河北不同产地知母药材中芒果苷及菝葜皂苷元的含量测定

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摘 要：目的：考察河北不同产地知母药材中芒果苷及菝葜皂苷元的含量。 方法：分别采用HPLC法和HPLC－ELSD法测定芒果苷和菝葜皂苷元的含量。测定芒果苷以水∶乙腈∶0.85%磷酸（100∶25∶5）为流动相；流速为0.6mL/min；柱温30℃；检测波长为258nm。测定菝葜皂苷元以甲醇∶水（95∶5）为流动相；流速为1.0mL/min；柱温30℃；用蒸发光散色检测器检测，漂移管温度85℃。 结果：河北不同产地知母药材中菝葜皂苷元含量为1.51%～1.73%，芒果苷含量为0.11%～0.73%。 结论：本法测定知母药材中菝葜皂苷元及芒果苷含量，方法简单、快速、准确、重现性好，方法学考察符合含量测定的要求，可以用来控制知母药材质量。

关键词：知母；芒果苷；菝葜皂苷元；高效液相

中图分类号：R284.2

文献标识码：A文章编号：

1673-7717（2008）11-2368-03

Dertermination Content of Mangiferin and Sarsasapogenine in Rhizoma Anemarrhenae from Different Areas

HOU Xiuqing1，MAO Chunqin2，LU Tulin2，SONG Shen2

（1.China Pharmaceuticul University，Nanjing210009,Jiangsu,China；

2.Nanjing University of Chinese Medicine,Nanjing,210046,Jiangsu,China）

Abstract：Objective:To establish the determination of mangiferin and sarsasapogenine in Rhizoma Anemarrhenae from different areas.Methods:Determination of mangiferin and sarsasapogenine in Rhizoma Anemarrhenae were by HPLC and HPLC－ELSD. The mobile phase were water-acetonitrile-0.85%phosphoric acid（100∶25∶5）and methanol-water（95∶5）,with the flow rate were 0.6mL/min and 1.0mL/min, at 30℃.The detection wavelength of mangiferin was at 258nm. An evaporative light- scattering detector ( ELSD) was used as detector to determine sarsasapogenine with the drift tube temperature of 85℃. Result:The content of mangiferin and sarsasapogenine in Rhizoma Anemarrhenae from different areas were 0.11%～0.73% and 1.51%～1.73%. Conclusion:The method can be used for the equality control of Rhizoma Anemarrhenae from different areas,the result have provide a scientific basis for processing Rhizoma Anemarrhenae.

Key words：Rhizoma Anemarrhenae; mangiferin; sarsasapogenine；HPLC

知母是百合科（liliaceae）植物知母(Anema rrhena asphodeloidesBge)的干燥根茎，具有清热泻火、生津润燥的功效，用于外感热病、高热烦渴、肺热燥咳、骨蒸潮热、内热消渴、肠燥便秘[1]。知母有效成分为多种甾体皂苷。其皂苷元主要为菝葜皂苷元(sarsasapogenin)。因菝葜皂苷元为甾体皂苷元，分子中没有共扼结构，无紫外特征吸收，对样品的检测造成了一定的难度[2]。为此，本实验采用高效液相-蒸发光散射检测器( ELSD)测定知母中菝葜皂苷元的含量。芒果苷是知母中清热作用的有效成分。同时具有免疫活性、抗菌活性、抗单纯疱疹病毒活性。有抗氧化、抗糖尿病、抗肿瘤作用。对血脂质有抑制效应。有护肝、抗肥胖效应。在骨吸收方面有重要的抑制效应等[3]。河北省是知母药材的主产地之一，本文以菝葜皂苷元及芒果苷含量为指标，比较了河北不同产地知母药材中的含量，为更好的控制知母药材质量提供了依据。

1仪器与试药

1.1 仪器

LC-10ATvp型高效液相色谱仪（日本岛津）；mettlerAG285型电子天平（瑞士梅特勒-托利多集团）；检测器PL-ELSD1000(英国polymer laboratories)；超声波清洗机2200型（淮阴汉邦科技）。

1.2 试药

对照品：菝葜皂苷元（110744-20040）、芒果苷（111607－200301）由中国药品生物制品检定所提供，供含量测定用。

药材：知母药材购自河北，经本校鉴定教研室鉴定为百合科植物知母(Anemarrhena asphodeloides Bge.)的干燥根茎。

试剂：甲醇、乙腈为色谱纯，水为重蒸水，其余试剂均为分析纯。

2方法和结果

2.1芒果苷含量测定[4]

2.1.1 色谱条件 用Kromacil柱（250mm×4.6mm， id）；水∶乙腈∶0.85%磷酸（100∶25∶5）为流动相；流速为0.6mL/min；柱温30℃；检测波长为258nm。

2.1.2 对照品溶液的制备 精密称取芒果苷对照品适量，加甲醇制成每1mL含0.354mg的溶液，作为对照品溶液。

2.1.3 供试品溶液的制备 取知母药材，打粉过50目筛，取知母粉0.1g，精密称定，置离心管中，加入50%乙醇15mL，超声30min，离心20min，用吸管吸取上清液置蒸发皿中，如此操作3次,挥干溶剂，用50%甲醇定容于25mL容量瓶中。过0.45μm微孔滤膜，取续滤液，即得。

2.1.4 线性关系的考察 分别精密吸取芒果苷对照品溶液0.25、0.5、0.75、1.0、1.25mL至5mL量瓶中，加甲醇定容至5mL，在上述色谱条件下重复进样两次，每次10μL，测定峰面积值，以峰面积平均值和浓度进行回归处理，结果芒果苷在17.7～88.5μg/mL范围内线性良好。回归方程Y=6764005.65X-69421.2，相关系数r=0.9999。

2.1.5 精密度实验 取同一对照品溶液进行实验，每次进样10μL，连续进样6次，测定芒果苷峰面积值，计算精密度，RSD为0.336%。

2.1.6 稳定性实验 取同一供试品溶液进行实验，每次进样10μL，在0、2、4、6、8、10h各进两针，测定芒果苷峰面积平均值, RSD为2.53%。结果表明样品在10h内稳定。

2.1.7 重复性实验 取同一批号样品5份进行实验，按2.1.3供试品项下操作，制得供试品溶液，5份样品各进两针，每次进样10μL，测定芒果苷峰面积平均值，计算求得平均含量为0.77%（g/g），RSD为2.65%。

2.1.8 加样回收率实验 取芒果苷含量为0.77%知母药材切片，打粉过50目筛，取知母粉0.05g，平行6份，精密称定，分别精密加入相当于样品中芒果苷含量的80%、100%和120%的芒果苷对照品溶液，按供试品溶液处理，进行含量测定，计算回收率，结果见表1。

2.1.9 不同产地药材中芒果苷的含量测定 照2.1.3供试品溶液制备项下操作制备样品，按上述测定方法测定芒果苷的含量，结果见表2。HPLC图谱见图1~2。

2.2 菝葜皂苷元含量测定[1]

2.2.1 色谱条件 用Kromacil柱（250×4.6mm，id）；甲醇:水（95:5）为流动相；流速为1.0mL/min；柱温30℃；用蒸发光散色检测器检测，漂移管温度85℃。

2.2.2 对照品溶液的制备 精密称取菝葜皂苷元对照品适量，加甲醇制成每1mL含1.96mg的溶液，作为对照品溶液。

2.2.3 供试品溶液的制备 取知母饮片，打粉过50目筛，取知母粉0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入乙醇25mL，称定重量，浸泡过夜，超声处理(功率200W，频率30kHz）40min，放冷，再称定重量，用乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10mL，蒸干，加水10mL，盐酸1mL，加热回流2h，取出，冷至室温，边振摇边滴加40％氢氧化钠溶液至溶液颜色由橙黄变为橙红，用三氯甲烷振摇提取2次，每次30mL，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至10mL量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，即得。

2.2.4 线性关系的考察 分别精密吸取菝葜皂苷元对照品溶液0.25、0.5、1.0、1.5、2.0mL加甲醇定容至5mL，在上述色谱条件下重复进样两次，每次10μL，测定峰面积值，以峰面积平均值对数和浓度的对数值进行回归处理，结果菝葜皂苷元在0.98～7.84μg内线性关系良好。回归方程：Y= 1.60492551X+2.52818，相关系数r=0.9995。

2.2.5 精密度实验 取同一对照品溶液进行实验，每次进样10μL，连续进样6次，测定菝葜皂苷元峰面积值，计算精密度，RSD为1.32%。

2.2.6 稳定性实验 取同一样品溶液进行实验，每次进样10μL，在0、2、4、6、8、10h各进两针，测定菝葜皂苷元峰面积平均值，RSD为2.92%。结果表明样品在10h内稳定。

2.2.7 重复性实验 同一批号样品5份进行实验，按2.2.3供试品项下操作，制得供试品溶液，5份样品各进两针，每次进样10μL，测定菝葜皂苷元峰面积平均值。计算求得平均含量为1.33%（g/g），RSD为2.95%。

2.2.8 加样回收率实验 取知母饮片，打粉过50目筛，取知母粉0.25g，平行6份，精密称定，置具塞锥形瓶中，再加入相当于样品中菝葜皂苷元含量的80%、100%和120%的菝葜皂苷元对照品溶液，按供试品溶液处理，进行含量测定，计算回收率，结果见表3。

2.2.9 不同产地药材中菝葜皂苷元的含量测定 照2.2.3供试品溶液制备项下操作制备样品，按上述测定方法测定菝葜皂苷元的含量，结果见表3。HPLC图谱见图3~4。

3讨论与小结

本实验采用HPLC法对知母药材中芒果苷含量进行测定，并考察了知母药材中芒果苷的最佳提取溶剂、提取方式。从实验结果来看，用50%乙醇超声提取的方式提取的比较完全且简便易行，且快速准确，重现性好。HPLC-ELSD法测知母药材中菝葜皂苷元含量采用的是药典法，并进行了方法学考察。

有文献报道以芒果苷为指标比较河北不同产地的知母药材含量，但未见以菝葜皂苷元和芒果苷双指标比较的报道。因此本研究以菝葜皂苷元和芒果苷双指标，可以比较全面的反映河北不同产地知母药材的质量。

从实验结果看，河北不同产地知母药材中芒果苷含量差异较大，而芒果苷为知母的主要活性成分之一，因此临床上应根据不同治疗目的选择合适产地的药材。

参考文献

[1] 中华人民共和国药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[S].北京：化学工业出版社，2005：148.

[2] 郑民实，陆仲毅.芒果苷与异芒果苷的抗单纯疱疹病毒作用[J].中国药理学报，1989，10（1）：85.

[3] 李好文，邓家刚，邓静.芒果苷国外研究进展[J].广西中医学院学报，2003，6(4):62.

[4] 黄海滨，李学坚，梁秋云. RP-HPLC法测定芒果叶中芒果苷的含量[J] .中国中药杂志，2003，28（9）：841.