人参皂苷Rg3微乳的质量评价

开篇：润墨网以专业的文秘视角，为您筛选了一篇人参皂苷Rg3微乳的质量评价范文，如需获取更多写作素材，在线客服老师一对一协助。欢迎您的阅读与分享！

摘要：目的 对自制人参皂苷rg3微乳剂的质量进行评价。方法 通过测定人参皂苷Rg3的理化参数、载药量及体外释放度对人参皂苷Rg3微乳剂进行质量评价。结果 所制备的人参皂苷Rg3微乳剂为无色澄清、透明均一的溶液，平均载药量为3.5 mg/mL，体外释放度试验表明Rg3微乳的释药速度和程度都明显大于市售胶囊。结论 制备的人参皂苷Rg3微乳剂的理化参数及体外释放度等指标达到药典要求。

关键词：人参皂苷Rg3；微乳剂；质量评价

DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2013.05.022

中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2013）05-0062-03

人参皂苷Rg3具有显著的抗肿瘤作用，能够抑制肿瘤细胞浸润和转移[1]，但口服后血浆浓度很低，口服3.2 mg/kg后测得最大血药浓度仅为（16±6）?g/L[2]。微乳制剂则可提高水难溶性药物和脂溶性药物的溶解度，促进大分子药物在体内的吸收，提高其生物利用度[3]。本试验通过测定自制的人参皂苷Rg3的理化参数及载药量，对人参皂苷Rg3微乳剂进行质量评价。

1 仪器与试药

Agilent 1100高效液相色谱仪，美国安捷伦公司；Mettler Toledo 精密电子天平，瑞士梅特勒-托利多（上海）公司；85-2型恒温磁力搅拌器，巩义市予华仪器有限公司；AS-20500A超声波清洗器（500 W，40 kHz），天津奥特赛恩斯仪器有限公司；WH-90A型微型混合器，上海亚荣生化仪器厂；DDS-11C型电导仪、PHS-2C型pH计，上海雷磁仪器厂；DR-A1阿贝折光仪，上海光学仪器厂；平氏黏度计，上海精密科学仪器厂；Zetasizer 3000HS激光粒度测定仪，美国Particle Sizing System；日立H-7650透射电子显微镜，日立公司；透析袋（直径25 mm，分子截留量12 000～14 000），Sigma公司；ZRS-8 g智能药物溶出仪，天大天发科技公司。

聚氧乙烯辛基苯基醚（曲拉通X-100），上海凌峰化学试剂有限公司；异丙醇，国药集团化学试剂有限公司；油酸乙酯、亚甲基蓝、甲基红，上海飞祥化工厂。参一胶囊，吉林亚泰制药有限公司，批号080503；人参皂苷Rg3（R型）对照品，自制，批号080113，高效液相色谱法（HPLC）纯度>98%；人参皂苷Rg3（R型）原料药，自制，批号080221，HPLC纯度为91.89%；乙腈、甲醇为色谱纯，其余为分析纯；水为高纯水。

2 方法与结果

2.1 人参皂苷Rg3微乳制备

经过前期相关试验研究，确定自制人参皂苷Rg3空白微乳的处方组成为（质量比）：曲拉通X-100，30%；异丙醇，15%；油酸乙酯，5%；蒸馏水，50%。按相应质量比取上述处方各成分于具塞锥形瓶中，用恒温磁力搅拌器于25 ℃搅拌至澄清透明状，即为空白微乳。

将新鲜配制的空白微乳放置过夜，再向其中加入过量的人参皂苷Rg3原料药，磁力搅拌10 min，再超声处理10 min，取出，放冷，4000 r/min离心10 min去除过量人参皂苷Rg3，上清液即为人参皂苷Rg3微乳。

2.2 人参皂苷Rg3微乳的理化性质研究

2.2.1 性状 观察可见自制人参皂苷Rg3微乳均为无色澄清、透明均一的溶液，流动性好。

2.2.2 黏度 用平氏黏度计按2010年版《中华人民共和国药典》（二部）附录Ⅵ G规定的方法，在20 ℃恒温水浴中，人参皂苷Rg3微乳的黏度为（4.74±0.01）mm2/s。

2.2.3 折光率 按2010年版《中华人民共和国药典》（二部）附录Ⅵ F规定，在恒温20 ℃条件下用阿贝折光仪测定人参皂苷Rg3微乳的折光率为1.384 2±0.000 7。

2.2.4 电导率 在恒温水浴20 ℃条件下测定人参皂苷Rg3微乳的电导率为（125.62±0.73）?s/cm。

2.2.5 pH值 用PHS-2C型pH计，20 ℃条件下测定人参皂苷Rg3微乳的pH值为6.12±0.06。

2.2.6 微乳类型 选用简便快捷、直观的染色法[4-5]鉴别所制备微乳的类型。取相同体积的人参皂苷Rg3微乳液，同时分别滴加甲基红及亚甲基蓝染料溶液各1滴，静止放置，观察两种染料（红色和蓝色）在微乳液中扩散速度的快慢以及外观的变化。甲基红染料为油溶性染料，易在油相中扩散；亚甲基蓝染料为水溶性染料，易在水溶液中扩散。如蓝色的扩散速度大于红色的扩散速度，则为O/W型微乳，相反则为W/O型微乳。结果在人参皂苷Rg3微乳中蓝色的扩散速度大于红色的扩散速度，所制备人参皂苷Rg3微乳为O/W型微乳。静置2 h后，亚甲基蓝染料在外相（水相）中扩散，形成均一的溶液；而甲基红染料扩散到内相（油相）中，形成星星点点的絮状溶液，进一步表明所制备的微乳为O/W型。

2.2.7 形态观察 采用负染法制备样品：将载有Formvar支持膜的铜网置于蜡板上，在膜上滴加人参皂苷Rg3微乳液各1滴，自然晾干20 min。再滴加1.5%磷钨酸1滴，自然晾干10 min，用滤纸吸走多余的液体，置于透射电子显微镜下观察，拍照，结果见图1。可见，人参皂苷Rg3微乳乳滴外观大多数为圆球形，基本分布在10～100 nm之间。

图1 人参皂苷Rg3微乳透射电镜照片

2.2.8 人参皂苷Rg3微乳的粒径及粒径分布 采用激光散射法测定人参皂苷Rg3微乳的粒径及粒径分布。测定条件：波长633 nm，温度25 ℃，激光检测角度90°，用蒸馏水将含药微乳稀释5倍，结果见图2。从测定结果可知，人参皂苷Rg3微乳的平均粒径为43.5 nm，多分散指数（PDI）为0.21。PDI反映颗粒粒径均一的程度，其值介于0到1之间，数值越小，表示颗粒的单分散性越好，粒径分布越窄。

图2 人参皂苷Rg3微乳的粒径分布图

2.3 人参皂苷Rg3微乳的含量测定

2.3.1 色谱条件 色谱柱：Kromasiol ODS-C18柱（4.6 mm×250 mm，5 ?m）；流动相：乙腈-0.2%磷酸（60∶40）；体积流量：1.0 mL/min；检测波长：203 nm；柱温：30 ℃。

2.3.2 方法学考察 精密称取人参皂苷Rg3（R型）对照品10.20 mg于50 mL量瓶中，加甲醇超声溶解并稀释至刻度，摇匀，制成浓度为204 ?g/mL的G-（R）Rg3对照品溶液。精密吸取人参皂苷Rg3微乳100 ?L于10 mL量瓶中，加5 mL甲醇稀释，超声处理10 min，再加甲醇至刻度，摇匀，得供试液。精密吸取对照品溶液5.0 mL于10 mL容量瓶中，配制成浓度为102 ?g/mL的溶液，再依次稀释2倍，配制成浓度分别为204、102、51、25.5、12.75、6.375 ?g/mL的对照品溶液，进样10 ?L，以进样浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，进行线性回归，计算回归方程Y=4.149 8X+1.474 6，r=1。人参皂苷Rg3进样浓度在0.063 75～2.04 ?g范围内与峰面积呈良好线性关系。测得人参皂苷Rg3 24 h稳定性试验RSD=1.04%，连续进样峰面积的精密度RSD=0.62%，高、中、低浓度的人参皂苷Rg3平均加样回收率分别为98.41%、98.76%、99.20%。

2.3.3 含量测定 按“2.3.1”项下色谱条件测定人参皂苷Rg3微乳剂中人参皂苷Rg3的含量，结果见表2。

2.4 人参皂苷Rg3微乳的体外释放度考察

2.4.1 透析袋对药物浓度的影响考察 精密移取浓度约为0.3 mg/mL的人参皂苷Rg3溶液5 mL，加至450 mL释放介质中，在37 ℃下搅拌均匀后，测定释放介质中Rg3的浓度C0；将已浸至渗透扩散平衡12 h的透析袋（其表面积相当于6个小透析袋总表面积）浸入释放介质中，不断搅拌。2 h后测定释放介质中Rg3的浓度C1，比较Rg3浓度的变化，结果见表3。结果表明，加入透析袋后，Rg3的浓度没有改变，说明试验前透析袋内外已达到渗透扩散平衡，小分子药物Rg3可以任意穿过透析膜，透析袋对Rg3无吸附作用。

2.4.2 体外释放度的测定 采用总体液平衡反向透析法测定，以市售参一胶囊（吉林亚泰制药有限公司，批号20080503）为对照。分别以450 mL的0.1 mol/L盐酸（模拟胃液）及pH 6.8 PBS（模拟肠液）为溶出介质，转速100 r/min，温度37 ℃，将7个大小相

同、内含2 mL溶出介质的透析袋完全浸入介质中，平衡12 h。取人参皂苷Rg3微乳10 mL（相当于Rg3 35 mg），加至溶出介质中。分别于10、30、60、90、120、150 min各取出1个透析袋，倒出袋内溶液，HPLC测定浓度，计算累积释放百分率。其中一透析袋在溶出介质中保留12 h后测定，作为药物从微乳中完全释放后介质中药物的总浓度。结果见图3。结果表明，2种不同pH值的释放介质中Rg3微乳的释药速度和程度都明显大于市售胶囊，在模拟肠液中的释放较模拟胃液中的释放慢，可能是因为Rg3在中性环境中的溶解度比在酸中的溶解度低的缘故。

3 小结

染色法及电导法鉴别所制备人参皂苷Rg3微乳为O/W型；平均粒径为45.3 nm，多分散指数为0.21，透射电镜观察其乳滴基本为圆球形，多在10～100 nm之间； 2种不同pH值的释放介质中Rg3微乳的释药速度和程度都明显大于市售参一胶囊，且Rg3微乳在模拟胃液中的释放较模拟肠液中的释放快，其他各项指标也符合药典要求，满足口服给药要求，达到预期目的。

参考文献：

[1] 户出健彦.人参皂苷对卵巢癌细胞的影响[J].日本东洋医学杂志， 1995，45（5）：178.

[2] 庞焕，汪海林，富力，等.20（R）-人参皂苷Rg3人体药代动力学研究[J].药学学报，2001，36（3）：170-173.

[3] 梁文权.乳状液科学与技术基础[M].北京：科学出版社，2001：211-246.

[4] Suchat Watnasirichaikul， Nigel M Davies， Thomas Rades， et al. Preparation of biodegradable insulin nanocapsules from biocompatible microemulsions[J]. Pharm Res，2000，17（6）：684-689.

[5] 王俊敏.胸腺五肽微乳制剂的研究[D].天津：天津大学，2006.

（收稿日期：2012-09-08，编辑：陈静）