眼针对脑缺血再灌注损伤大鼠血清ICAM含量的影响

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摘要：目的 观察眼针对脑缺血再灌注损伤大鼠血清细胞间黏附因子（icam）含量的影响，探讨眼针对脑缺血再灌注损伤治疗的作用机制。方法 应用线栓法复制脑缺血再灌注大鼠模型，采用眼针治疗，于再灌注后3 h、24 h、72 h进行神经功能缺损评分，采用ELISA方法测定大鼠血清ICAM含量的变化。结果 与模型组比较,眼针组大鼠神经功能缺损程度评分明显下降，大鼠血清ICAM含量比模型组降低（P

关键词：眼针；脑缺血再灌注损伤；细胞间黏附因子

中图分类号：R743 R255.2 文献标识码：A 文章编号：1672-1349（2011）06-0707-02Effect of Eye Acupuncture on Intercellular Adhesion Molecule-1 Levels in Rats with Cerebral Ischemia-reperfusion Injury

Pan Qian,Wang Ying,Yu Dan,et al

Liaoning University of Traditional Chinese Medicine （Shenyang 110847）

Abstract:Objective To investigate the effect of the eye acupuncture therapy on serum intercellular adhesion molecule-1 （ICAM） levels in rats with cerebral ischemia-reperfusion injury.Methods The rat models with cerebral ischemia-reperfusion were established by suture method.The ICAM levels in rat serum after the eye acupuncture therapy were detected by ELISA.Results Compared with the model group,the neurologic impairment score in the eye-acupuncture group decreased obviously.The levels of ICAM in rat serum after eye acupuncture therapy was decreased （P

Key words:eye acupunctureischemia-reperfusion injuryintercellular adhesion molecule-1炎性反应的发生在脑缺血再灌注损伤中占有重要地位【sup】［1，2］【/sup】 。 细胞间黏附因子（ICAM）属免疫球蛋白超家族成员,可介导白细胞与血管内皮细胞之间的黏附及白细胞穿过血管壁这一复杂过程。正常情况下ICAM可以在血管内皮细胞有低水平的表达,不会引起机体的病理性损伤而在脑缺血等病理情况下,其表达可明显升高,促进炎症反应的发生，加重脑组织的损伤【sup】［3-5］【/sup】。眼针疗法是在眼眶周围用针刺等刺激防治疾病的一种微针疗法。本研究通过建立大鼠脑缺血再灌注损伤的动物模型，观察眼针治疗对大鼠血清中ICAM表达的影响,探究眼针治疗脑缺血再灌注损伤的相关作用机制。

1 材料与方法

1.1 实验动物与分组 健康SD（SPF级）大鼠80只，雌雄不拘，体重280 g±20 g，由北京维通利华实验动物中心提供，许可证编号：SCXK（京）2007-0001。分笼饲养，室内温度22 ℃，相对湿度45%。将标准颗粒饲料喂养7 d以后按随机数字法分为正常对照组；3 h、24 h、72 h假手术组；3 h、24 h、72 h模型组；3 h、24 h、72 h眼针组，共计10组,每组8只。

1.2 模型制备与评价 在文献【sup】［6］【/sup】基础上，采用改良的线栓法复制大鼠大脑中动脉缺血再灌注损伤模型，并于缺血2 h进行再灌注，再灌注后3 h、24 h、72 h进行神经功能缺损评分。模型评价参照ZeaLonga 5分制评分标准:0分为无症状；1分为不能完全伸展对侧前爪；2分为向对侧转圈；3分为向对侧倾倒；4分为不能自发行走，意识丧失。评分为1分～3分者纳入实验组，未达标准者排除。假手术组术式同模型组、眼针组，区别在于钓鱼线插入深度为0.5 cm～1 cm，其他同手术组。正常组未做处理。

1.3 眼针取穴及刺法 眼针组：用31号13 mm毫针，于大鼠眶周2 mm处针刺，定位参照人体取穴方法，取肝区、上焦区、下焦区、肾区针刺。手法：平刺，进针3 mm。留针20 min,留针期间捻转行针3次，每次1 min。治疗时机： 3 h、24 h、72 h眼针组大鼠均于脑缺血再灌注即刻及取材前30 min，分别进行眼针治疗。除此之外，24 h、72 h眼针组每隔12 h分别治疗1次。

1.4 指标测定 用ELISA方法检测大鼠血清ICAM含量。眼针结束后，麻醉状态下腹主动脉取血3 mL，离心分离血清供检测备用；ELISA试剂盒由美国R&D公司进口分装试剂盒，按照试剂盒说明书进行检测。利用全自动酶标仪，在450 nm处测定各孔的OD值，采用CurveExpert 1.3进行标准曲线的绘制，并计算出对应的浓度值。

1.5 统计学处理 运用SPSS13.0统计软件进行分析，实验数据以均数±标准差（x±s）表示，组间比较采用t检验。

2 结 果

2.1 眼针对脑缺血再灌注损伤模型大鼠神经功能缺损影响（见表1） 造模后与正常组和假手术组比较，模型组和眼针组大鼠均出现不同程度的神经功能障碍,如提尾时左侧前肢不能伸直,行走向对侧旋转或倾倒等；假手术组大鼠无神经功能障碍表现。表明脑缺血再灌注损伤大鼠模型复制成功。模型组大鼠脑缺血再灌注损伤3 h、24 h、72 h后，神经功能出现不同程度的缺损；眼针治疗后，与模型组相比较眼针组大鼠脑缺血再灌注损伤3 h、24 h、72 h后，神经功能缺损程度均呈现不同程度降低（P

1） 为国家重点基础研究发展计划基金资助项目（No.2007CB512702）表1 眼针对脑缺血再灌注损伤模型大鼠神经功能缺损评分的影响（x±s）分

2.2 眼针对脑缺血再灌注损伤大鼠血清中ICAM含量的影响（见表2） 假手术组大鼠血清中ICAM含量较正常组有所升高；模型组大鼠血清中ICAM含量明显高于正常组和假手术组，且随时间延长出现逐渐降低变化；治疗后眼针组大鼠血清中ICAM含量明显低于模型组，且随时间延长出现逐渐降低变化（P

3 讨 论

眼针疗法是由辽宁中医药大学附属医院著名老中医彭静山教授于20世纪70年代首创，在眼眶周围用针刺等刺激防治疾病的一种微针疗法。应用于临床30余年来，疗效显著。已有研究表明脑缺血再灌注损伤的发生与脑组织缺血后的炎症反应有关【sup】［7，8］【/sup】。ICAM属免疫球蛋白超家族成员,与白细胞的浸润关系密切，可促进炎症反应的发生。本实验通过建立大鼠脑缺血再灌注损伤模型，观察眼针治疗对大鼠血清中ICAM表达的影响,探究眼针治疗脑缺血再灌注损伤的相关作用机制。

本实验中大鼠脑缺血再灌注后，血清中ICAM含量较正常明显升高，于再灌注后24 h达到最高峰。此时大鼠神经功能缺损程度亦最严重；经眼针治疗后脑缺血再灌注大鼠血清中ICAM含量明显降低，ICAM含量降低程度与眼针治疗时间长短呈正相关，同时大鼠神经功能缺损程度减轻。该结果表明脑缺血再灌注后，机体可通过增加细ICAM的表达量，进一步促进炎症反应的发生，加重脑组织的损伤。致使大鼠出现如提尾时左侧前肢不能伸直,行走向对侧旋转或倾倒等神经功能缺损的症状。应用眼针的治疗方法，可通过降低脑缺血再灌注大鼠血清中ICAM的含量，抑制白细胞在血管内皮上的黏附,减轻炎性反应的发生，使大鼠神经功能缺损的症状得到缓解。

近年来有关脑缺血早期炎症作用的研究已受到重视，因为继发于脑缺血的炎性反应是缺血性脑损伤的重要部分，对缺血性脑损伤的最终范围和程度的影响有重要意义【sup】［9］【/sup】。本研究通过大脑局灶性脑缺血再灌注动物模型的实验，揭示了眼针疗法治疗中风病与炎症先关的部分作用机制，为发挥针灸防治常见病，完善眼针疗法提供一定的理论依据。

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作者简介:潘茜（1980―），女，讲师，医学博士，现工作于辽宁中医药大学（邮编:110847）；王莹、于丹、王哲、马贤德、刘旭东、关洪全（通讯作者）、王德山，工作于辽宁中医药大学（邮编:110847）。

（收稿日期：2011-02-19）