HPLC法测定甲磺酸伊马替尼片的有关物质
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摘 要：目的：建立高效液相色谱法测定甲磺酸伊马替尼片有关物质的方法。方法：色谱柱为KromasilC18（250mm×4.6mm，5μm），以含0.04%辛烷磺酸钠的20mmol/L磷酸二氢钠溶液（磷酸调至PH2.5）-甲醇为流动相，梯度洗脱，流速为1ml﹒min-1，检测波长为268nm，柱温为30℃。结果：在本方法中，甲磺酸伊马替尼的线性关系良好，r为0.9999；专属性强，甲磺酸伊马替尼与各中间体及各降解产物之间都能完全分离；精密度良好，RSD为1%。结论：该方法准确、简便、灵敏，可用于甲磺酸伊马替尼片有关物质测定。
关键词：甲磺酸伊马替尼片 有关物质测定 hplc
甲磺酸伊马替尼用于治疗慢性骨髓性白血病及恶性胃肠道间质肿瘤，治疗效果得到了广泛的认可。本文参考文献[1-3]采用梯度洗脱测定甲磺酸伊马替尼片的有关物质，其中文献[2，3]均采用梯度洗脱，但其梯度峰都明显，且不能有效分离中间体硝基嘧啶胺与降解杂质去甲基伊马替尼，影响了有关物质的检测。本文的方法，梯度峰平整，对检测无影响，且甲磺酸伊马替尼与各个杂质分离度良好，结果准确，方法易操作。
一、仪器与样品
1.仪器
岛津 SPD-M20A色谱仪。
2.样品
甲磺酸伊马替尼对照品（山东方明药业集团股份有限公司，1111001）；甲醇为色谱纯；辛烷磺酸钠为进口试剂；水为二次蒸馏水；其它试剂均为分析纯；甲磺酸伊马替尼片（山东方明药业集团股份有限公司；批号：1202001、1202002、1202003；规格：0.1g。）
二、方法与结果
1.色谱条件
2.供试品溶液的制备
取甲磺酸伊马替尼片研细，精密称取粉末适量（约相当于伊马替尼10mg），置25ml容量瓶中，加溶剂[流动相A：流动相B=4：6]适量，超声20min，用溶剂稀释至刻度，摇匀，滤过，作为供试品溶液。
3.对照溶液的制备
精密量取供试品溶液1ml置100ml容量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。
4.空白辅料溶液的制备
根据制剂的配方组成，制备辅料空白颗粒。精密称取空白颗粒适量（约相当于伊马替尼10mg的量），按照“2.2”项下方法制备空白辅料溶液。
5.专属性试验
辅料干扰试验：分别对空白辅料溶液、对照溶液和供试品溶液进样分析，辅料不干扰甲磺酸伊马替尼有关物质的测定。
降解试验：精密称取甲磺酸伊马替尼片粉适量（约相当于伊马替尼10mg）置25ml容量瓶中，按下列方法破坏：（1）加2.0mol/L HCl溶液1ml并放置10小时作为酸降解样品；（2）加2.0mol/L NaOH溶液1ml并放置10小时作为碱降解样品；（3）加6%过氧化氢溶液1ml并放置10小时作为氧化降解样品；（4）置4500±500lx光照度下24小时作为光照降解样品；同时做空白及辅料空白试验。结果显示：甲磺酸伊马替尼对酸、碱及光照均较稳定，在氧化条件下产生降解产物，各降解产物分离度良好。各杂质及主峰的分离度见下图1。
1.伊马酸 2.伊马胺 3.N，N-双氧化伊马替尼 4.N-氧化伊马替尼 5.甲磺酸伊马替尼 6.硝基嘧啶胺 7.去甲基伊马替尼 8.伊马替尼聚合物
6.线性试验
7.精密度
取对照溶液20μl，连续进样6次， RSD为1.0%。结果显示精密度良好。
8.稳定性试验
按照“2.2”项下方法制备供试品溶液，室温下在0、2、6、10、15小时分别测定，计算得：RSD=2.3%，n=5，结果表明，本品的供试品溶液在室温15小时内稳定。
9.回收率试验
在空白辅料中分别加入适量的甲磺酸伊马替尼对照品及各个限度下的杂质，按照“2.2”项下方法制备供试品溶液，在相当于供试品溶液80%、100%和120%浓度水平下，分别考察主药加样回收率及各个杂质回收率。每个浓度配制3份。主药的平均回收率为99.88%，杂质的平均回收率为98.21%。
10.耐用性
分别对不同柱温、不同流动相比例及PH值和色谱柱长度分别考察。改变柱温影响主药的出峰时间，但不影响各峰之间的分离度；改变流动相比例及PH值和色谱柱长度，各峰之间的分离度就不符合要求，故在色谱条件中做出明确规定。
三、讨论
1.梯度条件的选择
等度条件下中间体与降解杂质不能有效分离，影响甲磺酸伊马替尼的有关物质测定，故选梯度条件。
2.流动相的选择
参考进口注册标准，减少辛烷磺酸钠的用量的同时使用磷酸二氢钠，在该流动相条件下，甲磺酸伊马替尼的保留时间较为理想，理论塔板数高，且各峰之间的分离度符合标准规定，能有效检测出甲磺酸伊马替尼片中的有关物质。
参考文献
[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典2010年版（二部）[S].北京：中国医药科技出版社，2010：附录ⅴD.
[2]进口药品注册标准. JX20040087.
[3]王棋，宋锐，费梦莹等，梯度洗脱HPLC法测定甲磺酸伊马替尼含量及有关物质。海峡药学，2012，24（3）：58～60.