高效液相色谱法测定益智温肾十味丸中胡椒碱的含量
开篇：润墨网以专业的文秘视角，为您筛选了一篇高效液相色谱法测定益智温肾十味丸中胡椒碱的含量范文，如需获取更多写作素材，在线客服老师一对一协助。欢迎您的阅读与分享！
摘 要:目的:建立一种测定益智温肾十味丸含量的方法｡方法:以ODS Hypersil（5μm，4.6mm×200mm）为分析柱,甲醇-水(76：24)为流动相,检测波长343nm,进样量10μL｡采用HPLC法测定胡椒碱的含量｡结果:胡椒碱在0.172～1.033μg范围内,线性关系良好(r=0.9996),平均回收率为97.64%,RSD=1.4%(n=9)｡结论:本法操作简便,结果可靠,重现性好,可作为该产品质量控制的方法｡
关键词:益智温肾十味丸 胡椒碱 HPLC 含量测定
益智温肾十味丸是由益智､干姜､荜茇､榧子､莲子等10味药材组成的复方制剂｡为卫生部药品标准(蒙药分册)155页项下品种,标准编号为ZZ-8385｡具有祛肾寒､利尿之功效｡临床用于肾寒肾虚,腰腿痛,尿闭,肾结石等症｡国内对该药质量控制的报导较少,2005年版中国药典一部项下,采用HPLC法,以胡椒碱为对照品,对荜茇药材进行了含量测定[1],因此选择胡椒碱为对照品,对成品质量进行控制｡
1 仪器与试药
1.1 仪器 LC-10ATvp液相泵､SPD-10Avp检测器(日本岛津公司)｡
1.2 试剂 甲醇为色谱纯,水为重蒸馏水｡其他均为分析纯｡
1.3 对照品 胡椒碱对照品对照品由中国生物制品检定所提供（批号:0775-9702含量测定用）｡益智温肾十味丸(市售品,内蒙古蒙药股份有限公司生产)
2 实验方法及结果
2.1 色谱条件 色谱柱:ODS Hypersil(北京八方公司)（5μm，4.6mm×200mm）;流速:1.0mL・min-1;柱温:25℃,测定波长选定为343 nm｡流动相:甲醇-水(76：24),按胡椒碱色谱峰计算应不低于3000｡
2.2 线性范围的考察 精密称取胡椒碱对照8.61mg,置10mL量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀｡精密吸取1.0mL,置10mL量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,制成每1mL含胡椒碱86.10μg的对照品溶液｡精密吸取2､4､6､8､10和12μL,分别注入液相色谱仪中,记录色谱图,测定其峰面积,并以进样量（μg）为横座标,峰面积（A）为纵座标,进行回归,得回归方程:Y=1.166×10-8X+3.210×10-3r=0.9996｡结果表明,在拟定的色谱条件下,胡椒碱在0.172～1.033μg之间,进样量与峰面积线性关系良好｡
2.3 供试品溶液的制备 取本品(批号:070402)20粒,研细,取0.5g,精密称定,置50mL棕色量瓶中,加甲醇约40mL,超声提取40min,放冷,加甲醇稀释至刻度,摇匀,用微孔滤膜(0.45μm)滤过,取续滤液,即得｡
2.4 阴性对照品溶液的制备 取处方量药材,除去荜茇,按制备工艺制成阴性对照品,再按“2.3”项下方法制备｡
2.5 精密度试验 精密吸取胡椒碱对照品溶液1OμL,重复进样6次,测定峰面积,计算胡椒碱吸收峰面积,结果RSD=0.5%,说明本方法精密度良好｡
2.6 稳定性试验 取供试品溶液(批号:070402)与胡椒碱对照品溶液,分别于室温放置,按0､2､4及6h时间间隔,分别进样lOμL,结果样品RSD为1.82%
2.7 样品含量测定重复性试验 取本品(批号:070402)20粒,研成细粉,取0.5g,精密称定,共6份｡按“2.3”项下方法制备供试品溶液,精密吸取供试品溶液10μL和对照品溶液10μL,分别注入液相色谱仪中,测定胡椒碱色谱峰面积,计算胡椒碱含量｡结果样品中胡椒碱含量的RSD=1.32%,表明,本实验方法重现性良好｡
2.8 加样回收率试验 取已知含量的本品(批号:070402,含胡椒碱1.495mg・g-1)细粉0.25g,共计9份,每3份平行,分别精密称定重量,精密加入0.524mg・mL-1胡椒碱对照品溶液1.0mL､0.405mg・mL-1胡椒碱对照品溶液1.0mL及0.315mg・mL-1胡椒碱对照品溶液1.0mL,按按前述液相色谱条件测定胡椒碱峰面积,计算样品中胡椒碱含量,并计算回收率,结果见表1｡
2.9 样品中胡椒碱含量测定 取本品10批次样品各20粒,分别研成细粉,各称取0.5g,精密称定重量,按“含量测定”项下试验,测定各批样品中胡椒碱含量,分别为1.495,2.025,1.650,2.050,1.815,1.420,1.640,1.860,2.015,1.610 mg・g-1｡
根据上述测定结果,初步将本品每g含荜茇以胡椒碱(C17H19NO3)计不得少于1.40mg｡
3 讨论
本品制备工艺中,荜茇药材以原粉入药,因此参照2005年版中国药典项下方法,将乙醇提取改为甲醇提取样品,并分别考察不同超声提取时间提取液中胡椒碱含量｡结果表明超声提取40min以后,提取液中胡椒碱含量不再增加,因此确定供试品溶液超声提取时间为40 min｡
参考文献
1. 中华人民共和国卫生部药典委员会编 中国药典[S],化学工业出版社.2005:163
(收稿日期:2007.12.3)