HPLC法测定盐酸法舒地尔注射液中盐酸法舒地尔的含量

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【中图分类号】R97 【文献标识码】A 【文章编号】1672-3783（2013）03-0271-02

盐酸法舒地尔注射液国家食品药品监督管理局国家药品标准中含量测定所用的方法为紫外-可见分光光度法，高效液相色谱方法与紫外-可见分光光度法相比，能使主药与辅料能有效分离，避免辅料对含量测定的干扰，使检测结果更准确，所以将含量方法改为高效液相色谱法。

1 仪器与试药：岛津 SPD-10A VP紫外检测器；岛津SPD-M10A VP二极管阵列检测器；岛津 LC-15C 溶剂泵 ；岛津LC-10AT VP 溶剂泵；岛津 Lcsolution 15C色谱工作站；岛津 Lcsolution色谱工作站。盐酸法舒地尔对照品（中国药品生物制品检定所，批号：100614-200401），盐酸法舒地尔注射液（天津红日药业，规格为2ml：30mg）；甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

2 方法

2.1 色谱条件：色谱柱：Phenomenex C18 （250×4.60mm，Gemini 5μ C18 110 ）；柱温：25℃；流速：1.0ml/min；检测波长：275nm；运行时间：12min；进样体积：20μl；流动相：1.0%三乙胺水溶液（用磷酸调pH值至7.0）：甲醇（55：45）；系统适用性要求：理论板数按盐酸法舒地尔峰计算应不低于6600。

2.2 对照品溶液的配置：取盐酸法舒地尔对照品约30mg，精密称定，至100ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀。

2.3 供试品的配置：精密量取各批市售品2ml至100ml量瓶，加流动相稀释至刻度，摇匀。

2.4 测定法：精密量取对照品溶液及供试品溶液20μl注入液相色谱仪，记录色谱图。按外标法以峰面积计算，即得。

3 方法学研究

3.1 波长的选择

为了准确的测定盐酸法舒地尔的含量，参考国家药品标准“盐酸法舒地尔”有关物质项下的检测波长，并取本品及各步反应中间体进行UV光谱分析，结果可知除了高哌嗪对紫外无吸收外，在275nm波长处，5-异喹啉磺酸、中间体及盐酸法舒地尔均有最大吸收。

具体操作：分别称取高哌嗪、5-异喹啉磺酸、5-异喹啉磺酰氯盐酸盐及盐酸法舒地尔自制品30mg，精密称定，分别置于4个100ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为各储备液；再精密量取各储备液1ml置于4个不同的10ml量瓶中，均用水稀释至刻度，摇匀，作为各供试品溶液；以配置供试品溶液的同批溶剂作为空白对照溶液，进行全波长扫描测定吸光度。

3.2 方法的选择

为使本品主峰理论塔板数不低于6600，各杂质与主峰的分离度不小于1.5，取本品的氧化样品破坏溶液进行方法的选择试验，用二极管阵列检测器进行检测，结果显示在流动相为1.0%三乙胺水溶液（用磷酸调pH值至7.0）：甲醇=55：45时峰形良好，杂质与主峰均能较好分离且分离度不小于1.5。

具体操作：精密量取本品2ml，置50ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为储备液。精密量取储备液5ml至10ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，作为未破坏样品溶液；再精密量取5ml储备液至10ml量瓶中，加入2ml10%双氧水，室温放置10h后，用流动相稀释至刻度，作为氧化样品破坏溶液；精密量取5ml双倍浓度辅料溶液至10ml量瓶中，加入2ml10%双氧水，室温放置10h后，用流动相稀释至刻度，作为氧化空白破坏溶液。分别精密量取溶剂、未破坏样品溶液、氧化空白破坏溶液及氧化样品破坏溶液各20μl注入高效液相色谱仪。

3.3色谱柱的选择

为了准确测定盐酸法舒地尔的含量，且达到主峰理论塔板数不低于6600的要求，将本品配置成浓度约为0.3mg/ml的溶液，进行柱子的筛选，本实验共用3根不同厂家的C18色谱柱做筛选（Phenomenex Gemini C18、Agilent HC C18、Venusil MP C18），结果表明Phenomenex Gemini C18能较好测定本品含量。

3.4 专属性试验

以研究本品中杂质是否影响主成分的检测，分别以空白溶剂、辅料溶液和供试品溶液进行试验，结果显示空白溶剂和辅料溶液不干扰本品含量的研究，表明本方法专属性良好。

具体操作：精密量取本品2ml至100ml的量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；精密量取辅料溶液2ml至100ml的量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为辅料；精密量取20μl流动相、辅料溶液及供试品溶液注入高效液相色谱仪中，记录色谱图。

3.5 耐用性

为研究本品对不同柱温、流速、流动相pH值及检测波长的耐用性，进行耐用性试验，结果表明本品在柱温变化±5℃、流速变化±20%、流动相pH值变化±0.2、检测波长变化±5时主峰的理论塔板数、主峰与杂质之间的分离度都符合要求，表明本方法耐用性良好。

具体操作：精密量取本品2ml置于100ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。在柱温变化±5℃、流速变化±20%、流动相pH值变化±0.2、检测波长变化±5条件下分别精密量取20μl供试品溶液注入高效液相色谱仪，记录色谱图。

3.6 线性

为考察本品在一定范围内是否呈线性，以含量项下对照品溶液浓度的60%～120%范围内做线性试验，结果显示本品在以对照品溶液浓度的60%～120%范围内呈线性，回归方程为：y=16053363.85x-3477.8，相关系数为0.9999。

3.7 重复性

为考察在相同条件下，由同一个分析人员测定多的结果的精密度，进行重复性试验，结果显示该试验的RSD%为0.60%，小于2.0%，显示重复性良好。

3.8 中间精密度

为考察随即变动因素对精密度的影响，现设计变动因素为不同日期、不同分析人员以及不同设备条件下进行试验，结果显示本法中间精密度RSD%为0.23%，表明本法中间精密度良好。

3.9 回收率

为考察该方法测定的结果与真实值接近的程度，以含量项下对照品溶液浓度的80%～120%范围内计算回收率，结果显示平均回收率在100.09%～100.34%之间，RSD%在0.14%～0.32%之间，符合平均回收率在98%～102%，RSD%小于2.0%的要求，证实本法的准确度可靠。

具体操作：对照品溶液的配置：取对照品约为30mg，精密称定，置于100ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。（1）80%溶液的配置：取对照品约为24mg，辅料约为16mg，精密称定，置于100ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。（2）100%溶液的配置：取对照品约为30mg，辅料约为16mg，精密称定，置于100ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。（3）120%溶液的配置：取对照品约为36mg，辅料约为16mg，精密称定，置于100ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。分别精密量取上述溶液各20μl注入高效液相色谱仪，计算出回收率。

4 含量测定

对市售品进行含量测定，具体操作：

供试品溶液的配置：精密量取本品及上市品各2ml置于100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。

对照品溶液的配置：取对照品约为30mg，精密称定，置于100ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

分别精密量取上述溶液各20μl注入高效液相色谱仪，以外标法按峰面积计算含量。