心复康口服液对心力衰竭大鼠心功能及心肌中链酰基辅酶A脱氢酶基因表达的影响

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摘要：目的 观察心复康口服液对心肌梗死后心力衰竭大鼠血流动力学、心功能及梗死周围心肌中链酰基辅酶A脱氢酶基因表达的影响。方法 采用结扎SD大鼠左冠状动脉前降支致心肌梗死后心力衰竭大鼠模型，用心复康口服液于术后24h灌胃给药至6周，以卡托普利作为阳性对照药。给药4周后观察大鼠心脏功能、血流动力学及梗死周围心肌中链酰基辅酶A脱氢酶基因表达的变化。结果 模型组与假手术对照组比较，左心室舒张末压升高，左心室收缩压、心排血量、左心室内压最大上升速率、左心室压最大下降速率均显著降低，梗死周围心肌中链酰基辅酶A脱氢酶基因表迭下调(P＜0.01)。与模型组比较，心复康口服液和卡托普利皆可显著降低心梗后心衰大鼠左心室舒张末压(P＜0.05)，升高左心室收缩压、心排血量、左心室内压最大上升速率、左心室内压最大下降速率(P＜0.05或P＜0.01)；梗死周围心肌中链酰基辅酶A脱氢酶基因表达上调(P＜0.01)。结论 心复康口服液可改善心肌梗死后心力衰竭模型大鼠心脏功能，并可上调心肌中链酰基辅酶A脱氢酶基因表达。

关键词：心复康口服液；心功能；中链酰基辅酶A脱氢酶；心肌梗死；大鼠

中图分类号：R541.6　R285.5　文献标识码：A　文章编号：1672-1349(2007)12-1205-03

急性心肌梗死(AMI)后发生左心室重构，导致进行性心功能障碍，严重影响病人预后。中药心复康口服液是，临床治疗充血性心力衰竭的经验方，临床和实验研究提示心复康口服液可保护心肌缺血性损害，改善心功能。本实验观察了心复康口服液对心肌梗死后心力衰竭大鼠血流动力学及心脏功能的影响。

1 材料与方法

1．1 材料

1．1．1 仪器 TA1003型精密电子天平(上海天平仪器厂)；MFV--320型电磁流量计(日本NEC)；BL-420生物机能实验系统(成都泰盟科技有限公司)；HX-200动物呼吸机(成都泰盟科技有限公司)；DU640型紫外分光光度计(BECKMAN公司)；5700实时定量PCR仪(ABI AppliedBiosystems，USA)；Im-age Master VDS图像系统(Pharmacia Biotch公司)。

1．1．2　试剂与药物　心复康口服液主要由黄氏、人生、丹麦、灵芝、红花等组成。卡托普利由中美上海施贵宝制药有限公司提供，批号：0304033。OmnlscriptTM逆转录试剂盒(QIAGEN，Germany)；SYBR-Gre印PCR核心试剂(ABI AppliCd Biosys-terns，USAR)。

1．1．3 实验动物 正常雄性SD大鼠60只，体重230G～260g，北京维通利华实验动物中心提供。

1．2 方法

1．2．1 动物模型复制 大鼠以2.0％戊巴比妥液(40 g/kg)腹腔内注射麻醉，仰卧位四肢固定于大鼠台上，胸部手术视野区常规备皮、消毒，于心尖搏动最强处稍上(第4、5肋间)与胸骨平行处作长约2cm的切口，钝性分离胸大肌，左手持钝头无齿弯钳紧靠胸骨左缘插入肋间肌，在扩腔切口的同时，左手配合挤压胸部，将心脏挤出胸腔外，迅速以左手拇、食指固定心尖，剪开心包膜，在左冠状动脉(LAD)起始点下(2～3)mm处结扎左冠状动脉前降支，以标准肢体导联2(纸速50mm/s)心电图ST段弓背抬高为AMI形成。然后将心脏恢复到胸腔，挤压胸部，挤出胸腔内空气，缝合皮肤，局部消毒。

1．2．2 实验分组 动物购回喂养标准合成饲料，适应性喂养3d，禁食12h后，体重均衡，随机分为两组，假手术组12只，造模组48只。造模组大鼠按动物模型复制方法所述方法造模，造模成功大鼠复苏后24h，再随机分为模型组、卡托普利组、心复康口服液组共3组，每组不少于12只大鼠。假手术组按动物模型复制方法所述方法手术，但仅在相同部位穿线并不结扎，余步骤与手术组相同。各组大鼠术后24h开始灌胃给药。

1．2．3 实验动物给药方法 ①假手术组、模型组：生理盐水4.0mL/kg灌胃，每天1次；②卡托普利组：卡托普利100mg/kg灌胃，每天1次；③心复康口服液组：心复康口服液5.4g./kg灌胃，每天1次。各组大鼠于给药后6周末取材。

1．3 血流动力学检测 术前称重并麻醉(方法同上)。分离右颈外动脉，穿刺插入PES0小鞘管，并与BL-420生物机能实验系统相连，记录大鼠颈动脉收缩压(SBP)、舒张压(DBP)。最后，鞘管逆行送人左心室，连续记录左室收缩压(LVSP)、左室舒张末压(LVEDP)、左室内压最大上升和下降速率(±dp/&max)，并同步记录心率。

1．4　心排血量(CO)检测 术前称重并麻醉(方法同上)，行气管插管，连接HX-200动物呼吸机，开胸分离升主动脉，主动脉根部安置2号电磁流量计探头，经MFV-320型电磁流量计测量主动脉血流量，即心排血量。

1．5 心肌中链酰基辅酶A脱氢酶基因(MCAD mRNA)表达的检测

1．5．1 心肌组织总RNA的提取 灌胃6周末，每只大鼠取心肌组织100mg，采用1mL TRIzol Reagent经氯仿、异丙醇提取总RNA。紫外分光光度计及电泳分析RNA的量和纯度。所用RNA的A260/A280值在1.7～2.0之间，电泳均可见18S和28S条带。

1．5．2 引物设计、合成 引物设计由Primer Express专用软件设计，北京三赛百盛生物技术公司合成，引物序列如下，MCAD(150 bp)，正向引物：5’－CAGAGGCTACAAGGTCCTGAGAA-3’；反向引物：5’-GGCAAA~AGCAATI'G-3’。GAPDH(320 bp)(为内参照基因)，正向引物：5’-TAT GACAACTCCCTCAAGAT-3’；反向引物：5’-AGATCCACAACA3 OAT ACA TT-3’。超纯水稀释引物，配成引物储备液的浓度为20pmol/μL，-86℃低温保存。

1．5．3 反转录反应 RNA的逆转录反应，取10×RT缓冲液2.0μL，dNTP(每种dN了P5UM)2.0μL，10μMOligo-dT引物2.0μL，Onmiseript逆转录酶1.0μL，使每个反应管含4单位、RNA酶抑制剂1.0μL，使每个反应管含10个单位、RNA模板2μg。总体积20μL。37℃孵浴1h，93℃5 min。

1．5．4 PCR反应条件 PCR反应采用SYBR Green PCR核心试剂，在5700实时定量PCR仪上进行，PCR扩增条件95℃，10min；94℃20s，55℃20s，72℃35s，40个循环，扩增结束后，各取PCR产物4μL，进行1.2％琼脂糖电泳，胶图由ImageMas，

terWDS图像系统捕获，PCR产物量以光密度值x面积表示，分别计算MCAD/GAPDH的光密度比作为目的片段mRNA的相对含量。用ImageMasterToallab，V2.01专用分析软件分析。

1．6 统计学处理 实验数据用均数±标准差(x±s)表示，采用SPSS10.0分析软件进行t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2．1 心复康口服液对心力衰竭大鼠心率、血压的影响 与假手术组比较，模型组心率增快、舒张压降低(P＜0.05)；卡托普利组舒张压、收缩压均明显下降(P＜0.05或P＜0.01)。与模型组比较，卡托普利组、心复康口服液组血压及心率无统计学意义(P＞0.05)；卡托普利组与心复康组口服液组比较，血压及心率无统计学意义(P＞0.5)。详见表1。

2．2 心复康口服液对心力衰竭大鼠左心室非梗死心肌MCADmRNA表达的影响 与假手术组比较，模型组左心室非梗死心肌MCAD的mRNA表达水平降低(P＜0.01)。与模型组比较，卡托普利组、心复康口服液组左心室非梗死心肌MCAD的mRNA表达水平上调(P＜0.01)。与卡托普利组比较，心复康口服液组左心室非梗死心肌MCAD的mRNA表达水平虽呈上调趋势，但无统计学意义(P＞0.05)。详见表2。

2．3 心复痛口服液对心力衰竭大鼠心功能的影响 与假手术组比较，模型组LVSP，±dp/dtmax降低(P＜0.01)；与模型组比较，卡托普利组、心复康口服液组LVSP，LVEDP，±dp/dtmax提高(P＜0.05或P＜0.01)。卡托普利组与心复康口服液组比较，心功能各指标无统计学意义(P＞0.05)。详见表3。

3 讨 论

中药复方心复康口服液，治疗气虚血瘀型心力衰竭，临床研究提示本方具有改善患者，临床症状和心功能，提高病人生活质量的作用。

本研究结果显示，模型组大鼠LVEDP显著升高，LVSP，DBP降低，与文献报道的结果相符。而心复康口服液和卡托普利可使心力衰竭大鼠LVEDP显著升高，LVSP降低，与模型组比较，均有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01)。卡托普利可使心力衰竭大鼠SBP、DBP降低，与模型组比较，均有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01)，可能与用量过大有关。说明心复康口服液能显著改善心力衰竭大鼠的血流动力学状态。

本研究证实由于AMI使部分心肌组织坏死，导致心脏收缩和舒张功能明显受损，表现为左室压力最大上升速率和左室压力最大下降速率显著降低，心脏搏出量减少，收缩末期剩余血量增加，使LVEDP增高，心脏前负荷显著增加。本实验结果提示：模型组±dp/dtmax、CO均低于假手术组(P＜0.01)，说明AMI可损伤心脏收缩和舒张功能。中药心复康口服液和卡托普利可使心力衰竭大鼠00增加，±dp/dtmax上升，与模型组比较有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01)，这与文献[7，8，11]的报道结果相似。说明心复康口服液和卡托普利能显著改善大鼠的心脏收缩和舒张功能。

MCAD是中链脂肪酸臼氧化第一步的关键酶，中链脂肪酸不仅来源于饮食，还是特长链、长链脂肪酸β氧化的产物，虽然许多调控蛋白参与脂肪酸的β氧化，但MCAD在脂肪酸β氧化中具有重要地位。本实验选用MCAD可以直接反映脂肪酸氧化相关基因的表达变化。本实验发现模型组大鼠左心室非梗死区心肌MCAD mRNA表达下调，与模型组比较，有统计学意义(P＜0.01)，这与文献报道的结果一致，表明在心肌梗死后左心室重塑的整个过程中，梗死周围局部心肌组织存在脂肪酸代谢相关基因表达的下调。中药心复康口服液和卡托普利可使心力衰竭大鼠左心室非梗死区心肌MCAD mRNA表达上调，与Ｓ模型组比较有统计学意义(P＜0.01)。说明心复康口服液和卡托普利能显著改善心力衰竭大鼠左心室非梗死区心肌MCADmRNA表达。推测改善心力衰竭大鼠心脏功能可能与其改善心肌代谢有关。

作者简介：吴华芹(1981―)，女，现为中国中医科学院广安门医院2005级硕士研究生(邮编：100053)；胡元会(通讯作者)、陈双厚、刘瑞华，张百舜、程慧平、朱晓云，工作于中国中医科学院广安门医院(邮编：100053)；马铁民，工作于北京大学医学部基础医学院；褚瑜光，现为中国中医科学院广安门医院2005级硕士研究生。