超声波法测定蔬菜中亚硝酸盐的含量

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摘 要：采用3种不同的提取方法即：热水提取、振荡提取、超声提取对蔬菜中的亚硝酸盐含量进行测定。采用分光光度法在波长538nm处，用超声提取法测得的结果优于热水提取法、振荡提取法。该方法操作简便、快捷、检测的数据回收率高，精确度高，符合平时用来检测蔬菜中的亚硝酸盐含量。

关键词：蔬菜；亚硝酸盐；提取；超声波

中图分类号：S-3 文献标识码：A DOI：10.11974/nyyjs.20160632003

“民以食为天，食以安为先”。随着人们生活水平的提高，食品安全越来越受到各级领导、有关部门和普通百姓的重视。农业投入品的不合理使用，如过度的使用氮肥，导致蔬菜中的硝酸盐含量偏高，转化为亚硝酸盐后，可能和蛋白质分解合成亚硝胺，从而引发疾病。亚硝酸盐普通存在于蔬菜、肉类、鱼类中，因此，如何合理地控制亚硝酸盐的摄入量显得尤为重要。

本文采用振荡提取法、超声波提取法、热水提取法3种不同的提取方法来测定蔬菜中的亚硝酸盐。通过改进样品前处理的方法，采用分光光度法测定各大园区（基地）蔬菜中的亚硝酸盐含量，从而提高了蔬菜中亚硝酸盐测定的准确度和精确度，为农产品质量安全监管提供了依据。

1 实验方法与材料

1.1 实验材料

1.1.1 样品

青菜来自于海门市高新区双高村基地。

1.1.2 主要试剂

所有试剂均为分析纯（亚铁氰化钾、乙酸锌、饱和硼砂、对氨基苯磺酸、盐酸萘乙二胺盐），所用水为超纯水，亚硝酸钠标准溶液浓度为100ug/mL（中国计量科学研究院）。

1.1.3 仪器、设备

UV754紫外分光光度计（上海精密科学仪器有限公司）、T200电子天平（常熟双杰测试仪器厂）、飞利浦料理机、KQ5200超声波清洗仪（昆山市超声仪器有限公司）、HH-8水浴锅、常用实验玻璃仪器。

1.2 实验方法

1.2.1 样品预处理

将青菜取可食部分，去离子水洗净，放在干燥处晾干备用。将预处理的蔬菜样按照四分法进行切碎，取适量于料理机中打碎成匀浆，装于样品瓶中，备用。

1.2.2 不同前处理过程的比较

1.2.2.1 热水提取法

准确称取10.00g青菜试样，置于50mL烧杯中，加入12.5mL饱和硼砂溶液，搅拌均匀，以70℃左右的水约300mL将试样洗入500mL容量瓶中，于沸水浴中加热15min ，取出冷却放置至室温。然后在提取液中加入5mL亚铁氰化钾溶液和5mL乙酸锌溶液，以沉淀蛋白质，加水至刻度，摇匀，放置30min后过滤，滤液备用。

1.2.2.2 振荡提取法

准确称取10.00g青菜试样，置于50mL烧杯中，加入12.5mL饱和硼砂溶液，搅拌均匀，以70℃左右的水约300mL将试样洗入500mL容量瓶中，置于振荡器上振荡30min。然后在提取液中加入5mL亚铁氰化钾溶液和5mL乙酸锌溶液，以沉淀蛋白质，加水至刻度，摇匀，放置10min后过滤，滤液备用。

1.2.2.3 超声提取法

准确称取10.00g青菜试样，置于50mL烧杯中，加入12.5mL饱和硼砂溶液，搅拌均匀，以70℃左右的水约300mL将试样洗入500mL容量瓶中，超声提取10min。然后在提取液中加入5mL亚铁氰化钾溶液和5mL乙酸锌溶液，以沉淀蛋白质，加水至刻度，摇匀，放置10min后过滤，滤液备用。

1.2.3 样液测定方法

准确吸取40.0mL上述滤液于50mL比色管中，加入2mL对氨基苯磺酸溶液，混匀，静止5min后加入1mL盐酸萘乙二胺溶液，加水至刻度，混匀，静止15min，用2cm比色杯，于波长538nm处测吸光度。

1.2.4 亚硝酸钠标准曲线

准确吸取5mg/L的亚硝酸钠标准使用液0mL、0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL、1.5mL、2.0mL于50m比色管中，即得到的亚硝酸钠浓度分别为0ug/mL 、0.02ug/mL、0.04ug/mL、0.06ug/mL、0.08ug/mL、0.1ug/mL、0.15ug/mL、0.20ug/mL，然后依次加入2mL对氨基苯磺酸溶液，混匀，静止5min后加入1mL盐酸萘乙二胺溶液，加水定容至刻度，混匀，静止15min，用2cm比色杯，于波长538nm处测吸光度。同时做试剂空白。

2 计算公式

2.1 亚硝酸盐含量的公式为：

A1×1000

X= m× V1/ V0×1000

式中：X――样品中亚硝酸钠的含量（mg/kg）；

A1――样液中亚硝酸钠的质量（ug）；

m ――样品的质量（g）；

V1――测定用样液体积（mL）；

V0――样品处理液总体积（mL）。

2.2 样品加标回收率计算公式：

加标样品测定值-样品本底值

回收率（%） = 加入标准品的量

3 结果

3.1 根据上述检测方法

测得亚硝酸盐标准点对应的吸光度依次为：0.025、0.037、0.052、0.065、0.081、0.116、0154，经计算，其一元线性回归方程为 y=0.7585X+0.0029 ，相关系数为：R2=0.9993 ，见图1：

3.2 3种不同前处理过程测定的结果及回收率

以青菜为样本，加入亚硝酸钠标准使用液，前处理步骤同前，每个样品平行测定3次，同时计算回收率，结果见表1。

由表1的结果可以看出，热水提取的回收率在（76.16%～76.32%）、振荡提取的回收率在（79.92%～81.22%）、超声提取的回收率在（97.86%～98.14%），超声提取法的回收率明显高于振荡提取法高于热水提取法，从样品的前处理过程可以看出超声提取法所需的时间少于振荡提取法少于热水提取法，因此超声提取法是进行蔬菜中亚硝酸盐测定的最佳前处理方法，时间快，回收率高，能满足平时的检测分析要求。

3.3 精密度试验

精确称取青菜样品10.00g，按超声提取法提取过滤、显色测定，进行连续6次的测定，经计算，其相对标准偏差为0.63%。说明本方法具有良好的重现性，测定结果见表2：

4 结论

本试验通过3种不同提取方法来测定蔬菜中的亚硝酸盐的含量，实验结果表明：热水提取、振荡提取所需时间较长，且提取方法的回收率不高，而超声提取，不仅提取时间短，且样品的回收率大大高于前两者。超声提取法操作简便，时间快，检测结果回收率高，准确度高，因此超声提取法测定蔬菜中的亚硝酸盐含量便于在在今后的实验中采用。

作者简介：孙慧（1980-），女，农艺师，主要从事农药残留及农业环境的定量检测工作。