蛛网膜下腔出血后大鼠脑组织中SOCS3的表达研究
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摘要：目的 细胞因子信号转导负调控因子3（SOCS3）在蛛网膜下腔出血（SAH）后早期脑组织中的分布和表达变化。方法 成年雄性SD大鼠56只，分为对照组、SAH后3h、6h、12h、24h、48h、72h共7组（每组8只）。通过建立大鼠SAH模型，于SAH后不同时间点，应用免疫印迹技术和免疫组化检测SAH后脑组织中socs3的分布和表达变化。 结果 大鼠SAH后3h脑组织中SOCS3蛋白水平开始升高，24h达到高峰，其后逐渐下降，72h仍高于对照组。同时，SOCS3在脑组织中广泛存在，对照组中SOCS3主要定位于胞核，SAH后SOCS3胞浆阳性增加。结论 大鼠SAH后早期伴有SOCS3信号通路的激活，提示SOCS 3信号通路可能参与SAH后早期脑损伤中的病理生理改变
关键词：蛛网膜下腔出血；细胞因子信号转导负调控因子3；早期脑损伤
蛛网膜下腔出血（subarachnoid hemorrhage，SAH），一种严重的神经系统疾病，具有较高发病率和死亡率。现{Fujii，2013#51}研究表明早期脑损伤（early brain injury，EBI）是造成SAH患者发生迟发性脑缺血并导致高致死率和致残率的首要原因，及时有效的对早期脑损伤进行治疗和干预成为提高SAH患者生存和预后的重要手段[1]。酪氨酸蛋白激酶/信号转导子和转录激活子（Janus protein tyrosine kinase/signal transducer and activator of transcription，JAK/STAT）途径是细胞因子信号转导的重要途径之一，作为参与多种细胞因子传递的通路，其抑制或终止因子研究较少[2]。细胞因子信号转导负调控因子（Suppressor of cytokine signaling，SOCS）在细胞因子信号转导中发挥重要作用，为多种细胞因子转导途径的负向调节者，主要通过JAK/STAT途径发挥调控作用[3]。
1资料与方法
1.1动物分组 雄性SD大鼠（N=56体重250～300g），随机数字表法分对照组和SAH组，SAH组据处理时间分为6个亚组各8只：3h、6h、12h、24h、48h、72h。
1.2主要试剂 兔抗socs3多克隆抗体（ab16030）购自Abcam公司；兔抗β-actin多克隆抗体（AP-16030）购自Bioworld公司，常规免疫印迹及免疫组化试剂。
1.3 ①动物模型：采用改良后视交叉池注血法建立SAH模型[4]。正常对照组不作处理。②制备标本：伤后不同时相处死大鼠。每组4只，左心室灌注200ml 0.01mol/L磷酸盐缓冲液后断头取脑，分离颞叶基底部脑组织保存于80℃，用于Western-blot检测。余大鼠灌注后，250ml 4%多聚甲醛灌注，取脑，蔗糖脱水，冰冻切片用于免疫组化。③Western-blot：裂解后提取总蛋白定量行Western-blot检测。兔抗大鼠SOCS3多克隆抗体（1/1000）、兔抗β-actin多克隆抗体（1/5000）。④免疫组化：二氨基联苯胺（DAB）染色，苏木素复染。兔抗大鼠SOCS3多克隆抗体（1/100）。
2结果
2.1 SAH后颞叶基底部脑组织中SOCS3蛋白水平的变化 见图1。对照组中SOCS3表达量较低，SAH后SOCS3的表达即开始升高，至SAH后24h达到峰值，其后逐渐下降，至SAH后72h仍然处于高表达状态。
2.2 SAH后颞叶基底部脑组织中SOCS3的分布 见图2。各组大鼠颞叶基底部皮层可见SOS3阳性细胞分布，主要为神经元及部分胶质细胞。对照组中，SOCS3阳性细胞较少，阳性染色主要分布于胞核（见图2A）。SAH后SOCS3阳性细胞表达明显增多，同时胞浆染色阳性显著（见图2B）。
图1 Western-blot分析对照组及SAH后各时间点大鼠颞叶基底部脑组织SOCS3蛋白表达
图2免疫组化分析SOCS的细胞定位
图A为对照组，可见SOCS3在大脑中分布广泛，主要为胞核内
图B为24h高峰期，SOCS3表达量明显升高，胞浆阳染
3讨论
细胞因子信号转导负调控因子（SOCS）在细胞因子信号转导中发挥重要作用，为多种细胞因子、生长因子、激素信号转导途径的负向调节，其主要通过JAK/STAT途径对细胞因子进行调控[3]。
本项研究中，我们发现SAH后大鼠脑组织中SOCS 3的蛋白表达从3h开始升高，SAH后24h达到高峰，72h仍高于正常对照组。同时明确在SAH后SOCS3细胞定位。对照组中，SOCS3少量表达于胞核，而SAH后，SOCS3胞浆阳性逐渐升高，于SAH后12h为最高，其后胞核阳性也开始下降。结果表明SAH后SOCS3蛋白水平表达升高，同时伴随胞质阳性的增加，提示激活SOCS3参与SAH后EBI的病理生理改变。但不同疾病中其机制有差异。
现临床阶段仍没有直接有效手段避免SAH后EBI的发生。进一步深入研究SOCS3信号通路在SAH后脑损伤中的作用机制，有可能为今后SAH的治疗提供新的靶点。
参考文献：
[1]宋锦宁，安吉洋，蛛网膜下腔出血后早期脑损伤及神经保护治疗的研究进展.西安交通大学学报（医学版），2013.34（6）.
[2]赵金兵，杭春华，JAK-STAT通路及其在神经系统疾病中的研究进展[J].中华神经外科疾病研究杂志，2011.10（4）：p.379-381.
[3]白莉，钱桂生，细胞因子信号转导负调控因子家族.生命的化学，2002.22（5）：p.448-451.
[4]田卫东，大鼠蛛网膜下腔出血后早期脑损伤模型的建立[J].中华神经外科疾病研究杂志，2012.11（2）：p.128-131.