216例金黄色葡萄球菌中红霉素对克林霉素诱导耐药检测

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【摘要】 目的 了解金黄色葡萄球菌（SA）对红霉素和克林霉素的耐药性， 检测红霉素对克林霉素诱导耐药的发生率。 方法 采用美国临床实验室标准化协会（CLSI）推荐的纸片扩散法， 用红霉素和克林霉素双纸片法（D-试验）和VITEK 2 Compact AES分析红霉素对克林霉素诱导耐药表型。 结果 216株SA中有76株（MSSA22株， MRSA54株）呈红霉素耐药、克林霉素敏感， 其中29株D-试验阳性（MSSA 8株， MRSA 21株），检出率分别为36.4%、38.9%。结论 临床微生物实验室应加强对SA中克林霉素诱导耐药的检测， 以指导临床医生合理选用大环内酯类、林可酰胺类抗菌药物。

【关键词】 金黄色葡萄球菌；红霉素；克林霉素；诱导耐药； D-试验

金黄色葡萄球菌（SA）是引起医院感染和社区感染的常见致病菌之一， 自1961年英国医师Jerons首次临床报告第一例耐甲氧西林SA（MRSA）感染患者以来， 其耐药性逐年增加， 已经成为医院感染的主要致病菌。MRSA往往又同时对B-内酰胺酶类抑制剂复合抗生素及碳青酶烯类耐药。因此， 临床常使用大环内酯类（红霉素）、林可酰胺类（克林霉素）、B类链阳霉素抗生素治疗MRSA引起的感染。克林霉素由于其组织渗透性强等特点常用于皮肤和软组织感染的治疗， 也是青霉素和头孢菌素过敏的常规替代药品， 随着这些药物使用增多， 其耐药性也增加。且红霉素具有诱导克林霉素耐药的作用， 使得克林霉素治疗无效。通过VITEK 2 Compact高级专家系统（AES）进行检测， 了解福建省莆田学院附属医院可诱导克林霉素耐药的发生率。

1 资料与方法

1. 1 菌株来源 2013年3月～2013年3月从本院临床科室送检的标本中分离SA共216株， 其中痰液142株、分泌物和脓液61株、尿液6株、血液3株， 其他4株。

1. 2 鉴定及药敏试验 细菌鉴定采用法国生物梅里埃公司VITEK-2 Compact全自动分析系统进行鉴定到种， 药敏卡选用AST-GP67测定， 该卡采用2个孔位检测红霉素诱导克林霉素耐药；1个孔位是0.5 μg/ml克林霉素， 另一个孔位是（0.25 μg/ml克林霉素+0.5 μg/ml红霉素）。D-试验检测采用美国临床实验室标准化协会（CLSI）2009年版标准进行操作与判断结果。

1. 3 培养基及药敏纸片 Mueller-Hinton琼脂平板、哥伦比亚血琼脂平板和巧克力色血琼脂平板均购自郑州安图绿科生物工程有限公司， 药物纸片红霉素（15 μg/片）和克林霉素（2 μg/片）均购自英国Oxoid公司。

1. 4 质控菌株 金黄色葡萄球菌ATCC25923购自福建省临床检验中心。

2 结果

2. 1 MRSA检出率 216株SA中MSSA 62株（28.7%）， MRSA 154株（71.3%）。

2. 2 SA对红霉素和克林霉素药敏结果 216株SA中， 红霉素耐药而克林霉素敏感76株（35.2%）， 红霉素敏感而克林霉素耐药2株（0.9%）， 两者同时耐药114株（52.8%）， 两者同时敏感24株（11.1%）。

2. 3 D-试验结果 对76株红霉素耐药而克林霉素敏感的SA进行D-试验， 其中22株MSSA， D-试验阳性8株， 发生率为36.4%， 54株MRSA， D-试验阳性21株， 发生率为38.9%。将以上D-试验阳性的SA经VITEK-2 Compact AES检测显示耐药表型均为MLSB INDUCIBLE， 诱导克林霉素耐药阳性， 与CLSI纸片确证D-试验法比较， 灵敏度为100%。

3 讨论

在SA中， 获得性对大环内酯类和林可霉素耐药很普遍。对大环内酯类耐药机制有能量依赖的主动外排和核糖体靶位改变2种[1]， 前者由msrA基因编码外排蛋白导致对大环内酯类和B型链阳霉素耐药， 对克林霉素敏感。后者由msr基因编码， 引起对具有相同靶位的大环内酯类、林可霉素类和B型链阳霉素同时耐药（MLSB耐药）。耐药可分为结构型（cMLS）和诱导型（iMLS）。cMLS型耐药的表型为对红霉素和克林霉素均耐药， 常规的体外药敏试验均能测出。iMLS型耐药的表型为对红霉素耐药而克林霉素敏感， 用常规药敏试验不能测出， 为此， CLIS/NCCLS于2004年推荐用D-试验作为红霉素诱导克林霉素耐药的检测。以免造成临床治疗失败。

以上D-试验结果显示， MSSA 和MRSA的诱导型克林霉素耐药的发生率差异不大， 分别为36.4%和38.9%， 表明本院SA诱导耐药率较低， 与杨燕[2] 报道相近， 但比黎文成[3]报道的低， 这可能与不同地区SA的红霉素耐药基因构成的差异及大环内酯类药物使用多少有关。对于红霉素耐药克林霉素敏感的SA， 本院微生物室多采用VITEK-2 Compact 通过AES中的药敏综合分析程序直接筛选红霉素诱导克林霉素耐药表型。仪器综合分析检测结果及AES后报告最终结果。与CLSI纸片确证D-试验法比较， 灵敏度为100%。为此可为临床及时提供准确可靠的结果， 指导医生更合理地使用抗生素。

参考文献

[1] Leclercq R.Mechanisms of resistance to macrolides and lincosamides： nature of the resistance elements and their clinical implications.Clin Infect Dis， 2002，34（4）：482-492.

[2] 杨燕，孙长贵，曾贤铭，等.耐红霉素葡萄球菌对克林霉素诱导型耐药的检测.国际检验医学杂志， 2007，17（2）：121-124.

[3] 黎文成，李勰璘，付玉梅，等. D-试验在葡萄球菌对克林霉素诱导型耐药的检测.广州医学院学报， 2008，36（1）：41-42.