HPLC法测定不同产地西洋参中人参皂苷Rg1\人参皂苷Re\人参皂苷Rb1含量

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[摘要] 目的：对不同产地西洋参中人参皂苷rg1、人参皂苷re、人参皂苷rb1三种主要药效成分进行高效液相色谱的含量测定。方法：采用C18柱，以乙腈-0.1%磷酸溶液为流动相进行梯度洗脱，流速为1.1 ml/min，检测波长为203 nm，柱温为30℃。结果：人参皂苷Rg1、Re、Rb1、在测定范围内有良好的线性关系，其平均回收率为97.2%~99.0%，RSD为1.61%~2.03%。结论：该方法准确可靠，重现性好，应用性强。

[关键词] hplc；西洋参；人参皂苷Rg1；人参皂苷Re；人参皂苷Rb1

[中图分类号] R917 [文献标识码]A [文章编号]1673-7210（2011）07（b）-103-03

Determination of ginsenoside Rg1, ginsenoside Re, ginsenoside Rb1 from different regions by HPLC

LI Lan, CHEN Hua

Jiangzhong Pharmaceutical Co. Ltd., Nanchang 330029, China

[Abstract] Objective: To detect ginsenoside Rg1, ginsenoside Re, ginsenoside Rb1 of three active principles in American ginseng from different regions by HPLC. Methods: A C18 column was used by gradient elution of acetonitrile -0.1% H3PO4 solution as the mobile phase, the flow rate was 1.1 ml/min and the detective wavelength was set at 203 nm, the column temperature was set at 30℃. Results: All of the three compounds showed good linearities and recoveries were in the range of 97.2%-99.0% with RSD of 1.61%-2.03%. Conclusion: The method is accurate and suitable for the determination of ginsenoside Rg1, ginsenoside Re, ginsenoside Rb1.

[Key words] HPLC; American ginseng; Ginsenoside Rg1; Ginsenoside Re; Ginsenoside Rb1

西洋参为五加科人参属植物西洋参 Panax quinquefolius L. 的干燥根。原产于美国、加拿大，我国西洋参均为人工栽培，集中分布在吉林、辽宁、北京、陕西和山东等地，其质量受产地和生态环境影响很大。西洋参味苦，性凉，入心、肺、肾经，功能以补益为主，可滋阴降火、益气生津。西洋参皂苷是西洋参中最主要的有效成分之一，也是生理活性最显著的物质[1]。研究表明，西洋参皂苷有抗动脉粥样硬化的作用，不同剂量的西洋参都能够降低血脂和血清过氧化酶的活性，保护急性心肌梗死的心肌细胞；西洋参皂苷还有抗疲劳、增强记忆和提高学习能力的作用[2]。西洋参皂苷可以分为三大类群：Ra组、Rb组（包括Ro、Ra1、Ra2、Ra3、Rb1、Rb2、Rb3、Rc、Rd等几个亚型）和Rg组（包括Re、Rg1、Rg2、Rg3、Rh1、Rh2六个亚型）。相关研究[3]表明，在这三大类群中，Ra组的几种单体生理活性较弱，而Rb组和Rg组的生理活性相对较强。有研究把西洋参与人参作对比，西洋参中的西洋参总皂苷以及人参皂苷的含量明显高于同剂量人参的皂苷含量。本文以西洋参中人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1含量作为评价西洋参质量的指标成分，采用HPLC方法对具有代表性的不同地域4种西洋参样品质量进行研究，为评价西洋参质量提供一定依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Agilent 1200高效液相色谱仪（G1329A自动进样器、G1322A在线脱气机、G1310A四元泵、G1316A柱温箱、DAD检测器）、Agilent chemstation工件站、SK3200H超声仪、AB204-S电子天平、METTLER AG245电子天平。

1.2 试药

人参皂苷Rg1（110703-200726）、人参皂苷Re（110705-200822）、人参皂苷Rb1（110704-200921）对照品均购于中国药品生物制品检定所；乙腈为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯；西洋参由江中药业股份有限公司提供。

2 方法与结果

2.1 对照品溶液的制备

精密称取人参皂苷Rg1、Re、Rb1对照品各1.03、2.83、7.55 mg，置10 ml容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成每1 ml含人参皂苷Rg1、Re、Rb1各0.101、0.251、0.699 mg的混合对照品溶液。

2.2 供试品溶液的制备

取西洋参粉末（过三号筛）1 g，称定，置具塞锥形瓶中，精密加入水饱和的正丁醇50 ml，称定重量，置水浴加热回流提取1.5 h，放冷，再称定重量，用水饱和的正丁醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液25 ml，置蒸发皿中，水浴蒸干，残渣加50%甲醇溶解至10 ml量瓶中，定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.3 色谱条件

色谱柱 C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），以乙腈-0.1%磷酸溶液按表1进行梯度洗脱，流速为1.1 ml/min，检测波长为203 nm，柱温为30℃。精密吸取以上溶液各10 μl注入液相色谱仪中测定。

表1 梯度洗脱程序

在该色谱条件下，对供试品峰和对照品峰的系统适应性参数进行考察，供试品和对照品峰理论塔板数以人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1计均大于4 000，Rg1与Re的分离度R为2.0。并且各峰对称因子符合《中国药典》要求[4]，供试品和对照品色谱图见图1。

图1 对照品、供试品色谱图

2.4 线性关系考察

精密吸取“2.1”项下人参皂苷Rg1、Re、Rb1的混合对照品溶液各1、5、10、15、20 μl进样，按“2.3”项下色谱条件测定，记录峰面积，以各对照品的进样量（μg）为横坐标，峰面积为纵坐标进行线性回归，结果见表2。

表2 各组分线性关系测定结果

2.5 精密度试验

取“2.1”项下人参皂苷Rg1、Re、Rb1的混合对照品溶液，按“2.3”项下色谱条件连续进样6次，以峰面积计算，其相对标准偏差RSD人参皂苷Rg1为1.02%、人参皂苷Re为1.23%、人参皂苷Rb1为0.89%。结果表明仪器精密度良好。

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2.6 稳定性试验

取同一供试品溶液（美国，批号1005001），按“2.3”项下色谱条件分别于0、2、4、6、8、10 h进样，结果人参皂苷Rg1、Re、Rb1的RSD%分别为1.45%、1.06%、1.14%。结果表明供试品溶液在10 h内稳定。

2.7 重复性试验

取1 g样品（美国，批号1005001）5份，精密称定，按“2.2”项制成供试品溶液，按“2.3”项下色谱条件测定，并计算含量。样品中人参皂苷Rg1、Re、Rb1的RSD%分别为1.62%、1.41%、1.57%。

2.8 加样回收试验

精密称取已知含量的样品（美国，批号1005001）0.5 g，共5份，分别加入一定量的人参皂苷Rg1、Re、Rb1对照品，按“2.2”项制成供试品溶液，按“2.3”项下色谱条件测定，并计算含量，结果人参皂苷Rg1、Re、Rb1的平均回收率分别为97.2%、98.0%、99.0%，RSD%分别为1.86%、2.03%、1.61%。

2.9 样品测定

取不同产地西洋参样品，按“2.2”项制成供试品溶液，按“2.3”项下色谱条件测定，并计算含量，结果见表3。

3 讨论

3.1 提取方法的考察

本试验曾采用水煎醇提，结果所得人参皂苷含量稍低。采用50%甲醇超声提取，结果杂质峰干扰严重，分离度较差；而采用正丁醇回流方法，人参皂苷含量提取率提高，各组分分离情况良好。

6.2 流动相的选择

本试验所用色谱条件在参考《中国药典》的基础上，经过多次优化而确定[5-6]。人参皂苷Rg1和人参皂苷Re两成分获基线分离的就变量窗口相当窄，绝大多数时候表现为完全重叠或部分重叠的色谱峰[7]，本方法的梯度洗脱能使二者达到较好的分离。

综上所述，不同产地的西洋参其主要化学成分基本一致，但其活性成分含量会有一定差异。从不同地域4种西洋参样品的西洋参皂苷含量测定结果来看，人参皂苷Rg1和人参皂苷Re以美国产西洋参最高，人参皂苷Rb1以加拿大产西洋参最高。

[参考文献]

[1]王蕾,王英平,许世泉,等.西洋参化学成分及药理活性研究进展[J].特产研究,2007,(3):73-77.

[2]孟凡征,李柏.西洋参[M].北京:科学技术出版社,2003.

[3]鲍建材,刘刚,郑友兰,等.西洋参中皂苷类成分的研究[J].人参研究,2004,(1):7-9.

[4]国家药典委员会.中国药典[S].一部.北京:中国医药科技出版社,2010:122.

[5]杨立伟,郑传奇,蒋忠军,等.超高效液相色谱法测定西洋参中人参皂苷Rg1、Re、Rb1的含量[J].中药材,2008,31(1):55-57.

[6]张崇禧,鲍建材,李向高,等.HPLC法测定人参、西洋参和三七不同部位中人参皂苷的含量[J].药物分析杂志,2005,25(10):1190-1194.

[7]赖宇红,陈浩桉,区卓莹,等.三七总皂苷指纹图谱及含量测定HPLC条件的耐用性考察[J].中国天然药物,2006,4(2):107-110.

[8]苏建,李海舟,孔令义,等.不同产地西洋参皂甙成分的HPLC分析[J].天然产物研究与开发,2004,16(6):561-564.

（收稿日期：2011-02-24）

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