罗氟司特主药和有关物质的HPLC法测定

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摘要：目的 建立罗氟司特中主药和有关物质含量的测定方法。方法 高效液相色谱法，色谱柱为Agilent Zorbax SB C18（5μm 4.6×250mm），流动相为乙腈：水：冰乙酸=40：60：0.1，流速为1.0mL/min，检测波长为210nm，进样量为20μl。结果 罗氟司特与有关物质及各中间体分离较好；罗氟司特含量浓度的线性范围为29.72～267.5μg/ml（r=0.9999）；平均回收率为99.53%（RSD=0.04%）；三批样品中总杂含量分别为0.0705%、0.0703%、0.0719%。结论 本方法操作简便、快捷、结果准确、可靠，可用于罗氟司特的质量控制。

关键词：高效液相色谱法；罗氟司特；有关物质；含量测定

中图分类号：R965 文献标识码：A 文章编号：1004-4949（2013）03-0-02

罗氟司特，英文名 roflumilast，化学名为3-环丙基甲氧基-N-（3，5-二氯吡啶-4-基）-4-二氟甲氧基苯甲酰胺（3-cyclopropylmethoxy-N-（3，5-dichloropydin-4-yl）-4-（difluoromethoxy）benzamide），是德国Altana公司开发的磷酸二酯酶4（PDE4）抑制剂，2010年7月经欧盟批准首次于德国上市，临床用于治疗慢性阻塞性肺病（COPD），商品名Daxas，2011年3月经美国FDA批准上市。慢性阻塞性肺疾病（COPD）是一种严重的致残、致死性疾病，已造成沉的社会经济负担，本品通过抑制PDE4减少炎症介质的释放，进而抑制如COPD和哮喘等呼吸道疾病对肺组织造成的损伤[1～3]。

目前国内对罗氟司特含量和有关物质的测定方法未见报道，国外对罗氟司特含量和有关物质的测定主要是高效液相色谱法[4]，但其所用液相方法分离的杂质不多，且采用的是超高压液相色谱，不利于一般实验室或药厂推广应用。笔者建立了普通高效液相色谱法测定其含量和有关物质，为罗氟司特的质量评价和标准的建立提供科学依据。

1 仪器与试药

hplc仪，日本Shimadzu公司。

对照品：4-氨基-3，5-二氯吡啶（a）（批号20111112，无锡药兴科技有限公司）；罗氟司特氮氧化物（b）（批号为R639710，剀试（上海）科技有限公司）；3-环丙基甲氧基-二氟甲氧基苯甲酸（c）（批号20111109，无锡药兴科技有限公司）；3-环丙基甲氧基-二氟甲氧基苯甲醛（d）（批号20111127，无锡药兴科技有限公司）；罗氟司特（e）（批号为lfst-001，由南京艾德凯腾生物医药有限责任公司提供）。

罗氟司特（批号：120001、120002、120003），由南京艾德凯腾生物医药有限责任公司提供，乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯。罗氟司特市售为Forest res inst inc公司提供，批号为A217848。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

2.2 溶液的制备

2.2.1主药含量测定用溶液

取罗氟司特样品适量，精密称定，用流动相溶解并稀释至刻度，浓度约为0.15mg/ml，作为供试品溶液；另取罗氟司特对照品，同法用流动相溶解并制成同样浓度的对照品溶液。

2.2.2 有关物质测定用溶液

取罗氟司特适量，用流动相制成浓度为0.15mg/ml的溶液，作为供试液。另取罗氟司特对照品适量，用流动相制成浓度约为1.5μg/ml的对照液。

2.3 系统适用性试验

精密量取“2.2.1”项下对照品、供试品溶液各20μl，按照“2.1”项下色谱条件进样，并以流动相作为阴性对照，在上述色谱条件下，罗氟司特的理论塔板数符合要求，无干扰，供试品溶液各杂质与主峰以及各杂质之间分离良好。

2.4 专属性考察

取罗氟司特及其各主要杂质分别进样测定，并取罗氟司特原料药与主要中间体的混合溶液进样测定，见图1，结果显示主药与主要中间体分离良好。

2.5 线性关系与定量限检测限考察

2.6 重复性试验

2.7 回收率试验

2.8 样品含量及有关物质测定

3 讨论

3.1 检测波长的选择

取罗氟司特对照品及各中间体适量，分别加入流动相制成浓度为0.15mg/ml的对照、供试品溶液，在DAD上于190-400nm波长范围内进行扫描。结果对照品供试品溶液于210处有最大吸收，而合成各步的中间体和有关物质在210nm处均有最大吸收，且在此处无干扰，见图1，故检测波长选为210nm。

3.2 流动相的选择

4 结语

本文从实际生产出发，通过大量的试验摸索，对罗氟司特的质量控制进行了系统的研究。在后期试验中，考察了对罗氟司特用强光，强碱，强酸，强氧化进行破坏时在此色谱条件下的分离情况，罗氟司特与各杂质以及各杂质之间均能达到良好分离。另外罗氟司特片剂主药与各杂质以及各杂质之间在此色谱条件下也能达到良好分离。所述方法均通过了科学的验证，并将运用在实际的生产过程中。推进了该药在国内的研发工作，为该药在国内的上市销售创造了可能。

参考文献

[1] 韩伟，周新.慢性阻塞性肺疾病的治疗新选择——罗氟司特.世界临床药物.2011，32（7）：396-399.

[2] 马培奇.慢性阻塞性肺病治疗新药罗氟司特.上海医药.2011，32（4）：201-202.

[3] 封宇飞.磷酸二酯酶-4抑制剂罗氟司特的药理与临床研究新进展.中国新药杂志.2011，20（14）：1257-1260.

[4] Barhate V.D.and Deosthalee P.C.Validation of Rapid liquid Chromatographic Method for the Determination of Roflumilast.J. Chem. Pharm.Res.2011，3（2）：770-775.