气相色谱法测定哌拉西林钠中有机溶剂残留

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摘 要：目的：用气相色谱法测定注射用哌拉西林钠丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷的残留量。方法：采用毛细管气相色谱法,色谱柱为AT-1；载气为氮气；检测器为FID；按外标法计算含量。结果：在该色谱条件下，测得丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷的残留溶剂均有良好的线性关系（r=0.9994、0.9998、0.9993）；各平均回收率分别为99.3%、101.3%、110.8%；各精密度的RSD分别为3.6%、3.0%、未检出；最低检测限分别为1.0μg/mL、1.8μg/mL、1.4μg/mL。三批样品中上述有机溶剂残留量均符合要求。结论：本法简便，准确，重现性好，可用于该制剂中有机溶剂的测定。

关键词：哌拉西林钠；气相色谱法；有机溶剂残留

哌拉西林(Piperacillin Sodium)是半合成青霉素类抗生素，具广谱抗菌作用。哌拉西林对大肠埃希菌、变形杆菌属、肠杆菌属、枸橼酸菌属、沙门菌属和志贺菌属等肠杆菌科细菌，以及铜绿假单胞菌、不动杆菌属、流感嗜血杆菌等其他革兰阴性菌均具有良好抗菌作用。哌拉西林的作用机制为通过抑制细菌细胞壁合成发挥杀菌作用。在生产过程中，常用丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷作为溶媒，因此在产品中残留有机溶剂是不可避免的。实验发现，溶剂残留量大小直接与药物的稳定性相关，残留量越大，则稳定性越低，造成产品放置过程中发生溶液颜色变深、浊度升高等现象，直接影响产品质量和保质期。因此有必要对哌拉西林钠中丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷的残留量进行测定，并在生产过程中严加控制。本次实验采用顶空气相色谱法测定，实验证明本法操作简便、准确、重现性好，能很好的指导生产中对有机溶剂残留的控制。

1.仪器与试药

1.1仪器

Agilent7890A气相色谱仪（配有顶空进样器）

1.2试药

注射用哌拉西林钠(自制，批号1201001)；丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷对照品（国药集团化学试剂有限公司）；自制纯化水，经气相色谱检测对测定无干扰。

2.方法与结果

2.1色谱条件

色谱柱：AT-1；检测器：FID；载气：氮气；检测器气体：空气；检测器温度：300℃；隔垫吹扫：3ml/min；程序升温：初始温度：110℃，保持时间：9min；升温速率：70℃/min；终温：200℃，恒温时间：5；进样口温度：200℃；进样类型：分流（分流比：10：1）；柱前压：7psi；氢气：30ml/min；数据采集：约25min；清洗液：0.05M氨水

2.2溶液的制备

2.2.1内标溶液 精密称取111.0mg的甲乙酮到含有190mlDMF的200ml容量瓶中，用DMF定容并混匀。

2.2.2空白溶液制备 移取10.0ml的内标溶液到100ml容量中，用DMF稀释至刻度，混匀。2.2.3样品溶液的制备精密称取大约0.25g样品到10ml的容量瓶中，并准确移入1.0ml的内标溶液，溶解，用DMF定容，混匀。（每测定6次样品溶液后，进样1次标准溶液，各溶媒响应比RSD不大于10.0%，系统符合要求）。

2.2.4溶媒标准储备液的制备分别精密称取丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷标准物质151.0mg、249.1mg、31.5mg到含有大约190ml的DMF的200ml容量瓶中，然后用DMF稀释至刻度。

2.2.5单一溶媒标准溶液的制备分别移取丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷标准储备液10ml到含100ml的容量瓶中，然后用DMF稀释至刻度，混匀。

2.2.5混合溶媒标准溶液的制备分别移取丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷标准储备液和内标溶液10ml到含100ml的容量瓶中，然后用DMF稀释至刻度，混匀。溶液中每1ml含69.8ug丙酮，122.9ug乙酸乙酯，15.0ug二氯甲烷。

2.2.6准确度溶液配制

按下表1配制5种溶液。

2.3系统适用性实验

按操作参数要求设置气相条件。将混合标准溶液重复注样6次，记录色谱图。丙酮、乙酸乙酯、三乙胺、二氯甲烷的RSD%分别为2.0%、0.7%、4.8%、1.6%。均小于10.0%，丙酮与二氯甲烷的分离度为6.6，丁酮与乙酸乙酯的为2.2，二氯甲烷与丁酮的为7.7。色谱图见图1。

2.3线性关系考察

线性和范围通过分析一系列已知浓度的丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷的标准溶液来确定。取线性与范围标准溶液, 分别进样1次,记录色谱图，各浓度溶媒的响应比与相应的溶媒浓度之间的线性关系如下：丙酮y=0.0132x+0.0274，R= 0.9994乙酸乙酯y=0.0122x+0.0194，R=0.9998，R=0.9990，二氯甲烷y=0.0042x+0.0007，R=0.9993，其相关系数均不小于0.999。

2.4精密度试验

配制100%浓度的样品（1201001），第一天重复称样六次，分别为0.2508g,0.2514g,0.2507g,0.2517g,0.2515g, 每个样品注1针测定, 记录色谱图，每一溶媒6次测定的结果的RSD应不大于10.0%。结果见表2。

表2精密度试验

2.5检测限和定量限

分别将标准溶液逐步稀释，同时进行色谱检测，记录色谱图。丙酮、乙酸乙酯、三乙胺、二氯甲烷的定量限分别为3.4μg/mL、6.1μg/mL、4.7μg/mL、4.6μg/mL，检测限分别为1.0μg/mL、1.8μg/mL、1.4μg/mL、1.4μg/mL。

2.6准确度/回收率试验

准确度是通过标准添加法来测定，取准确度溶液分别进样，控制液进样1针，其它三个浓度加标溶液，每个浓度配样3个，各进样1次，记录色谱图。控制液样品质量为1.2507g,50%加标溶液的样品质量分别为1.2504g，1.2492g，1.2512g，100%加标溶液的样品质量分别为1.2510g,1.2521g,1.2497g,150%加标溶液的样品质量分别为1.2513g,1.2518g,1.2528g，丙酮的平均回收率：99.3%，乙酸乙酯的平均回收率：101.3%，二氯甲烷的平均回收率：110.8%。此方法各溶剂的回收率都在规定范围（70%～130%）内，证明本法具有较好的准确度。

2.7样品的测定

精密称定1201001，1201002,1201003,1201004,1201005, 1201006, 批哌拉西林样品，质量分别为0.2512g,0.2515g,0.2520g,0.2511g,0.2502g,0.2507g,各进样1次，记录色谱图并计算各残留溶媒含量。含量结果见下表3。

3.讨论

本方法用顶空进、程序升温分析哌拉西林钠中的残留溶剂，使分析准确、方便、重复性好。

2010年版《中国药典》二部对有机挥发性杂质的检查作了详细规定，本方法精密度、检测限、回收率等均能付合药典要求。故此方法适用于哌拉西林钠中三种有机溶剂的检测。

参考文献：

[1]中国医药科技出版社，中华人民共和国药典，2010年版·二部，531页至534页，附录61～附录65.