上海某院淋球菌株对常用抗生素耐药性观察
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淋病是目前世界上发病人数最多的性传播疾病之一，由于菌株的变异和滥用抗生素,自1976年美国发现2例耐青霉素治疗的淋球菌病例以来，淋球菌对青霉素等抗生素耐药菌株不断增加。目前临床上多应用壮观霉素、头孢三嗪和氟喹诺酮类药物对其治疗。但由于这些药物的广泛使用、细菌染色体突变及耐药基因转移等原因,淋球菌逐渐产生了对这些抗生素的耐药菌株。为了解上海地区淋球菌流行株的耐药现状,我们采用琼脂稀释法对1995年和2005年临床分离的淋球菌菌株对青霉素、头孢曲松及环丙沙星的敏感性进行测定，现将结果报道如下。
1材料与方法
1.1材料
1.1.1菌株来源1999年菌株（共24株）为华山医院皮肤科门诊采集，本实验室保存菌株。2005年菌株（共计27株）为华山医院皮肤科2005年4月～7月门诊采集菌株。
1.1.2标准菌株淋球菌标准菌株ATCC 49226、WHO B， 本实验室保存菌株。
1.1.3抗生素亚松牌注射用头孢曲松钠（上海新亚药业有限公司产品,国药准字H 31020071,生产批号 050402）, 乳酸环丙沙星氯化钠注射液（四川科伦药业股份有限公司产品，国药准字H 51020609,生产批号 E 040924），注射用青霉素钾 (上海新先锋药业有限公司产品,国药准字H31020952,生产批号 040909)。
1.1.4培养基淋球菌GC基础培养基(Oxoid公司产品，美国)加入10%脱纤维新鲜羊血。
1.2方法
1.2.1配制抗生素培养基采用WHO西太平洋地区淋球菌耐药监测规划推荐的琼脂稀释法.［1］,即先将3种抗生素按要求配成原液,再倍比稀释成10×药物稀释储存浓度。琼脂液为18g琼脂粉加入500ml蒸馏水配制而成，于高压蒸汽灭菌后水浴冷却至50℃,加入脱纤维新鲜羊血(终浓度10%),取倍比稀释好的3种抗生素储存液,以1∶9比例加入GC血液基础培养基（制成抗生素使用浓度）,混匀后倾倒平板,从低浓度至高浓度配制3种药物使用浓度血平板。
1.2.2 复苏菌株 将分离菌株和标准菌株在血琼脂培养基上复苏生长至第2代，培养18～24h,刮取菌落制成5×10.4～10.5CfU/ml的菌悬液。用加样枪将淋球菌菌悬液接种于各个含不同浓度抗生素的平板上,置36℃、5%CO2、培养箱内培养,36h后观察结果,记录无菌落生长的最低抑菌浓度。以标准菌株ATCC 49226及WHO B作质控菌。
1.2.3药物敏感性判断标准以培养平皿上淋球菌不生长的最低药物浓度作为抗菌药物对淋球菌的最小抑菌浓度（MIC），按全国淋球菌耐药监测协作组统一提供的耐药规定：青霉素G钾、头孢曲松钠和环丙沙星均为≤0.03mg/L判为敏感,0.06～0.5mg/L为中度敏感,≥1mg/L为耐药。
2结果
2.1标准菌株MIC 浓度
标准菌株ATCC49226 及WHO B 对3种抗生素的MIC 浓度见表1。
表1标准菌株ATCC49226 及WHO B 的MIC 浓度
2.2采集菌株MIC分布
1999年、2005年淋球菌对3种抗生素的MIC分布见表2。
表21999年及2005年淋球菌对3种抗生素的MIC分布
2.3采集菌株MIC的测定结果
淋球菌对3种抗生素的MIC测定结果见表3。
3讨论
近20年来，随着临床抗生素治疗淋病的普遍使用，淋球菌的耐药性在全球日趋严重，并且因时间和地区的变化而有所不同。淋球菌耐药的出现与人们对抗生素的选用有直接关系。
表31999年、2005年淋球菌对3种抗生素MIC的测定结果
抗生素年份MIC范围(mg/L)MIC50（mg/L）MIC90(mg/L)青霉素G钾199916.000～0.1258.00016.000
虽然青霉素已不再作为治疗淋病的首选用药,但是淋球菌对青霉素耐药性的监测仍是淋球菌耐药性流行病学监测中的重要指标之一.［2］。本次实验结果发现，淋球菌对青霉素的耐药性依然在增加，从1999年的66.7%升至2005年的74.1%，但MIC50降低50％。
环丙沙星曾作为高效广谱抗生素，广泛地用于淋病的临床治疗，是世界卫生组织及美国CDC 1989年推荐用于治疗淋病的一线药物.［3］。1993 年,疾病预防控制中心推荐使用单剂量口服环丙沙星500 mg作为治疗无合并症淋病的主要药物。然而,近年来环丙沙星耐药菌株迅速增多。WHO西太平洋地区2000年淋球菌耐药性监测表明，环丙沙星耐药率最高为中国，达85.2%, 其次为香港，达79.5%,越南42.7%,日本40.0%,菲律宾37.9%,韩国26.3%.［4］。本实验结果显示，淋球菌对环丙沙星敏感性并无上升，但是其耐药率由1999年的95.8%下降至2005年的74.1%。根据疾病预防控制中心制定的淋球菌对抗生素耐药菌株超过5 %则该药不能作为治疗淋病的首选用药的标准,环丙沙星仍不宜作为治疗淋病的首选药物。
虽然本实验检测的淋球菌菌株不多，但由于是跨多年临床分离株，实验数据显示，至2005年淋球菌分离株对头孢曲松仍为敏感和中度敏感，和国内文献报道相似。头孢曲松仍为临床治疗淋病的首选药物，为提高治疗效果和减少细菌产生耐药，临床可考虑头孢曲松与其他抗生素联合使用，但应严格掌握应用指征，给予足量正规治疗，否则在长期亚剂量作用下，必然会导致淋球菌逐渐产生耐药。并且不彻底治疗又会导致病程延长，增加耐药菌株的传播机会。同时，耐药菌株的不断出现又造成淋病的治疗困难，使发病率上升。因此，坚持监测淋球菌对药物的耐药性，可为临床医生制定治疗方案提供依据，从而提高临床疗效，减少耐药菌株的出现，也可为抗生素轮休提供科学依据。
4参考文献
［1］World Health Organization. Sensitivity testing of Neisseria gonorrhoeae:methodo logies for use by participants in the WHO western pacific regional resistance surveillance programme. In: WHO/WPR regional antimicrobial surveillance working group meeting proceedings, 1992, 33-34.
［2］陈政，张铁军，邵月琴，等.上海市淋球菌耐药流行株的聚类分析［J］.中国艾滋病性病,2004,10(6):460-461.
［3］Centers for Disease Control . Sexually transmitted diseases treatment guideline.MMWR［M］, 1989, 38(S-8): 9-24.
［4］The WHO Western Pacific Gonococcal antimicrobial surveillance programme surveillance of antibiotic resistance in neisseria gonorrhoeae in the WHO western pacific region［R］ ，2000.
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