞悬液的浓度会对试验结果产生影响。经过离心处理的红细胞完全压实在试管的底端，红细胞之间互相接触密切，几乎排除了所有血浆。在试验时由于看不清离心管上的刻度，用移液枪将离心管内的红细胞取出并测量其体积。这一操作造成了压积红细胞的体积变大，使得配制的1%红细胞悬液的红细胞含量偏低。温度对试验结果也有影响，一般要求在室温25-37℃试验，本次试验时温度为20℃，会对结果产生一定的影响。

通过结果，本文认为应该对养殖场进行定期的禽流感抗体水平检测，了解其禽流感的免疫情况，对抗体水平较低的及时指导其地进行免疫工作，以更好地防止禽流感疫情的发生。

4 结论

5家养殖场的168份血清样品中绝大多数能检测到抗体的存在，证明其进行过禽流感免疫。鸡场1和鸡场4的抗体水平偏低，对禽流感的抵抗力较弱，应在近期指导其进行禽流感的二次免疫。鸡场2，3，5的抗体水平抗体水平较高，免疫效果较好，对禽流感有较强的抵抗力。

附录

1 制备1%的红细胞悬液

用注射器吸取阿氏液约1ml，取3只SPF鸡，每只采血约6-8ml，与阿氏液混合，放入装10ml阿氏液的离心管中混匀。将离心管中的血液经1500rp/m离心8分钟，弃上清液，沉淀物加入阿氏液，轻轻混合，再经1500rp/m离心8分钟，用吸管移去上清液及沉淀在红细胞上层的白细胞薄膜，洗涤三次后吸取2.5ml红细胞缓慢加入到247.5mlPBS中配成250mlL1%红细胞悬液，4℃保存备用。

2 血凝试验和4单位抗原制备

在微量反应板的1-12孔分别加入PBS25μL。第1孔加入抗原25μL，反复吹吸3次，吸出25μL移至第2孔，以此类推，直至第11孔，从第11孔吸出25μL弃去，每孔加入25μLPBS，每孔中加入1%鸡红细胞悬液25μL，将血凝板置振荡器上中速振荡1-2分钟，静置40分钟后观察结果。

血凝试验测得标准抗原的血凝效价为210，按1:26的比列将标准抗原稀释成4单位抗原备用。

作者简介：季丽红（1979-），女，江苏常熟人，现就职于常熟市碧溪动物防疫站。研究方向：畜禽养殖与重大动

物疾病的防控。

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