开菲尔对小鼠血清胆固醇水平的影响
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摘要 开菲尔是一种饮用历史悠久的功能性发酵乳制品，为探讨开菲尔对小鼠血清胆固醇水平的影响，将小鼠随机分成3组：对照组、高脂模型组和开菲尔组。对照组饲喂基础饲料，高脂模型组和开菲尔组饲喂高脂饲料，开菲尔组每日灌胃开菲尔发酵乳，对照组和高脂模型组给予无菌蒸馏水，连续灌胃28 d。结果表明，开菲尔组与高脂模型组相比，小鼠血清总胆固醇（TC）和低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）含量明显降低（P0.05），动脉粥样硬化指数（AI）极显著降低（P
关键词 开菲尔；小鼠；胆固醇；益生特性
中图分类号 TS252.54 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2014）03-0268-02
心血管疾病的发生率已成为亚太地区人群疾病发生率之首，并且是引发患者死亡的第一病因[1]，也已成为我国人群的首要死因[2]。高胆固醇血症是引发冠心病的最重要危险因素，血清胆固醇浓度每降低1%相应地发生冠心病的危险性可减少2%～3%[3]。临床上应用的降胆固醇药物主要以他汀类为主，药效显著，但具有副作用。因此，开发降胆固醇的功能性食品对预防冠心病的发病率尤为重要。
开菲尔（Kefir）是一种酒精性发酵乳饮料，发祥地为高加索地区，其饮用已遍布全球许多国家和地区，其中以俄罗斯饮用最为普遍。直至现在俄罗斯的医院（或疗养院）仍在广泛使用Kefir用于饮食治疗，特别是针对一些慢性疾病，如肥胖症，对于过度肥胖症患者当地设有所谓“Kefir日”[4]。因此，本文将针对开菲尔发酵乳对小鼠血清脂质水平的影响进行探讨，通过构建高胆固醇血症模型小鼠，从小鼠血清总胆固醇（TC）、总甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）水平，以及动脉粥样硬化指数（AI）和抗动脉粥样硬化指数（AAI）的角度予以评价，旨在为开菲尔发酵乳的益生功能研究及产品的开发提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 试验材料
1.1.1 开菲尔粒的来源与制备。开菲尔发酵剂即开菲尔粒来自流传于黑龙江哈尔滨市的民间家庭，长期用于制作开菲尔发酵乳。开菲尔粒用无菌的生理盐水充分冲洗后，将其接种于10%脱脂乳培养基中，于25 ℃条件下培养2～3代直至活力恢复。将已活化的开菲尔粒接种于10%脱脂乳中，于25 ℃培养24 h，将开菲尔粒滤出，所得滤液即为新鲜制备的开菲尔，以备灌胃小鼠用。每天灌胃小鼠均采用新鲜制备的开菲尔。
1.1.2 试验动物。30只SPF级雄性昆明小鼠，体重（22±2） g。购自北京维通利华试验动物技术有限公司，许可证号为：SCXK（京）2012-0001。
1.1.3 培养基与试剂。10%脱脂乳：10 g脱脂乳粉溶解于100 mL蒸馏水中，于115 ℃湿热灭菌10 min。总甘油三酯检测试剂盒、总胆固醇检测试剂盒、高密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒、低密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒，均购于上海科华生物工程股份有限公司。
1.1.4 主要仪器设备。全自动生化仪TBA-40（东芝），离心机（上海安亭科学仪器厂），恒温培养箱（上海一恒科技有限公司），超净工作台（北京东联哈尔仪器制造有限公司）。
1.2 试验设计
SPF级雄性昆明小鼠适应性饲养7 d后，根据小鼠体重，将30只小鼠随机分成3组饲喂不同的饲料，分别为：对照组、高脂模型组和开菲尔组，每组10只。对照组饲喂基础饲料；高脂模型组饲喂高脂饲料；开菲尔组饲喂高脂饲料+开菲尔。高脂饲料配方为：基础饲料83.7%，胆固醇1%，猪胆盐0.3%，猪油10%，蛋黄粉5%。
1.3 试验方法
按试验设计对各组小鼠进行饲喂，每天上午对开菲尔组灌胃新鲜制备的开菲尔0.5 mL，对照组和高脂模型组则分别灌胃无菌蒸馏水0.5 mL。饲养温度20～25 ℃，湿度45%～50%，小鼠自由采食与饮水。连续灌胃28 d后，摘眼球取血（采血前禁食12 h，不禁水），3 000 r/min离心15 min分离血清至无菌EP管中，于-20 ℃保存备用。
1.4 测定指标及方法
按照试剂盒说明书要求测定小鼠血清中TC、TG、HDL-C、LDL-C含量，并计算动脉粥样硬化指数（AI）和抗动脉粥样硬化指数（AAI）。计算公式如下：
AI=TC-（HDL-C）/（HDL-C）
AAI=（HDL-C）/TC
1.5 数据处理
采用统计软件SPSS 17.0的ANOVA进程对试验组数据进行单因素方差分析，方差分析差异显著者则采用Duncan′s法进行多重比较。试验结果以“平均值±标准差（X±S）”表示。
2 结果与分析
2.1 高胆固醇血症模型小鼠的建立
饲喂高脂饲料28 d后，高脂模型组与对照组小鼠血清TG和TC含量见表1。由表1可知，高脂模型组与对照组相比，小鼠血清中TG含量无明显变化，差异不显著（P>0.05），血清TC含量升高，且差异极显著（P
2.2 开菲尔对小鼠血清血脂水平的影响
受试小鼠灌胃28 d后，分别对小鼠血清的TG、TC、HDL-C、LDL-C等4项指标进行测定，结果见表2。
由表2可知，小鼠灌胃28 d后，开菲尔组与高脂模型组相比，血清TG含量无明显变化（P>0.05）；血清TC含量降低，且差异显著（P0.05）；血清LDL-C含量降低，且差异显著（P
2.3 开菲尔对AI和AAI的影响
动脉粥样硬化指数AI值，是衡量心血管疾病易患程度的一个重要指标，该指数的增加意味着血液循环中的胆固醇量增加，从而导致心血管疾病的易患程度增加。而抗动脉粥样硬化指数AAI值反映的是HDL-C在TC中所占的比例，HDL-C能把身体各个部位的胆固醇运回肝脏进行处理，从而降低心血管疾病发生的危险，故其又被称作“好”的胆固醇，AAI值越高对健康越有利。根据TC、HDL-C、LDL-C含量分别计算各组AI和AAI值，结果见表3。
由表3可知，小鼠灌胃28 d后，开菲尔组与高脂模型组相比，AI值下降极显著（P
3 结论与讨论
全球许多国家和地区已把开菲尔作为一种食疗产品，如俄罗斯在当地普遍使用Kefir，特别用于胃肠病、糖尿病、高血压、肥胖症等一些慢性病患者的饮食治疗[4]，国内外专家学者已通过大量试验充分证实了这些功能特性[5-8]，此外，开菲尔还表现出了免疫调节作用、抗氧化、抗肿瘤、抗过敏等功效[9-12]。本文通过构建高胆固醇血症模型小鼠，评价了开菲尔发酵乳对小鼠血清胆固醇水平的影响，发现其能显著降低模型小鼠血清TC和LDL-C水平（P
开菲尔的诸多益生功能要归因于其特殊的发酵剂――开菲尔粒，开菲尔粒是由多种微生物经长期作用后形成的微生物共生体，菌相极其复杂，主要包括乳酸菌、酵母菌及少量醋酸菌等，尤其是乳酸菌占最大比例，乳酸菌的益生特性[13-15]对开菲尔的功能性起重要作用。国内外的学者们已从开菲尔粒中分离到许多种属的乳酸菌[16]，主要包括乳杆菌属、肠球菌属、乳球菌属等菌株，故开菲尔表现的益生功能可溯源到某株菌，本文中开菲尔所表现出的降胆固醇功能归于何种益生菌的作用，尚需进一步研究证实。此外，在一些研究报道[17]中，开菲尔发酵乳能显著降低TG含量，使HDL-C含量显著升高，本文并未得到类似的结果，这可能与不同来源的开菲尔粒的微生物组成不同有关。若要真正探明开菲尔的益生机制，不能局限于单个菌株，因其组成菌形成了共生体系，需要从共生体的角度整体剖析。随着人们对营养、健康的追求与认识，被冠以“乳中之香槟”的开菲尔，必将在我国乳制品市场占有一席之地。
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