荆门上清丸中儿茶素、表儿茶素的含量测定
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【摘要】目的：建立荆门上清丸的定量分析方法。方法：用高效液相色谱法测定荆门上清丸中儿茶素、表儿茶素的总含量。色谱柱为C18柱(250mm×4．6mm，5um)，流动相为甲醇-5%乙酸，梯度洗脱，流速为1．0mL／min，柱温30℃，检测波长278nm。结果儿茶素，表儿茶素的平均回收率分别为为99.04%，100.74%，RSD分别为1.63%，2.32%。结论：该方法可用于荆门上清丸的质量控制。
【关键词】荆门上清丸；儿茶素；表儿茶素；质量标准
【中图分类号】R917【文献标识码】A【文章编号】1007-8517(2009)08-0025-01
荆门上清丸来源于荆门李氏“老积荫堂”家传的祖传秘方,由儿茶、冰片、麝香、桔梗、荆芥等10味药组成，具有清热解毒的功效，治疗咽喉肿痛，口舌生疮，风火牙痛，伤风中暑，风热咳嗽，小便短赤等症。由于该方配伍精当，疗效卓著。该方中药味特殊，剂量相差悬殊，生产工艺独特，在早期生产时一直沿袭手工塑制成型。为使这一古方更好得到继承和发扬，在基本尊照古方制法的基础上，现研究了荆门上清丸的生产工艺，并制定其质量控制方法。儿茶为方中主药，儿茶素、表儿茶素为主要有效成分，因此荆门上清丸采用儿茶素、表儿茶素作为化学对照品，用HPLC法控制质量。报告如下。
1仪器与试药
1.1仪器高效液相色谱仪DIONEXP680HPLC；梅特勒-托利多电子天平AE100（精密为0.0001g）；水为二次蒸馏水，其余试剂均为分析纯。
1.2试药儿茶素、表儿茶素对照品（中国药品生物制品检定所）；荆门上清丸，荆门齐进药业提供。
2方法与结果
2.1色谱条件①色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-0.5%冰醋酸梯度洗脱，检测波长为278nm。理论板数儿茶素、表儿茶素计应不低于5000。②对照品溶液的制备：精密称取经60℃减压干燥4小时的儿茶素、表儿茶素对照品适量，加甲醇，分别制成0.30mg/ml，0.13mg/ml溶液，即得。③供试品溶液的制备：取荆门上清丸适量，研细，取粉末约0.10g，精密称定，置100ml容量瓶中，精密加入甲醇：水（1:1）的溶剂80ml，超声处理20分钟，放冷，加甲醇：水（1:1）至刻度，摇匀，过滤，取续滤液即得。④测定法：分别精密吸取对照品溶液及供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
2.1.1流动相PH值的选择对同一供试品溶液分别采用不同PH值的流动相，比较了不同PH值的流动相对儿茶素、表儿茶素的峰面积、峰形以及峰分离度的影响，分别采用了0.3%冰醋酸、0.5%冰醋酸、0.7%冰醋酸作为流动相，对供试品进行含量测定（批号：070702）试验结果见表1。流动相的PH值对峰形和样品的含量影响不是特别明显，综合考虑到色谱柱的对酸、碱的耐受性以及使用寿命，选择酸的浓度为0.5%冰醋酸。
2.1.2供试品提取时间的选择取同一批样品（批号：070702），分别超声提取10分钟，20分钟，30分钟测定的含量，结果分别为15.65%、2.57%；16.38%、2.67%；16.01%、2.59%。由此可知，不同提取时间对含量测定结果有一定影响，综合考虑，选择超声提取20分钟作为本品供试品溶液的制备方法。
2.2线性精密吸取不同浓度的对照品溶液10ul分别注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件测定，得儿茶素、表儿茶素回归方程分别为为：y=11.1910x－0.1337，r=0.99991；y=12.5282x-0.0072，r=0.99991。结果表明，儿茶素进样量在0.297μg～5.940μg，表儿茶素进样量在0.130μg～2.600μg的范围内线性关系良好。
2.3准确度取本品（批号：070702）6分，每份约0.1g，研细，精密称定，置具塞100ml容量瓶中，加入甲醇：水（1：1），超声处理20分钟，放冷，精密加入儿茶素、表儿茶素对照品分别约16.50mg、2.50mg，用甲醇：水（1：1）标定至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；按供试品含量测定方法测定，计算回收率。结果本方法的回收率分别为99.04%，100.74%，相对标准偏差分别为1.63%，2.32%。
2.4重复性对同一批荆门上清丸（批号：070702）制备了六份供试品溶液，按供试品含量测定方法进行测定，结果表明，本方法相对标准偏差分别为0.59%、1.83%。
2.5专属性按处方比例制备不含儿茶的缺儿茶阴性样品并制备阴性供试品溶液。分别精密吸取儿茶素、表儿茶素对照品溶液、供试品溶液、阴性供试品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，比较色谱图可知本方法专属性较好，阴性无干扰。见图1～图3。
2.6样品测定按含量测定方法对荆门上清丸十批样品进行测定，结果见表2。据测定结果，暂定本品成品含儿茶素和表儿茶素的总量不得少于15%。
3讨论
本文实验证明,在选定的色谱条件下，儿茶素、表儿茶素色谱峰理论塔板数都可达到10000以上，出峰时间分别在15、20分钟左右，其精密度、重现性、稳定性好，可作为荆门上清丸中儿茶素、表儿茶素含量测定有效方法；另外，通过不同批次的样品含量测定，拟定了儿茶素和表儿茶素的总量，为荆门上清丸药物的质量控制提供了依据。
参考文献
[1]刘超,马林，陈偌芸,等.反相高效液相色谱法测定鸡血藤中儿茶素类成分的含量[J].中国中药杂志,2005,30(18):1433-1435.
(收稿日期：2009.02.21)