四君子汤总多糖的提取研究
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[摘要] 目的：研究四君子汤总多糖提取的最佳工艺条件。方法：采用蒽酮-硫酸法测定总多糖的含量，以提取温度、提取时间、提取次数、溶剂用量为4个因素，分别设计3个水平进行正交实验。结果：最佳工艺为15倍量水，95℃提取3 h，共提取4次。结论：提取条件对四君子多糖的得率具有影响。
[关键词] 四君子汤；多糖；正交实验
[中图分类号]R284.2 [文献标识码] B[文章编号] 1673-7210（2009）05（b）-067-02
Study on the extraction technology of polysaccharide of Sijunzi Decoction
LIU Yuhong
(School of Pharmaceutical Science, Shandong University of Traditional Chinese Medicine, Jin'an 250355, China)
[Abstract] Objective: To optimize the conditions of extraction for polysaccharide of Sijunzi Decoction. Methods: Total carbohydrate content was determined by anthrone-sulfuric acid method, the extraction temperature, extraction time, extraction times and solvent volume were designed by an orthogonal test method. Results: It was optimal conditions that Sijunzi Decoction was extracted with hot water(W/V of 1∶15) at 95℃ every 3 hours for 3 times. Conclusion: The yield of polysaccharide is influenced by extraction conditions.
[Key words] Sijunzi Decoction; Polysaccharide; Orthogonal test
四君子汤出自宋代《太平惠民和剂局方》，由人参、白术、茯苓、炙甘草组成，具有益气健脾之功效，主治脾胃气虚证。研究报道四君子多糖具有显著的免疫调节作用，可用于肿瘤等的辅助治疗[1-3]。因此，本文采用正交实验设计对四君子多糖的提取工艺进行了研究。
1 仪器与试药
1.1 仪器
WFZ-UV-2102 PC型紫外-可见分光光度计（尤尼柯中国上海仪器有限公司），RE-52C旋转蒸发器（河南巩义市英峪予华仪器厂），LXJ-II离心沉淀机（上海医用分析仪器厂）， ZKXF-1型电热真空干燥箱（上海树立仪器仪表有限公司）。
1.2 试药
人参(批号为20061123)、白术(批号为20060809)、茯苓(批号为20060524)、甘草(批号为20061016)，均购自济南建联中药有限公司。葡聚糖4万（中国医药集团上海化学试剂公司，批号为F20021219）、蒽酮（上海五联化工厂，批号为20051102）、硫酸(北京益利精细化学品有限公司，批号为20061216)、无水乙醇（济南华联试剂公司，批号为20060325），均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 正交实验设计
为确定最佳提取条件，笔者以提取温度(A)、提取时间(B)、提取次数(C)、溶剂用量(D)为4个因素，分别设计3个水平进行正交实验L9(43)，依法提取后，用蒽酮-硫酸法测定多糖的含量，考察多糖的收率。因素水平表见表1。
2.2 四君子汤总多糖的提取
精密称取四君子汤34 g（人参10 g、白术9 g、茯苓9 g、甘草6 g），共9份，按照L9(43)正交设计表的实验条件进行提取。纱布过滤，滤液合并，50℃减压浓缩至30 ml，离心，弃去残渣，上清液加4倍量无水乙醇，沉淀过夜，离心，收集沉淀，依次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤，将沉淀置于有五氧化二磷的真空干燥箱中，50℃真空干燥24 h，得四君子汤多糖样品。
2.3 多糖的含量测定方法
2.3.1 测定方法采用蒽酮-硫酸法[4]进行测定。
2.3.2 溶液的制备葡聚糖标准品溶液的制备：精密称取干燥至恒重的葡聚糖25 mg，加适量蒸馏水溶解，转移至250 ml容量瓶中，加水至刻度，即得0.1 g/L的葡聚糖标准溶液。
蒽酮试剂：0.2 g蒽酮溶解于100 ml浓硫酸中，当日配制使用。
2.3.3 标准曲线制备移液管分别量取0.1 g/L葡聚糖标准溶液2、4、6、8、10 ml于10 ml容量瓶，蒸馏水补至刻度，各取1 ml于试管中并按顺序编号1、2、3、4、5，后分别加入4.00 ml蒽酮试剂，迅速浸于冰水浴中冷却，各管加完后充分振摇均匀，并一同浸入沸水浴中，管口加盖开始反应。自水浴沸腾时起，准确煮沸10 min，自来水冷却，室温放置约10 min，振摇均匀，以蒸馏水为空白，测定吸光度A（620 nm）。以吸收度A为纵坐标，糖浓度C为横坐标，得回归方程：A=5.896 5C+0.047 8，r=0.999 8。
2.4 四君子汤总多糖的含量测定
精密称取四君子多糖样品适量，定容于250 ml容量瓶中，取1 ml依上法测定，结果见表2。由实验结果确定四君子多糖的最佳提取条件为A3B1C3D3，即15倍量水，95℃提取3 h，共提取4次。进行验证性实验，多糖得率为4.97%。
3 讨论
多糖是生物体中普遍存在的一类生物大分子，越来越多的研究表明，多糖具有广泛的生物活性，如促进机体免疫功能、抗肿瘤、抗衰老、抗病毒、抗凝血、降血糖、降血脂等，因而受到了人们越来越多的重视。
实验表明，四君子汤中多糖含量较高，应为其“扶正”的物质基础成分。本实验优选了四君子汤总多糖的最佳提取条件：15倍量水，95℃提取3 h，共提取4次；此条件下多糖的得率最高，为四君子汤多糖的开发利用提供依据、打下基础。
[参考文献]
[1]周华,刘良,王培训,等.四君子汤复方总多糖口服和注射给药对免疫功能影响的对比研究[J].中药新药与临床药理,2001,12(5):206-209.
[2]宁康健,何玉意,吕锦芳.四君子汤对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响[J].中兽医医药杂志,2005,(5):30-32.
[3]刘良,周华,王培训,等.四君子汤复方总多糖对小鼠肠道粘膜相关淋巴组织的影响[J].中国免疫学杂志,2000,17(4):204-206.
[4]张惟杰.糖复合物生化研究技术[M].2版.杭州:浙江大学出版社,1999:12.
（收稿日期：2008-12-29）