当归水醇提取物对哮喘患者血CD4+CD25+T调节细胞IFN—γ表达的影响

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[摘要] 目的 研究当归水醇提取物对哮喘患者血cd4+cd25+t调节细胞ifn—γ表达的影响。 方法 分离50例哮喘患者的外周静脉血CD4+CD25+T调节细胞，采用Western blot研究不同浓度（3.13 ng/mL，6.25 ng/mL，12.5 ng/mL，25 ng/mL）的当归水醇提取物对CD4+CD25+T细胞IFN—γ表达情况以及25 ng/mL的当归水醇提取物处理CD4+CD25+T细胞不同时间（24 h、36 h、48 h）后IFN—γ表达情况。 结果 随着当归水醇提取物浓度的增加，CD4+CD25+T调节细胞IFN—γ表达增加。随着当归水醇提取物处理的时间延长，CD4+CD25+T调节细胞IFN—γ表达增加。 结论 当归水醇提取物浓度对哮喘患者IFN—γ表达呈现明显的时间—浓度依赖关系，提示当归水醇提取物可能通过影响IFN—γ表达来影响哮喘的发生。

[关键词] 当归水醇提取物；IFN—γ；CD4+CD25+T调节细胞；哮喘

[中图分类号] R285.6 [文献标识码] B [文章编号] 1673—9701（2012）27—0045—03

The influence of angelica sinensis on IFN—γ in the CD4+CD25+T regulatory cells isolated from asthma patients

LUO Jiangxiu ZHONG Chao

Department of Pharmacy， Guangming New District People’s Hospital， Shenzhen 518106， China

[Abstract] Objective To identify the influence of angelica sinensis on INF—γ in the CD4+CD25+ T regulatory cells isolated from asthma patients. Methods Different concentration of angelica sinensis （3.13 ng/mL， 6.25 ng/mL， 12.5 ng/mL， 25 ng/mL） effected on asthma patients’ CD4+CD25+ T regulatory cells and different times of angelica sinensis （24 h， 36 h， 48 h） effected on asthma patients’ CD4+CD25+ T regulatory cells， and used Western blot to detect the expression of IFN—γ in CD4+CD25+T regulatory cells. Results The extracts from angelica sinensis could effect on human CD4+CD25+ T regulatory cells and the expression of IFN—γ was increased. Conclusion The extracts from angelica sinensis can infect the expression of IFN—γ in human CD4+CD25+ T regulatory cells.

[Key words] Extracts from angelica sinensis； IFN—γ； CD4+CD25+T regulatory cells； Asthma

在工业化日趋发展的今天，当机体吸入多种抗原后，气道广泛地收缩变窄，导致支气管哮喘。目前研究表明，嗜酸性粒细胞、肥大细胞、巨噬细胞、T淋巴细胞等多种炎性细胞参与了该病的发展过程。进一步的研究发现，其发病与Th1/Th2系统失衡和Th2细胞优势分化相关，而来源于Th1型细胞的细胞因子IFN—γ可抑制Th2型细胞的分化，对过敏性疾病的发生产生保护作用[1]。因此对该细胞因子的进一步研究并借此来开发治疗哮喘的药物，成为学者们研究的热点。当归为伞形科植物当归的干燥根，首载于《神农本草经》。当归性甘、辛、温，归肝、心、大肠经，是一味常用的传统中药。目前主要认为当归能够改善机体免疫功能，提高血清中溶血素的含量，增强对免疫抑制剂的对抗作用，消除免疫复合物的沉积；并能显著提高小鼠溶菌酶含量、巨噬细胞的活性，降低循环免疫复合物的含量从而显著提高小鼠的非特异性免疫功能[2]。本研究拟探讨当归水醇提取物对哮喘患者CD4+CD25+T调节细胞中IFN—γ表达的影响，来判断其对哮喘的治疗作用。

1 材料与方法

1.1 研究对象

哮喘患者43例，男23例，女20例，平均年龄（29±10）岁。按《支气管哮喘防治指南》明确诊断，为本院2012年3～6月门诊及住院患者，均未使用茶碱类药物、糖皮质激素类药物或停药2周以上。健康成年人24例，平均年龄（33±11）岁，男15例，女9例，为本院健康志愿者。

1.2 试剂

RPMI—1640购自Invitrogen公司；小牛血清和胰蛋白酶购自杭州四季青生物技术公司；DMSO购自美国AMRESCO公司。CD4+CD25+T调节细胞的分离免疫磁珠分离试剂盒为Miltenyi公司产品，Geniu凝胶电泳图像分析仪为SynGene公司产品。蛋白裂解液购自碧云天生物技术公司。IFN—γ抗体、二抗购自Cell Transfer Signal（CTS）公司。其余试剂为分析纯。

1.3 当归水醇提取物的制备

当归购自老百姓大药房，取超临界萃取后的当归药材，置不锈钢锅中煎煮3次后，过滤，合并滤液，将加热浓缩得到的稠膏冷却后加入95%乙醇配成60%的醇溶液，4℃冰箱静置24 h后，过滤，收集滤液及沉淀。沉淀物加水溶解，加95%乙醇配成80%醇溶液，4℃冰箱静置24 h，再次过滤，沉淀物加1～2倍95%乙醇洗涤，过滤，风干。将滤液合并后蒸发浓缩，回收乙醇。滤液和沉淀物于4℃冰箱保存备用。