宫颈癌组织中RRM1的表达及意义
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【摘要】 目的 探讨RRM1在宫颈癌组织中的表达水平与宫颈癌发生、发展的关系。方法 应用免疫组织化学方法检测rrm1 蛋白在80例宫颈癌组织、30例宫颈上皮内瘤变和20例正常宫颈组织中的表达。结果 RRM1在正常宫颈组织、宫颈上皮内瘤变和宫颈癌组织中都有不同程度的表达，但宫颈癌组织中RRM1的表达（93.7%，75/80）明显高于宫颈内瘤变（46.7%，14/30）和正常宫颈组织（10.0%，2/20），且宫颈癌组织分化程度越低则RRM1的阳性率越高，表达强度越强（P0.05）;不同组织类型的宫颈癌RRM1的表达差异无统计学意义（P>0.05）；RRM1的阳性表达与有无淋巴结转移无关（P>0.05）。结论 RRM1在宫颈癌组织中的表达与宫颈癌组织分化的高低有关。RRM1在宫颈癌的发生发展中起重要作用，有望成为宫颈癌新的早期诊断指标。
【关键词】宫颈癌；宫颈上皮内瘤变；RRM1；免疫组织化学
Expression and significance of RRM1 in uterine cervical cancer tissue
LIU Ai hua, WANG Li ming.
Department of Gynaecology and Obstetrics, The Medical School Hospital of Qingdao University, Qingdao, Shandong 266003, China
【Abstract】 Objective To study the expression of RRM1 in uterine cervical cancer tissue and explore the relationship with the development of uterine cervical cancer. Methods The expression of RRM1 was detected by immunohistochemistry staining in 80 specimens of cervical cancer, 30 specimens of CIN and 20 specimens of normal cervical tissue. Results The expression of RRM1 was significantly higher in uterine cervical cancer tissue(93.7%, 75/80)than that in CIN(46.7%, 14/30)and normal cervical tissue(10.0%, 2/20)(P
【Key words】Uterine cervical cancer;Cervical intraepithelial neoplasis; RRM1;Immunohistochemistry
在女性的恶性肿瘤中，宫颈癌的发生率仅次于乳腺癌，为女性生殖道肿瘤的首位。RRM1基因属于新近发现的肿瘤抑制基因，在人类多种肿瘤及细胞系中存在杂合性丢失，这种杂合性缺失与恶性肿瘤的转移和预后有一定的相关性［1］。因此研究RRM1的表达水平与宫颈癌预后的关系、化疗耐药的相关性等有重要的临床意义。我们采用免疫组化技术，检测了80例不同病理类型、不同期别的原发性宫颈癌、30例宫颈上皮内瘤样病变和20例正常宫颈组织中RRM1蛋白的表达情况，探讨其与宫颈癌的关系及临床意义。
1 资料与方法
1.1 一般资料 收集我院妇产科2003~2009年门诊活检的新鲜标本或行初次手术切除且有完整临床资料的宫颈上皮内瘤样病变（CIN）标本30例和宫颈癌病理标本80例作为实验材料（全部经病理确诊，并由同一病理医师回顾检查），其中鳞癌64例，腺癌16例。两组110例患者的年龄为（48±6.4）岁。宫颈癌病理分级按WHO的分级标准，鳞癌64例中，G1期12例，G2期30例，G3期22例。腺癌16例中，G2期11例，G3期5例。临床分期根据国际妇产科联盟（FIGO）2000 年修订的标准，Ⅰ期35例，Ⅱ期33例，Ⅲ期12例。26例患者进行了盆腔淋巴结清扫术，有淋巴转移者17例。所有患者在标本采集前均未作放疗及化疗。选取同期因子宫肌瘤行宫颈切除手术患者的正常宫颈组织20例（正常组）作为对照，术后病理示宫颈组织无病变，患者年龄（43±3.8）岁。标本均经4%多聚甲醛固定，石蜡包埋，4 μM厚连续切片，HE染色观察细胞形态和组织学结构。
1.2 主要试剂 兔抗人RRM1多克隆抗体购于北京博奥森生物技术有限公司, SP免疫组化试剂盒、DAB显色试剂盒购于北京中杉金桥生物技术有限公司。
1.3 实验方法 采用免疫组织化学链霉素亲生物素蛋白 过氧化物酶（S P）法，按试剂盒说明书进行。用PBS代替一抗作为阴性对照，RRM1已知阳性切片作为阳性对照。以细胞中出现明显的棕黄色颗粒为阳性表达。RRM1阳性信号定位于细胞质中，偶或胞核，有报道认为胞核的表达提示预后不佳［2］。计分标准采用3个参数半定量积分方法，即染色强度、阳性细胞率和两者计分的积进行分析评定［3］：①染色强度按照无着色、浅黄色、棕黄色和棕褐色分别计0～3分；②着色细胞占计数细胞的百分率：每张切片随机选取10个高倍视野，各计数100个细胞，计算出阳性细胞百分比，阳性细胞率75%为4分；上述2项结果相乘的积作为其最后得分，0～1分为阴性（ ）, 2～3分为弱阳性（±）， 4～6分为中等阳性（+），>6分为强阳性（+ +）。
1.4 统计学方法 应用SPSS13.0分析软件包对数据进行处理。采用χ2检验及Fisher精确检验法进行分析。以P≤0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 RRM1蛋白在正常宫颈上皮、CIN和宫颈癌组织中的表达 RRM1蛋白在正常宫颈组织中阳性表达率为10.0%（2/20），且均为弱阳性表达；在CIN中阳性率为46.7%（14/30），其中弱阳性表达占33.3%（10/30），无强阳性表达；宫颈癌阳性率93.7% （75/80），强阳性占48.8%（39/80）。宫颈癌组与正常组和CIN组比较均有显著性差异（P
表1
RRM1蛋白在正常宫颈上皮、CIN及与宫颈癌组织中的表达
类别例数
RRM1的表达(%)
±+++
正常宫颈上皮2018（90.0）2（10.0）0（0.0）0（0.0）
CIN3016（53.3）10（33.3）4（13.3）0（0.0）
宫颈癌805（6.3）13（16.2）23（28.7）39（48.8）
图1
RRM1蛋白在正常宫颈上皮、CIN及与宫颈癌组织中的表达
2.2 RRM1蛋白表达与宫颈癌病理类型的关系RRM1蛋白在宫颈腺癌组织中表达的阳性率为87.5%（14/16），在宫颈鳞癌组织中的阳性率为95.3%（61/64），两组之间差异无统计学意义（P>0.05），说明RRM1蛋白的表达与宫颈癌病理类型无关。
2.3 RRM1蛋白表达与宫颈癌临床病理指标的关系 RRM1蛋白在宫颈癌组织中的表达与宫颈癌临床分期及有无淋巴结转无关，但与癌细胞分化程度显著相关。RRM1蛋白在高分化组的表达阳性率明显低于中、低分化组（P
3 讨论
近年来，随着分子生物学的发展，国内外对细胞癌变的研究已进入到分子水平，人们发现DNA修复和复制的缺陷是细胞发生癌变的重要机制［4］。由于核糖核苷酸还原酶（ribonucleotide reductase, RR）在癌组织表达异常增高，同时其催化产物脱氧核糖核苷酸（dNTP）是DNA损伤修复及复制过程中必不可少的原料，因此RR的功能完善与否对肿瘤的发生、发展和防治均有重要影响［5］。目前，RR相关的潜在抗癌价值已引起广泛关注，对RR调节机制的研究已成为防癌、抗癌研究领域的热点。RRM1是RR的一个亚单位，属于肿瘤抑制基因，定位于染色体11p15.5区域，含19个外显子。该区域是一个可出现于多种恶性肿瘤的杂合子丢失（loss of heterozygosity, LOH）区域，称为LOH11A。人们很早就发现在胃癌、食管癌和乳腺癌等存在11p15.5的杂合性丢失，因此认为该区域的丢失与恶性肿瘤的转移有关系［6］。另外，也有研究表明，这种杂合性缺失与预后有一定的相关性，具有LOH丢失的非小细胞肺癌（non small cell lung cancer，NSCLC）患者预后较差，生存期较没有LOH的患者短［7］；但是，也有临床研究的结果显示，高水平表达RRM1的患者其预后较差［8］；这样的结果与之前的RRM1作为抑癌基因高表达时抑制肿瘤侵袭的结论有所不同。通过对比出现不同结果的临床研究所选择的病例发现，早期的NSCLC患者单独接受手术治疗时，高表达RRM1则预后较好，而晚期仅接受含吉西他滨方案化疗的患者RRM1高表达却预后较差，说明RRM1的预测意义因患者的分期和治疗方案的不同有所改变。
本研究结果表明RRM1蛋白在正常宫颈上皮、CIN 组织中和宫颈癌中都有不同程度的表达，宫颈癌组织中RRM1的阳性表达明显高于正常宫颈组织及CIN组织，表明宫颈癌组织中存在基因损伤使DNA修复基因的表达增加，这与癌变模型假设相符，认为癌是由于进行性基因损伤在上皮细胞内积聚的结果。因此，本研究提示RRM1表达的增多与宫颈癌的发生有关。RRM1蛋白表达与宫颈癌病理分级密切相关，随着宫颈癌分化程度的降低，RRM1表达却增多，这表明RRM1表达的增多可能在宫颈恶性肿瘤的进展中起一定作用。
众多研究证实DNA修复基因的修复能力与癌症的发病和耐药有关。一般认为，DNA修复基因修复力低者癌症发生的风险较正常人明显增加，而修复力高者则易对化疗药物耐药使化疗失败［9］。RRM1是细胞内在DNA损伤修复能力的代表，因而也是显示病变组织内累积性DNA损伤程度的生物标志。RRM1高表达可相对消弱药物对RRM1的抑制作用，进而导致肿瘤细胞对药物的敏感性降低。本研究结果显示，RRM1表达水平与宫颈癌分化程度呈正相关，提示RRM1高表达的低分化宫颈癌患者可能易于对化疗药物耐药。
参 考 文 献
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［9］ Davidson JD, Ma L, Flagella M, et al.An increase in the expression of ribonucleotide reductase large subunit 1 is associated with gemcitabine resistance in non small cell lung cancer cell lines. Cancer Res, 2004, 64(11):3761 3766.
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