高效液相色谱法测定肾衰宁丸中大黄素和大黄酚的含量

开篇：润墨网以专业的文秘视角，为您筛选了一篇高效液相色谱法测定肾衰宁丸中大黄素和大黄酚的含量范文，如需获取更多写作素材，在线客服老师一对一协助。欢迎您的阅读与分享！

(辽宁中医药大学药学院，辽宁大连116600)

摘要：目的：采用高效液相色谱法测定肾衰宁丸中大黄素和大黄酚的含量。方法：应用C18色谱柱，甲醇一0.1％磷酸溶液(85:15)为流动相，检测波长254nm测定大黄素和大黄酚的含量。结果：平均加样回收率分别为95.3％～99.8％和95.1％～99.5％，RSD分别1.08％和1.76％。结论：该方法准确，灵敏度高，可以用于肾衰宁丸中大黄素和大黄酚的含量。

关键词：大黄素；大黄酚；高效液相色谱法

中图分类号：R285　文献标识码：A 文章编号：1673-7717(2007)05-1057-02

肾衰宁丸具有益气健脾，活血化瘀，通腑泄浊的作用。用于脾失运化，瘀浊阻滞，升降失调所引起的腰痛疲倦，面色萎黄。恶心呕吐，食欲不振，小便不利，大便黏滞及多种原因引起的慢性肾功能不全见上述症候者。据报道，该药还具有降低肾大部切除大鼠脂质肾毒性，改善肾功能的功效。

大黄作为方中主要药味之一，主含大黄酚及大黄素等蒽酮类成分。参照2000年版中国药典大黄药材下，采用HPLC法测定了肾衰宁丸中大黄素及大黄酚的含量。实验结果表明，本法有效的排除了其它成分的干扰，能同时准确地测定成品中大黄素及大黄酚的含量，方法简便，重现性好，可作为肾衰宁丸的质量控制方法。

1仪器和试药

日本岛津LC-10A高效液相色谱仪，SPD-10A可见紫外检测器；甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水，其它试剂为分析纯。

2方法与结果

2.1色谱条件

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，DiamonsilTM C185μm，250mm×4.6mm；流动相为甲醇-0.1％磷酸溶液(85:15)；检测波长为254nm；柱温：25℃；流速：1mL/min。

2.2供试品溶液的制备

取装量差异项下本品适量，研细，精密称取1g，加25mL甲醇，称定重量，超声提取30min，称定重量，用甲醇补足损失重量，滤过，弃去初滤液，收集续滤液，即得。

2.3对照品溶液的制备

分别精密称取大黄素对照品和大黄酚对照品适量，分别加甲醇制成每1mL含大黄素10μg的溶液，每1mL含大黄酚20μg的溶液，即得。

2.4 阴性干扰实验

取除去大黄以外的其它药材，按样品制备方法制成阴性液。精密吸取供试品溶液、阴性液各10μL，大黄酚对照品溶液、大黄素对照品溶液各5μL，注入液相色谱仪中，绘制液相色谱图。由色谱图提示，在两种对照品色谱相应的位置上，供试品溶液具有相同保留时间的色谱峰，阴性液在此峰位元吸收，对本品中大黄酚和大黄素的含量测定无干扰，方法专属性良好。

2.5方法学考察

2.5.1线性关系考查　精密称取大黄素及大黄酚对照品(中国药品生物制品检定所提供，含量测定用)13.26mg及10.01m8，分别置100mL容量瓶中，加甲醇适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。分别精密吸取2.0、4.0、6.0、8.0、10.0μL注入高效液相色谱仪中，测定色谱峰面积，以进样量为横坐标，色谱峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，进行线性回归。

大黄素标准曲线方程为Y=1881933X+4927.061，r=0.9997。由测定结果提示，大黄素进样量在0.02652～0.1326μg范围内线性关系良好。

大黄酚标准曲线方程为Y=2757470X-3143.1，r=0.9999。由测定结果提示，大黄酚进样量在0.04004～0.2002μg范围内线性关系良好。

2.5.2稳定性实验考察　取本品0.5g，精密称定，按2.2制成供试品溶液：精密吸取供试品溶液10μL，按0、2、4、6、8h时间间隔，分别进样分析，测定色谱峰面积，结果显示供试品溶液制备后8h内测定，大黄素和大黄酚的色谱峰的峰面积无明显变化，说明在此时间内，供试品溶液化学性质稳定。

2.5.3精密度实验　取本品适量，研细，取0.5g，精密称定．按2.2制成供试品溶液，精密吸取供试液10μL，共计5份，分别注入液相色谱仪中，测定大黄素及大黄酚峰面积，计算，大黄素RSD为0.35％，大黄酚RSD为1.26％。

2.5.4重复性实验　取本品适量，研细，取0.5g，精密称定，平行5份按2.2制成供试品溶液，结果表明本方法重现性好，大黄素及大黄酚的RSD分别为2.6％和2.9％。

2.5.5回收率实验①大黄素的回收率实验考察：取本品，研碎，取0.5g，精密称定，精密加人大黄素对照品5mL(浓度0.1644mg/mL)，按2.2制成供试品溶液，测定结果提示：本方法回收率在95.3％-99.8％之间，RSD为1.80％，符合有关规定。

2.5.6样品中大黄素及大黄酚含量测定　取3批样品各10袋，研细，取1g，精密称定，按供试液制备方法项下试验，测定并计算大黄素及大黄酚含量，结果分别为4.41、3.92、3.98mg/g。

3讨论

应用高效液相色谱法检测大黄素和大黄酚流动相多用甲醇-0.1％磷酸溶液(80:20)，本文流动相为甲醇-0.1％磷酸溶液(85:15)，分离效果好，定量准确。采用高效液相色谱法测定肾衰宁中大黄素和大黄酚的含量，方法准确、可靠、重现性好，作为中药制剂肾衰宁丸的质量控制方法有利于提高质量、确保疗效。

注：本文中所涉及到的图表、注解、公式等内容请以PDF格式阅读原文。