卡泊三醇对白癜风患者角质形成细胞中IL―8及其受体CXCR2分泌的影响
开篇：润墨网以专业的文秘视角，为您筛选了一篇卡泊三醇对白癜风患者角质形成细胞中IL―8及其受体CXCR2分泌的影响范文，如需获取更多写作素材，在线客服老师一对一协助。欢迎您的阅读与分享！
doi：10.3969/j.issn.1007-614x.2013.23.64
摘 要 目的：探讨卡泊三醇对白癜风患者皮损处角质形成细胞il-8及其受体cxcr2分泌的影响。方法：外用卡泊三醇前及使用3个月和6个月后，分别取材培养白癜风患者皮损处角质形成细胞，通过酶联免疫吸附法（ELISA）检测上清液中IL-8的表达，通过流式细胞仪分析趋化因子受体CXCR2的表达。结果：外用卡泊三醇后，白癜风患者角质形成细胞IL-8及其受体CXCR2的分泌明显降低。结论：卡泊三醇能有效抑制白癜风患者角质形成细胞中IL-8及其受体CXCR2的分泌，这可能是卡泊三醇治疗白癜风的作用机制之一。
关键词 白癜风 卡泊三醇 IL-8 CXCR2
Abstract Objective：To investigate the effect of calcipotriol on the expression of IL-8 and CXCR2 of keratinocytes from vitiligo lesions.Methods：Keratinocytes were isolated from vitiligo lesions as the patients have used calcipotriol for 3 and 6 mouths respectively and kept in culture.IL-8 was tested in the culture supernatants of vitiligo keratinocytes by ELISA.The expression of CXCR2 on keratinocytes from affected skin was tested by flow cytometry.Resulys：IL-8 and CXCR2 expression in the keratinocytes from vitiligo lesions was apparently reduced after calcipotriol treatment.Conclusions：The inhibition of IL-8 and CXCR2 expression in keratinocytes.may play a role in the affect of calcipotriol in the treatment of vitiligo.
Key words Vitiligo；Calcipotriol；IL-8；CXCR2
白癜风是一种常见的获得性、以局部或全身皮肤色素脱失为特征的皮肤疾病，愈来愈多的证据表明其发病和免疫学说密切相关[1]。卡泊三醇为维生素D3的衍生物，具有免疫调节、抗炎性递质的作用，目前已广泛应用到银屑病的治疗[2]，但其在白癜风中的作用及其机制不明。本研究通过检测外用卡泊三醇前后白癜风患者皮损处角质形成细胞中IL-8及其受体CXCR2分泌的变化，初步探讨卡泊三醇外用治疗白癜风的作用及其机制。
资料与方法
本院收治寻常型稳定期的白癜风患者32例，均为多发患者，皮损分布于面部、躯干、四肢等各处。其中男23例，女9例；年龄12～65岁，平均38.6岁岁；平均病程4.3年。白癜风皮损不超过体表面积的10%，使用卡泊三醇前1个月内未用过其他方法治疗。排除自身免疫病及严重系统性疾病。阴性对照组20例为整形美容科切除的正常皮肤，男13例，女7例，年龄20～55岁。
培养基及其他试剂：Keratinocyte-
SFM培养基购于Gibco公司。成套人IL-8检测试剂盒、FITC荧光素标记的兔抗人CXCR2多克隆抗体购于武汉博士德生物工程有限公司。
方法：①皮损取材：使用BZ-2A型白癜风取皮仪进行发疱法取皮。在无菌条件下操作，取材部位选取躯干或四肢等易取材处皮损，经负压吸引发庖后，切取约1cm2大小表皮组织。②角质形成细胞的培养及其上清液的收集：对切取标本用加入抗生素的PBS清洗3次；之后将组织分剪成2mm×5mm大小放入15ml离心管中，加入4ml 0.25% Dispase，4℃消化过夜（约18小时），用眼科镊分离可能残留的真皮组织；将分离的表皮放入离心管中，加入4ml 0.25% Trypsin，37℃，消化10分钟；用含血清的培养液终止消化，用吸管反复吹打以获得单细胞悬液，过200目筛网以祛除剩余残渣，收集滤液，离心祛除消化液；用PBS清洗1次，用Keratinocyte-SFM重悬以（2～3）×105接种。置于37℃ 5% CO2孵箱培养12小时，然后消化贴壁细胞，收集计数，部分用于检测CXCR2的表达，其余部分以5×105/ml悬浮于Keratinocyte-SFM培养基中，培养48小时，收集其上清液，分装并置于-20℃冰箱保存待用。培养的角质形成细胞见图1。③培养细胞上清液中IL-8的检测：采用ELISA法检测角质形成细胞培养上清液中IL-8的表达情况，操作如下：在已包被抗人IL-8抗体的96孔板中加入生物素化IL-8抗体50μl，再分别加入经倍比稀释的人IL-8标准品，室温孵育3小时，形成附着于板底的抗体-IL-8生物素化抗体的复合物。清洗液洗3遍，甩干，加入HRP标记的亲和素稀释液，室温孵育30分钟；清洗3遍，甩干，于各孔中加入100μl底物溶液，避光室温孵育30分钟，加入100μl反应终止液，酶联检测仪检测其A450值。④细胞表面表达CXCR2的检测：细胞用FACS标记液悬浮1×106细胞/ml，加入离心管，每管100μl，再加入FACS标记液稀释的一抗20μl，单抗标记浓度5μg/ml。置4℃标记45分钟后，FACS标记液洗细胞2次，然后直接通过流式细胞仪（FACS CaLibar）检测角质形成细胞表面CXCR2的表达。
疗效判断标准：判定标准根据中西医结合学会皮肤性病学会白癜风临床分型及疗效标准进行。①痊愈：为白斑完全消退，恢复正常肤色；②显效：白斑部分消退或缩小，复色面积≥50%皮损面积；③有效：复色面积10%～49%皮损面积；④无效：白斑无色素再生或范围扩大（复色面积
统计学处理：计量资料以（x±s）表示，均数差异显著性检验采用t检验。应用Spearman等级相关分析方法分析变量间的相关关系。全部过程均通过SPSS12.11统计分析软件进行。P
结 果
外用卡泊三醇对白癜风皮损局部角质形成细胞分泌IL-8水平的影响：白癜风患者皮损局部角质形成细胞上清液中IL-8水平（0.66±0.34）ng/ml，外用卡泊三醇3个月和6个月后相同部位取材，角质形成细胞上清液中IL-8水平分别为（0.54±0.16）ng/ml、（0.48±0.27）ng/ml，明显下降，差异均有统计学意义（P
外用卡泊三醇对白癜风皮损局部角质形成细胞表面表达CXCR2水平的影响：外用卡泊三醇后，白癜风皮损局部角质形成细胞表面CXCR2的表达明显降低（见图2）。
外用卡泊三醇后的临床疗效：外用卡泊三醇软膏3个月后痊愈无，显效2例，有效3例，总有效率15.62%；6个月后痊愈3例，显效4例，有效10例，总有效率53.12%。
外用卡泊三醇后临床疗效与IL-8、CXCR2表达水平间的关系，见表1。
相关关系：用线性相关分析方法对32例白癜风患者外用卡泊三醇3个月及6个月后临床疗效与IL-8、CXCR2表达水平的相关关系进行分析，结果表明用药后有效率与IL-8及CXCR2表达水平间存在着负相关关系（分别为r=-0.387，P=0.034；r=-0.371，P=0.017）。
讨 论
IL-8是体内重要的白细胞趋化因子，主要由单核/巨噬细胞产生，它对T淋巴细胞、中性粒细胞有强烈的趋化和激活作用。血管内的IL-8发挥促进中性粒细胞、淋巴细胞附壁游出的作用，血管外的IL-8通过细胞表面特异性位点发挥趋化中性粒细胞、淋巴细胞在病变局部聚集的作用。白癜风的组织病理也表明白癜风皮损周围存在中性粒细胞和淋巴细胞浸润[3]。
有研究证实，进展期白癜风患者的血清中IL-8水平明显高于正常对照组及稳定期患者，并且泛发性白癜风IL-8水平高于局限性患者。提示白癜风患者体内趋化机制存在异常，IL-8可能参与白癜风免疫发病机制[4，5]。
LI等通过ELISA、PCR方法证明IL-8促进了抗黑素细胞IgG抗体的表达，而该抗体导致IL-8从培养的角质形成细胞中释放增加，因此，通过抗黑素细胞IgG抗体的刺激，从黑素细胞及角质形成细胞中释放的IL-8可能吸引T淋巴细胞积聚到白癜风皮损处，增强局部的炎性反应，促进黑素细胞的细胞毒反应[6]。
研究表明，卡泊三醇主要是通过与维生素D受体结合形成复合物而发挥其药理作用的。但目前有关其发挥药理作用的环节尚未见明确报道。本研究以IL-8及其受体CXCR2为突破口，初步探讨卡泊三醇对其在角质形成细胞表面表达的影响，结果表明外用卡泊三醇后，白癜风患者角质形成细胞IL-8及其受体CXCR2的分泌明显降低。提示卡泊三醇能有效抑制白癜风患者角质形成细胞中IL-8及其受体CXCR2的分泌，这可能是卡泊三醇治疗白癜风的作用机制之一，从而为卡泊三醇治疗白癜风的作用机制提供理论与试验依据。
参考文献
1 Halder RM，Chappell JL.Vitiligo update.Semin Cutan Med Surg，2009，28（2）：86-92.
2 O'Neill JL，Feldman SR.Vitamine D analogue-based therapies for psoriasis.Drugs Today，2010，46（5）：351-360.
3 唐晓琴，闫明，张兰兰.白癜风患者血清中相关细胞因子的研究进展[J].中国医药导报，2009，6（7）：9-11.
4 杨静，盛晚香.细胞间黏附分子1和白介素8与白癜风的相关性研究[J].中华皮肤科杂志，2003，36（11）：661.
5 汪京峡，段爱霞，张大军.白癜风患者血清中白介素及肿瘤坏死因子水平变化的研究[J].皮肤病与性病，2006，28（1）：4-5.
6 Li YL，Yu CL，Yu HS.IgG anti-melanocyte antibodies purified from patients with active vitiligo induce HLA-DR and intercellular adhesion molecule-1 expression and an increase in interleukin-8 release by melanocytes.J Invest Dermatol，2000，115（6）：969-973.