卵巢癌患者外周血CD4+CD25highTreg细胞的测定结果与分析
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【摘要】 目的 探讨CD4+CD25highTreg细胞在卵巢癌患者诊断及鉴别诊断中的意义。方法 选择手术治疗经病理诊断的卵巢巧克力囊肿患者42例(巧克力囊肿组)和卵巢癌患者39例（卵巢癌组），其中卵巢癌早期（Ⅰ～Ⅱ期）21例，卵巢癌晚期（Ⅲ～Ⅳ期）18例。利用流式细胞仪进行CD4+CD25highTreg细胞检测并进行比较。结果 卵巢癌患者CD4+CD25highTreg细胞水平明显高于卵巢巧克力囊肿患者，卵巢癌晚期明显高于早期患者。结论 检测CD4+CD25highTreg细胞在卵巢癌患者早期诊断及鉴别诊断中具有重要意义。
【关键词】 卵巢癌； CD4+CD25highTreg细胞； 诊断
卵巢癌是一种恶性程度高、发展迅速的恶性肿瘤,发病率在女性生殖道恶性肿瘤中居第3位，病死率居第1位。卵巢癌早期症状隐匿，多于症状出现之前便发生盆腔腹腔及其部位转移，70%~80%的患者就诊时已处于晚期，因此，卵巢癌早期诊断及早期治疗具有重要意义［1］。本文通过对卵巢癌早、晚期患者及卵巢巧克力囊肿患者CD4+CD25highTreg细胞进行的检测,研究不同患者淋巴亚群异常的特点,旨在为卵巢癌的早期诊断及鉴别诊断提供依据，现报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料 2008年1月~2009年12月在本院住院行手术治疗经病理诊断为卵巢巧克力囊肿患者42例(巧克力囊肿组)和卵巢癌患者39例（卵巢癌组），其中卵巢癌早期（Ⅰ～Ⅱ期）21例，卵巢癌晚期（Ⅲ～Ⅳ期）18例［2］。年龄为29～65岁，入选者均为新发病例，既往无手术史，排除合并其他恶性肿瘤、全身感染及心血管疾病等。正常对照50例，年龄（40.6±8.5）岁，全部经体检证实为健康人。
1.2 标本采集和处理 均清晨空腹抽血，用EDTAK2抗凝真空管抽血2 ml备用。
1.3 检测仪器试剂及方法 抗CD3-PerCP，抗CD25-PE,抗CD4-FITC抗体及同型对照,CD3-FITC/CD8-PE/CD45-PerCP/CD45APCT细胞亚群试剂盒及Epics XL型流式细胞仪均购自美国贝克曼-库尔特公司。检测CD4+CD25high时，取2份新鲜采集的抗凝血各20 μl,分别加入抗CD3-PerCP/抗CD25-PE,抗CD4-FITC抗体及抗CD3-PerCP/抗CD4-FITC抗体/小鼠IgG-PE各10 μl,室温避光温育30 min,加入0.5 ml溶血素置37 ℃至透亮为止，加入PBS 2 ml 3000 r/min离心5 min后弃上清，加入PBS 0.5 ml混匀后上机，选择荧光强度>10的CD4+CD25high作为Treg细胞，记录阳性细胞百分率。检测淋巴细胞亚群时，另取新鲜采集的抗凝血20 μl,加入抗CD3-FITC/抗CD8-PE/抗CD45-PerCP/抗CD4-APC抗体10 μl,室温避光温育30 min,加入0.5 ml溶血素置37 ℃至透亮为止，加入PBS 2 ml，3000 r/min离心5 min后弃上清，加入PBS 0.5 ml混匀后上机，选择荧光强度>10的细胞，记录阳性细胞百分率。
1.4 统计学处理 采用SPSS 11.0统计软件对数据进行处理，计量资料用均数±标准差（x±s）表示，两组间比较采用两样本均数t检验。以P
2 结果
3组患者中，卵巢巧克力囊肿患者CD4+CD25highTreg细胞无显著异常（P>0.05），卵巢癌患者CD4+CD25highTreg细胞均有显著异常(P
：与正常对照组比较，*P
3 讨论
人体中高表达CD25的CD4+T细胞是调节性T细胞（regulatory T cells,Treg）,能抑制效应T细胞的功能［3］。CD25的CD4+T细胞通过识别，结合杀伤细胞抑制性受体，抑制自然杀伤细胞和细胞毒性T细胞的杀伤作用；并具有上调Fas配体的表达及可溶性Fas的分泌，诱导CD8+细胞的凋亡；抑制树突细胞单核细胞和巨噬细胞等抗原递呈细胞的抗原提呈能力等功能，促使肿瘤细胞发生免疫逃逸。卵巢癌的发生与发展是一个多因素多步骤的过程，与宿主因素密切相关，且最重要的是免疫功能，特别与T淋巴细胞功能的关系更密切。本研究结果显示，卵巢癌组外周血高表达CD25的CD4+T细胞的表达明显高于巧克力囊肿组与正常对照组，晚期卵巢癌组外周血高表达CD25的CD4+T细胞的表达明显高于早期卵巢癌组。提示外周血高表达CD25的CD4+T细胞与卵巢癌的发生发展密切相关。因此，应用流式细胞仪检测外周血淋巴细胞功能和高表达CD25的CD4+T细胞可用于卵巢癌患者的免疫状态监测及判断疾病进展程度。
参 考 文 献
［1］ 沈铿.卵巢癌化学治疗的发展和挑战.中国妇产科临床，2006，3（1）：3-7.
［2］ 乐杰.妇产科学.第7版，北京：人民卫生出版社，2008：278-279.
［3］ 王礼文.CD4+CD25+调节性T淋巴细胞及相关标记物的研究进展.临床检验杂志，2005,23(2):157-159.
（收稿日期：2011-08-05）