正交试验优选黄芩总黄酮的提取工艺

开篇：润墨网以专业的文秘视角，为您筛选了一篇正交试验优选黄芩总黄酮的提取工艺范文，如需获取更多写作素材，在线客服老师一对一协助。欢迎您的阅读与分享！

[摘要]目的研究黄芩总黄酮的提取工艺。方法采用L9（34）正交试验设计法，以总黄酮和黄芩苷为考察指标，对黄芩总黄酮的提取工艺进行优选。结果优选提取工艺为：50%乙醇，回流提取3次，每次1.0 h，溶剂用量8倍。结论优选的黄芩提取工艺简便，稳定，可行。

关键词：正交试验提取工艺黄芩总黄酮黄芩苷

[ABSTRACT]OBJECTIVE: To investigate the extraction process of total flavonoids from Scutellaria baicalensis. METHODS: The extraction process of total flavonoids from Scutellaria baicalensis was optimized by L9(34) orthogonal experiment with the contents of total flavonoids and baicalin as the index. RESULTS: The optimal extraction process was: adding 8 times of 50% alcohol, refluxing and extracting for 3 times, 1 h per time. CONCLUSION: The optimal extraction process of Scutellaria baicalensis is simple, stable and practical.

KEY WORDS：Orthogonal experimentExtraction processTotal flavonoids Baicalin

中图分类号：R284 文献标识码：B 文章编号：1004-7484（2011）11-0084-03

黄芩为唇形科黄芩属黄芩Scutellaria baicalensis Georgi的干燥根。其性寒味苦，具有清热燥湿，泻火解毒，止血，安胎的功效[1]。黄芩的有效成分是黄酮类化合物，主要有黄芩苷(Baicalin)、黄芩苷元(Baicalein)、汉黄芩素(Wogonin)、汉黄芩苷(Wogonoside)、黄芩新素Ⅰ、Ⅱ(SkullcapflavoneⅠ、Ⅱ)等。许多文献以提取黄芩苷为目的，对其他黄酮苷和黄酮苷元类化合物未引起重视[2～6]。为了更好地利用黄芩，提高黄芩总黄酮的收率，作者以总黄酮和黄芩苷为考察指标，采用了正交设计法进行了提取工艺的研究。

1材料

1.1 仪器

98-1-B型电热套 (天津市泰斯特仪器有限公司)；S-FCJ-03型电热鼓风干燥箱(江苏海门县实验仪器厂)；粉碎机(北京环亚天元公司)；旋转蒸发仪(瑞士Buchi公司)；SHZ-D型循环水真空泵(河南郑州长城科工贸有限公司)；HH.S11-2型电热恒温水浴锅 (北京长安科学仪器厂)；UV-2550紫外分光光度计(日本岛津公司)；Agilent 1100 Serious高效液相色谱仪(美国安捷伦公司)；Sartorius BS 110 电子天平(德国赛多利斯公司)。

1.2 试药

黄芩饮片购自河北以岭饮片有限公司(产地：河北，批号：570201)，经本公司资源考察部田清存高级工程师鉴定，与中国药典2010版一部正品相符。黄芩苷对照品(中国药品生物制品鉴定所，批号：110715-200212)；95%乙醇(药用规格)；水为超纯水，其他试剂均为分析纯。

2方法与结果

2.1 黄芩总黄酮的含量测定

2.1.1 黄芩苷对照品溶液的配制：精密称取黄芩苷对照品11.34 mg，置于25 mL容量瓶中，加70%乙醇至刻度，摇均，即得，供紫外测定用。

2.1.2 黄芩总黄酮供试品溶液的配制：精密吸取提取液1 mL置25 mL容量瓶中，加70%乙醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

2.1.3 线性关系考察：精密吸取浓度为0.1134 mg•ml-1的黄芩苷对照品溶液0.3、0.5、0.8、1.0、1.2 ml，分别置于10 ml容量瓶中，加70%乙醇稀释至刻度，摇均后置280nm波长下测定，以黄芩苷对照品浓度为横坐标 (C)，吸光度(Y)为纵坐标绘制标准曲线，并进行线性回归，得回归方程Y=0.0059C+0.002 (r=0.9988)。结果表明，黄芩苷在2.1～12 μg•ml-1浓度范围内与其吸光度线性关系良好。

2.1.4 稳定性考察：选取某一浓度的供试品溶液，按上述条件测定吸光度，间隔2 h测定1次，结果24 h内稳定，RSD=0.35 %。

2.1.5 重复性试验：取同一供试品溶液连续测定5次，结果，RSD=0.37 %，表明方法重复性良好。

2.1.6 精密度试验：选取某一浓度的对照品溶液，连续测7次，按上述条件测定吸光度。RSD=0.28%。

2.2 黄芩苷的含量测定[1]

依据文献[1]进行。方法学考察结果符合含量测定要求。

2.3 黄芩总黄酮最佳提取工艺的优选

2.3.1 正交试验设计：根据预试验的考察结果，同时结合文献资料，以提取次数(A)、提取时间(B)、溶剂用量(C)、容积浓度(D)为考察因素，以总黄酮和黄芩苷含量为指标，进行L9(34)正交试验。因素水平表见表1；正交试验结果见表2、表4；方差分析结果见表3、表5。

表1因素水平

水平 因素

提取次数 /次

（A） 提取时间 /h(B) 溶剂用量 /倍(C) 溶剂浓度 /%(D)

1 1 0.5 8 50

2 2 2.0 10 60

3 3 3.0 12 70

表2正交试验总黄酮含量结果分析

试验号 因素 总黄酮含量%

A B C D 第一次 第二次

1 1 1 1 1 12.58 12.90

2 1 2 2 2 18.56 17.89

3 1 3 3 3 18.92 19.17

4 2 1 2 3 11.85 13.40

5 2 2 3 1 18.00 18.82

6 2 3 1 2 18.29 18.22

7 3 1 3 2 13.97 14.34

8 3 2 1 3 14.54 15.42

9 3 3 2 1 18.73 19.25

K1 16.67 13.137 15.325 16.713

K2 16.43 17.205 16.613 16.878

K3 16.042 18.763 17.203 15.550

SS 1.206 99.862 11.072 6.29

SSE 2.438

dfe 9.00

表3正交试验总黄酮含量方差分析结果

方差

来源 SS df S2 F P 结论

A 1.206 2 0.603 0.02 ＞0.1 无差异

B 99.862 2 49.931 1.684 ＞0.1 无差异

C 11.072 2 5.536 0.187 ＞0.1 无差异

D 6.290 2 3.145 0.106 ＞0.1 无差异

e 2.438 9 0.271

注：F0.05(2，2)＝19.00；F0.01(2，2)＝99.00。

表4正交试验黄芩苷含量结果分析

试验号 因素 黄芩苷含量%

A B C D 第一次 第二次

1 1 1 1 1 7.07 7.22

2 1 2 2 2 10.35 11.87

3 1 3 3 3 11.61 12.82

4 2 1 2 3 7.64 8.27

5 2 2 3 1 10.82 11.54

6 2 3 1 2 11.13 10.53

7 3 1 3 2 9.55 8.28

8 3 2 1 3 8.85 9.48

9 3 3 2 1 11.95 11.79

K1 10.157 8.005 9.047 10.065

K2 9.988 10.485 10.312 10.285

K3 9.983 11.638 10.770 9.778

SS 0.117 41.363 9.56 0.775

SSE 3.554

dfe 9

表5正交试验黄芩苷含量方差分析

方差

来源 SS df S2 F P 结论

A 0.117 2 0.058 0.002 >0.1 无差异

B 41.363 2 20.682 0.697 >0.1 无差异

C 9.560 2 4.78 0.161 >0.1 无差异

D 0.775 2 0.387 0.013 >0.1 无差异

e 3.554 9 0.395

注：F0.05(2，2)＝19.00；F0.01(2，2)＝99.00。

结果显示，4个影响因素均没有显著差异。

2.3.2验证试验：根据正交试验结果，采用直观分析法，最佳工艺为：A3B3C2D1(即50%乙醇提取3次，每次1.5小时，溶剂用量10倍)，通过比较筛选出较优工艺为：50%乙醇提取3次，每次1.0小时，溶剂用量8倍。经过6批验证试验，结果表明优选提取工艺合理，稳定，可行。

3讨论

紫外分光光度法是测定总黄酮含量较为经典的有效方法之一，使用该方法测定总黄酮简便、快速、便于实际应用。作者在建立黄芩总黄酮测定方法时，研究了不显色直接测定法，5% AlCl3显色测定法和5% NaNO2+10% Al(NO3)3+10% NaOH显色测定法。结果为不显色直接测定法和5% AlCl3显色测定法所测结果一致，5% NaNO2+10% Al(NO3)3+10% NaOH显色测定法所测结果明显偏低。考虑到操作的简便性，遂采用了不显色直接测定法。

预实验中，曾试验了水提法[7、8]、水提酸沉法，分析提取液中总黄酮和黄芩苷的含量，同时结合水提法与醇提液的出膏率及后处理的难易程度，综合分析，认为醇法提优于水提和水提酸沉法，可使降解黄酮苷类化合物的酶失活[8,9]，而且总黄酮和黄芩苷含量很稳定，工艺稳定、可行，可操作性强。

参考文献

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典2010年版一部[M].北京:中国医药科技出版社, 282～283.

[2] 聂继红,王萍,孙蕾,等.黄芩中黄芩苷提取工艺的研究[J].中国药房,2005,16(14): 1051～1053.

[3] 杨秀芳,程芳玲.正交实验优选黄芩甙的半仿生提取工艺[J].陕西科技大学学报,2005,23(3):23～27.

[4] 王佩琪,王成明,卢静华.正交试验法优选超声提取黄芩苷的研究[J].中医药学刊,2004,22(11):2133～2134.

[5] 王小平,毛友昌,钟瑞建.黄芩苷醇提工艺优选[J].江西中医学院学报,2003,15(4):49～50.

[6] 王英范,张春红,张连学,等.黄芩苷提取方法的比较研究[J].特产研究,2005,4:21～23.

[7] 龙翠华,田其学,唐正平.黄芩水提工艺的研究[J].湖南中医杂志,2005,21(3):115～116.

[8] 李晓芳,傅军,金描真,等.黄芩水提取工艺中黄芩苷降解动力学研究[J].现代食品与药品杂志,2006,14(4):27～29.

[9] 马建红,聂继红,邢建国.黄芩提取工艺的优化.新疆中医药,2006,24(2):7～10.