分散液液微萃取—反萃取—接受相固化—高效液相色谱法测定减肥茶中的西布曲明

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摘 要：建立了分散液液微萃取-反萃取-接受相固化与高效液相色谱联用测定减肥茶中西布曲明的方法。优化的条件为：400 L石油醚为L甲醇为分散剂、14 萃取剂、120 L 0.2 mol/L HCl溶液和1 L甲醇的混合溶液为接受相，萃取2 min。在优化条件下西布曲明的富集因子可达130倍。方法的线性范围为0.6～200 /L，检测出限为0.2 /L，定量限为0.6 /L。样品加标回收率介于91.9%～108.4%，日间相对标准偏差小于14%。

关键词：分散液液微萃取-反萃取-接受相固化；高效液相色谱；西布曲明

1 引 言

西布曲明是一种中枢神经抑制剂，可抑制去甲肾上腺素、5-羟色胺和多巴胺的再摄取，长期服用可引起血压升高，心率加快、厌食、肝功能异常等，重者可危及生命[1]。由于西布曲明价格低廉，屡被一些不法商家违禁加入减肥食品中，因此，建立复杂基质中西布曲明的快速分离分析方法具有重要意义。

已有文献报道了液液萃取（LLE）或固相萃取（SPE）与仪器联用[2～7]检测血浆和保健品中的西布曲明，然而，LLE和SPE需要较大量有机溶剂、操作繁琐耗时[8]。分散液液微萃取-上浮溶剂固化法（DLLME-SFO）是Zanjani等[9]于2007年提出来的一种新萃取技术，具有萃取时间短、有机萃取剂用量少和富集因子高等优点 [10～17]。但由于所用萃取剂为熔点接近室温的有机溶剂，沸点较高，在气相色谱分析中保留时间较长，溶剂峰会对保留时间相近组分造成干扰[10]，且由于是将有机相直接进样，使用HPLC进行分析时，可选的有机相很有限，多是十一醇或十二醇[11～17]，这在一定程度上限制了该方法与HPLC分析的兼容性。

在DLLME-SFO的基础上，本研究提出了一种基于接受相固化的分散液液微萃取-反萃取-接受相固化 （DLLME-BE-SAP） 新技术，通过将分散液液微萃取反萃取后的接受相水溶液固化，分离后将接受相冰粒室温溶解后直接进样HPLC分析，有效避免了有机萃取溶剂进样对色谱柱的污染、扩大了有机萃取溶剂的选择范围，提升了萃取方法与HPLC的兼容性。由于萃取和反萃取均采用了分散液液微萃取技术，与常规的三相液相微萃取相比，萃取时间明显缩短，简化了分离操作。目前，涉及接受相固化的微萃取技术尚未见报道。

2 实验部分

2.1 仪器与试剂

1100液相色谱仪（美国Agilent公司），由G1312A液相泵、G1316A柱温箱、G1315二极管阵列检测器和7725手动进样阀组成。超纯水由Millipore公司的Milli-Q纯水系统（Bedford，MA，美国）制得。

盐酸西布曲明（中国药品生物制品检定所），甲醇和乙腈（色谱纯），其它试剂为国产分析纯试剂。两种市售减肥茶（Dietic tea）a和b。

储备液的配制：准确称取10 mg盐酸西布曲明，用甲醇溶解并定容至10 mL，配制成1 g/L的西布曲明储备液。标准溶液由一定体积的储备液稀释制得。

样品溶液的制备：减肥茶磨成粉末，称取减肥茶A1.25 g、减肥茶B 1.0 g各一份，分别置于2个100 mL小烧杯中，用2 mL沸水浸泡10 min，均定容至100 mL，溶液经减压抽滤，上清液即为样品溶液。加标样品除在样品中加入实量西布曲明外，其它步骤同上。

2.2 色谱条件

3.1.3 萃取时间 考察了萃取时间分别为30，60，90，120和150 s时对西布曲明富集因子的影响，对应的富集因子分别为84.1，102，114.4，129.0和99.1，可见，萃取120 s时，能获得较高的富集因子。

3.1.4 接受相组成 西布曲明是叔胺化合物，实验选择酸性水溶液作为接受相，通过使西布曲明质子化实现反萃取。分别考察了0.1和0.2 mol/L 的CH3COOH，HCl，HNO3，H2SO4和H3PO4溶液作为接受相时对西布曲明富集因子的影响.结果表明，采用0.2 mol/L HCl作为接受相时，西布曲明可以获得最大的富集因子。为了缩短反萃时间，实验还考察了接受相加入分散剂甲醇对西布曲明富集因子的影响，考察的甲醇与HCl溶液体积比分别为1∶14，2∶13，3∶12，4∶11和5∶10，当甲醇与HCl体积比为1∶14时，西布曲明有最大的富集因子，且接受相凝固速度快。当甲醇与HCl的体积比大于3∶12时，接受相几乎不能凝固，这可能是由于甲醇的熔点太低（ 98 ℃）所致。反萃振摇30 s，反萃效率（接受相中西布曲明的物质的量与原料液和萃取后料液中西布曲明的物质的量差值的比值）大于97%。本实验选择14

采用本方法对市售减肥茶a和b进行分析。以减肥茶a为例，相关色谱图如图2c和2d。图2c说明，减肥茶a中未检出西布曲明，图2d显示加标样品中的西布曲明能够顺利被检出。同样，减肥茶b中也未检出西布曲明。对减肥茶样品进行高、中、低浓度的标准加入回收分析，西布曲明萃取后获得的加标回收率介于91.9%～108.4%，相对标准偏差介于5.1%～14%，说明本方法具有较好的精密度和准确度，可用于减肥茶中西布曲明的分析。

3.3 与其它方法的比较

将本方法与文献方法进行比较（表1）可知，本方法借助简便的DLLME-BE-SAP对西布曲明进行分离富集，有机萃取溶剂消耗少、萃取时间短，采用价格相对便宜的HPLC-UV进行检测，灵敏度高于一般的HPLC-UV和CE，甚至高于或接近部分HPLC-MS方法。

4 结 论

本研究建立了一种操作简便、萃取时间短、与HPLC兼容性好的DLLME-BE-SAP样品分离富集方法，通过将分散液液微萃取反萃取后的接受相水溶液固化，分离后将接受相冰粒室温溶解后直接进样HPLC分析，对减肥茶中痕量违禁药物西布曲明进行了检测。