三七对酒精性脂肪肝大鼠肝组织环氧合酶-2表达的影响

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蔡丹莉　陈芝芸　严茂祥　何蓓晖　项柏康

摘　要：目的：观察三七对酒精性脂肪肝大鼠肝组织环氧合酶－2(COX－2)的表达。方法：62只SD大鼠随机分为正常组、模型组、三七大剂量组、三七小剂量组和易善复组。后4组以50％酒精灌胃和白由饮用10％酒精饮料进行酒精性脂肪肝的造模，易善复组、三七大、小剂量组大鼠在造模的同时予相应的药物进行干预，连续14周后HE染色观察肝组织病理学改变、免疫组化法测定肝组织中COX－2的表达、放免法检_测血浆血栓素B2(TXB，)和6－酮－前列腺素F1α(6－Keto－PGF1α)的含量。结果：模型组大鼠肝组织出现不同程度的脂肪变，肝组织COX－2表达较正常组明显增强，血浆TXB1α、6－Keto－PGF1α含量及TXB2/6－Keto―PGF1α值较正常组明显升高。经大、小剂量三七干预后大鼠肝组织脂肪变程度较模型组明显减轻，COX－2表达明显减少・血浆TXB2、6－Keto－PGF1α含量及TXB2/6－Keto－PGF1α值也明显降低。结论：三七能明显改善酒精性脂肪肝大鼠微循环，抑制酒精性脂肪肝大鼠肝组织COX－2表达，这可能是其抗酒精性脂肪肝的作用机制之一。

关键词：酒精性脂肪肝；三七；环氧合酶－2；大鼠

中图分类号：1t285.5 文献标识码：A 文章编号：1673－7717(2007)07－1391－03

近年来酒精性肝病在我国的发病迅速增加，成为危害国民健康的又一重大疾病。酒精性脂肪肝发生在乙醇对肝脏损伤的初期，在酒精性肝病中最为常见，部分病例将发展为酒精性肝炎、肝纤维化，最终导致肝硬化，因此加强对其的研究已成为十分迫切的现实。以往的研究发现，中药三七及其提取物具有护肝、抗氧化、抗纤维化等作用。本研究采用50％的酒精建立脂肪肝大鼠模型，观察三七对酒精性脂肪肝大鼠肝组织环氧合酶－2(COX－2)表达的影响，探讨其作用机理。

1　材料与方法

1．1 实验材料，SD大鼠62只，雄性，SPF级，体重(200±20)g，由中国科学院上海实验动物中心提供。乙醇：分析纯，纯度>99.7％，安徽特酒总厂生产。三七Panax notogin-seng(Burk.)F.H.Chen的产地浙江省，制成粉剂用时以蒸馏水配成混悬液。易善复胶囊：A.Nattermam&lie GMBH产品。血栓素B2(thromboxane B2，TXB2)、6－酮－前列腺素F1α(6－keto－prostaglandinF1α，6－Keto－PGF1α)放免试剂盒为总医院科技开发中心放免所产品，批号均为20040128；COX－2多克隆抗体(工作浓度1：100)，美国Neomarkes公司产品，批号9121S4059；二步法免疫组化试剂盒PowerVisionTM－PV6001，北京中山生物技术有限公司，批号113212。

1．2 实验方法酒精性脂肪肝模型的建立：大鼠以50％(V/V)酒精10mL/Kg体重灌胃，2次/天(定时在8：00及20：00)，同时自由饮用10％(V/V)酒精饮料，并以普通大鼠饲料喂养连续14周建立酒精性脂肪肝模型。

分组及给药：购进的大鼠正常喂养1周后随机分为5组，正常组10只，不造模，以蒸馏水10mL/kg灌胃代替50％酒精和药物，自由饮用蒸馏水；模型组13只，在造模同时，再灌服蒸馏水10mL/(kg体重・天)；三七大剂量组和三七小剂量组各13只，在造模同时，分别灌服1.2g生药/(kg体重・天)和O.6g生药/(kg体重・天)的三七混悬液；易善复组13只，在造模同时，灌服91.2mg/(kg体重・天)的易善复混悬液，灌药时间固定在每天中午12：00，连续14周。

检测指标：14周未，大鼠禁食不禁水16h，以20％乌拉坦5mL/kg体重腹腔注射麻醉，腹腔静脉取血，分离血浆，放免法测定血浆中TXB2、6－Keto－PGF1α的含量。迅速取肝右叶组织，4％多聚甲醛固定，HE染色光镜观察肝组织脂肪变性的程度，酒精性脂肪肝病理组织学诊断参考中华医学会肝脏病学分会2002年南京会议制定的“酒精性肝病诊断标准。肝脂肪变程度判断标准：无肝细胞脂肪变为(一)，肝小叶内

1．3　统计学处理计量资料用均数(x)±标准差(s)表示，各组问比较采用方差分析；计数资料采用多个独立样本的非参数检验；应用SPSS10.0进行协助分析。

2 结　果

2．1 一般情况62只大鼠共51只完成实验周期，实验期间所有死亡大鼠均因灌胃误呛入肺而导致死亡。正常对照组大鼠均存活。

2．2 病理组织学变化光镜下正常组大鼠肝小叶结构完整、清晰，肝细胞排列成肝索。在中央静脉周围呈放射状分布，细胞呈多边形，大小较一致。模型组大鼠肝细胞索紊乱，胞质疏松，胞质内可见大小不等、数量不一的脂滴空泡，窦内皮细胞肿胀、增生，个别大鼠汇管区有炎细胞浸润，肝小叶内出现点状坏死，未见肝纤维化和肝硬化形成；用酒精造模的4组大鼠肝组织脂肪变程度较正常组明显(P

2．3　大鼠肝组织COX－2的表达COX－2的阳性表达主要在肝细胞膜以及枯否细胞的胞浆和胞膜中。正常组大鼠肝组织中无COX－2阳性表达。模型组大鼠肝组织中COX－2的表达较正常组明显增强(P＜0.01)；三七大、小剂量组大鼠肝组织中COX-2表达均较模型组显著降低(P＜0.01)；易善复组大鼠肝组织中COX－2表达与模型组比差异无显著性(P＞0.05)。见表2

2．4 大鼠血浆TXB2 6－Keto－PGF1α的变化模型组大鼠血浆TXB2、6－Keto－PGF1αTXB2/6－Keto－PGF1α(T/K)均较正常组显著升高(P＜0.0l、P＜O.05)；三七大、小剂量组大鼠血浆TXB2、6－Keto－PGFt1αT/K均较模型组明显降低(P＜0.01、P＜0.05)；易善复组大鼠血TXB2、T/K均较模型组明显降低(P＜0.01、P＜0.05)。见表3。

3 讨　论

中医认为酒为有热有毒之品，过量饮酒，酒毒湿热之邪蕴积中焦。伤及脾胃，连及肝胆，脾胃失运，聚湿生痰，郁久化热，蕴阻中焦，气机不畅，血运受阻，渐则气滞血瘀，气血、痰湿相互搏结，停于脘腹或阻于胁下，形成痞块，乃为“瘀血”、“胁痛”、“酒臌”，其证本虚标实，虚实相兼，以实为主。由于气血为病贯穿酒精性肝病的整个病程，因此，益气行气、活血化瘀等调理气血法常贯穿治疗的始终。三七具有散瘀止血、消肿止痛、补血活血、滋补强壮等功效。本研究结果提示，三七对酒精引起的肝组织脂肪变性有较好的防治作用。

酒精性脂肪肝确切的发病机理仍不十分清楚，目前认为主要是乙醇直接对肝细胞的毒性，同时代谢紊乱、氧应激与脂质过氧化损伤，细胞因子等各种因素均参与了酒清性脂肪肝发病机理。COX是体内催化花生四烯酸转化为前列腺索的关键酶，它是一种诱导型酶，在细胞外网状结构和细胞核边缘起作用，在许多炎症因素刺激下表达，参与炎症反应、肿瘤发生等多种病理过程。可诱导COX－2表达的物质有：生长因子、细胞因子、致炎因子、药物及致癌剂等，癌基因r－src、ras活化以及抑癌基因APC失活均可激活COX－2的表达，在肝病中激活的因素还有乙醇、乙醛、脂质过氧化物等。本研究发现模型组大鼠肝细胞中COX－2的表达较正常组明显增强(P

TXA2是花生四烯酸通过COX－2催化的重要代谢产物之一，是潜在的血管收缩剂和血小板聚集因子。长期摄入乙醇，肝脏对氧的利用障碍和氧耗量增加，肝窦血管收缩更加重了肝脏氧缺乏，进一步引起肝脏损伤。TXA2及其受体不但调节着肝窦微循环，而且通过增加细胞因子的产生，引起肝脏损伤。TXA2的生物半衰期约30min，迅速代谢为无活性的TXB2。6－Keto－PGF1α是前列腺素I2(PGI2)的代谢产物，PGI2是血管内皮细胞经前列环素合成酶合成的，具有扩张血管、抑制血小板凝聚的作用，在生理条件下，它与TXA2在体内保持相对平衡，共同维持体内正常的血管壁功能、组织灌流及内环境稳定，由于它们半衰期都很短，故一般通过测量它们的代谢产物6－Keto－PGF1αTXB2来反映它们的含量。本研究发现模型组大鼠血TXB2、6－Keto－PGF1α含量均较正常组显著升高，TXB2/6－Keto－PGF1α值也显著增大，表明酒精性脂肪肝存在着了TXA2、PG2分泌的异常，TXA2与PGI2的平衡被打破，从而使肝脏微循环发生变化，肝内血管收缩，血液呈高凝状态，导致肝细胞相对缺血缺氧。引起血TXB2、6－Keto－PGF1α含量增高的原因可能与肝组织中COX-2表达增多促进花生四烯酸代谢为TXA2及PGI2有关。三七大、小剂量干预组大鼠血TXB2、6－Keto－PGF1α含量均较模型组显著下降，TXB2/6－Keto－PGF1α值也明显降低，表明三七可以通过抑制肝组织中COX－2表达而降低血清TXB2、6－Keto－PGF1α含量及TXB2/6－Keto－PGF1α值，从而改善肝脏微循环，抑制肝内脂质过氧化的发生，从而防止酒精性脂肪肝的发生发展。