葛根中葛根素的高效液相色谱分析

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【摘要】 目的 测定不同产地葛根中葛根素的含量。方法 用HPLC法测定，以MeOH-H2O-HAc（25∶75∶0．5）为流动相，250 nm为检测波长。结果 葛根素在0．026～1．95 μg与峰面积呈良好线性关系（r=0．999 8）,平均回收率为97．3%,RSD为1．35%(n=5)。结论 该法简单、快速、准确,适用于葛根中葛根素含量的测定。

【关键词】葛根;葛根素;HPLC

Study ofpuerarin inredix puerariae by reversed-phase high performance liquid chromatography

LI Hong-yu,DAI Shi-wen,SHOU Dan,et al.Zhejiang Academy of Traditional Chinese Medicine,Hangzhou 310007,China

【Abstract】 Objective Determination of Puerarin in the Redix Puerariae from different areas.Methods Puerarinwere determined by HPLC.The mobile phase was MeOH-H2O-HAc（25∶75∶0．5）.Detection wavelength was at 250 nm.Results The Puerarin curve showed good linear correlation within 0．026-1．95 μg(r=0．999 8).The average recovery of Puerarin was 97．3% with RSD of 1．35%(n=5).Conclusion The method is simple and can be used to determine Puerarin with quick and accurate.

【Key words】Redix puerariae; Puerarin;HPLC

葛根为豆科植物野葛 Pueraria lobata (Willd.) Ohwi的干燥根,是常用中药材,具有解肌退热、生津、透疹、升阳止泻功效，用于外感发热头痛、项背强痛、口渴、消渴、麻疹不透、热痢、泄泻、高血压颈项强痛等[1]。现代研究证实，葛根中的主要有效成分为葛根素等异黄酮类化合物，具有抗炎解热、扩张冠状动脉血管、增加冠状动脉血流量的作用，同时也有降低血压的作用。本文采用高效液相色谱法对不同产地葛根样品进行了定量分析,结果令人满意。

1 实验部分

1．1 仪器与试药 岛津LC-10Atvp高效液相色谱仪；SPD-10 Avp紫外检测器；岛津UV-265紫外分光光度仪。甲醇（色谱纯），水（二次蒸馏），其余均为分析纯。葛根素对照品（中国药品生物制品检定所）。葛根样品由本院高家鉴主任中药师鉴定为豆科植物野葛(Pueraria lobata ohwi)的干燥根。

1．2 色谱条件 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；色谱柱C18 diamonsil(150 mm×4．6 mm，5 μl I.D)，MeOH-H2O-HAc（25∶75∶0．5）为流动相，紫外检测波长250 nm,理论板数按葛根素峰计算应不低于3 000。

2 结果与讨论

2．1 流动相及流速的选择 试验时曾采用下述流动相进行测定：甲醇-水（25∶75）、甲醇-水-醋酸（30∶70）、甲醇-水（25∶75）为流动相，结果采用甲醇-水-冰醋酸（25∶75∶0．5）为流动相，样品分离好。而流速也以1．0 ml/min为合适。

2．2 标样溶液的制备 称取一定量葛根素对照品,用30%乙醇溶解配制成浓度为0．13 mg/ml的葛根素标准液。

2．3 供试品溶液的制备 取一定量葛根粉末（过三号筛）约0．1 g，精密称定，置于50 ml容量瓶中,加30%乙醇50 ml,超声提取30 min,过滤,取续滤液作为供试品溶液。

2．4 线性关系考察 在上述色谱条件下，分别进标样溶液0．2、1、5、10、15 μl，测得各峰面积。以葛根素为横座标（A），以峰面积（Y）为纵座标，计算得回归方程：Y=3．59×106x+38 529．39,相关系数r=0．999 8；结果紫外检测葛根素在0．026～1．95 μg范围内呈良好线性关系。

2．5 精密度试验 取上述标样溶液，连续进样5次，每次5 μl，测定峰面积，结果见表1。

2．6 重复性试验 取同一样品,按照含量测定方法测定，结果见表2。

2．7 稳定性试验 取上述供试品溶液，0、2、5、7、10 h进样，结果见表3。

结果表明:葛根素对照品在室温下10 h内进样稳定。

2．8 回收率试验 取已知含量的样品，分别加入葛根素标样，测定,结果见表4。

2．9 样品分析 取葛根样品,按“2．5”项下方法操作,取供试品溶液再稀释10倍,在上述色谱条件下,精密吸取标样溶液10 μl与供试品溶液10 μl，注入液相色谱仪，测定，对照品及样品色谱图见图1,结果见表5。

3 讨论

3．1 中国药典2005年版一部,葛根药材中葛根素的含量测定方法是以甲醇-水(25∶75)为流动相,葛根素的吸收峰没有达到基线分离，经过甲醇-水（25∶75）、甲醇-水（30∶70）、甲醇-水-醋酸（25∶75∶0．5）为流动相，结果采用甲醇-水-冰醋酸（25∶75∶0．5）为流动相，葛根素的吸收峰达到基线分离,葛根素分离度高，样品分离好,故选用为流动相。

3．2 本文采用高效液相色谱法测定不同产地葛根中葛根素的含量,方法简单、快速、准确，可用于葛根中葛根素的含量测定。

参考文献

1 中国药典2005版一部.2005:233-234.