T—SPOT.TB在菌阴肺结核中的诊断价值
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【摘要】 目的：评价γ干扰素释放结核感染T细胞斑点试验（T-spot.tb）检测在菌阴肺结核中的诊断价值。方法：将本院住院确诊菌阴肺结核67例患者作为观察组，同期入住的124例肺炎患者作为对照组，两组进行T-SPOT.TB、结核抗体、结核菌素试验（PPD）等检测。结果：T.SPOT.TB在菌阴肺结核组中的敏感性（89.6%）和特异性（91.1%）均高于对照组，比较差异均有统计学意义（P
【关键词】 菌阴结核； γ干扰素释放试验； 诊断
结核病目前仍是威胁全球公共卫生的主要传染病之一。据世界卫生组织统计，全球约有1/3的人口感染过结核分枝杆菌[1]。在我国，结核病的疫情虽然有显著改观，但由于我国是全世界第一人口大国，因此我国也同样是世界结核病大国。近年来，结核病的发病率呈现逐年上升趋势。结核病的早期诊断尤为重要，其可明显改善患者的预后，且能尽早隔离患者，控制结核的传播。结核菌素试验（PPD）是目前临床常用的诊断结核的方法之一，但其与卡介苗具有交叉免疫源性，存在交叉免疫反应，限制了其在结核病中的诊断价值。痰结核菌培养是诊断结核的金标准，但其耗时较长，一般需要两个月左右时间，使用BACTEC法，最快也需要两周才能分离培养出结核分枝杆菌，不能用于早期诊断结核病，且其受痰菌量的影响较大，对痰菌阴性的结核患者诊断价值有限。痰抗酸杆菌涂片是诊断结核的重要方法之一，但是在活动性肺结核患者中，菌阴肺结核患者比例约为40%～60%[2]。而对于菌阴结核，诊断更为困难。血清结核抗体是辅助结核诊断的手段之一，但其特异性欠强，敏感性较低。近年来，T细胞的γ干扰素释放试验（TIGRA）在结核病诊断领域取得了重要进展，其采用结核杆菌所特有抗原早期分泌抗原靶蛋白（early secreting antigen target-6，ESAT-6）和培养滤过蛋白-10（culture filtrating protein-10，CFP-10）刺激机体T细胞释放IFN-γ来诊断结核，具有较高的特异性和敏感性。本研究采用其中一种方法T-SPOT.TB来检测结核病患者外周血中结核特异性抗原刺激所产生的分泌IFN-γ的T细胞数，探讨其在菌阴肺结核中的辅助诊断价值。
1 资料与方法
1.1 一般资料 收集本院收治的菌阴肺结核（诊断符合中华结核病诊治指南诊断标准）患者67例作为观察组，其中男39例，女28例，平均年龄（51.1±20.6）岁；对照组为本院同期收治的肺炎患者124例，其中男73例，女51例，平均年龄（57.5±18.0）岁。两组患者一般资料比较差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。
1.2 试剂与方法 T-SPOT.TB：试剂由上海复星医学诊断公司提供。肝素抗凝采血管采集外周静脉血8～10 mL，分离外周血单核细胞（PBMC）。配置250万细胞/mL的标准溶液。取出微量板，加入细胞培养液作为阴性对照，加入植物血凝素为阳性对照，剩余两孔分别加入抗原A和抗原B各50 μL，分别含ESAT-6和CFP-10，每孔加入含有25万PCMC的上述细胞悬液100 μL，微量板置于CO2培养箱中，37℃培养16～20 h，PBS液洗脱，加入生物标记的抗IFN-γ单克隆抗体50 μL，4℃中孵育2 h，PBS液洗脱，酶联显色，记录斑点数。阳性结果定义为：当阴性对照孔斑点数为0～5时，测量孔斑点数减去阴性对照孔斑点数≥6或当阴性对照孔斑点数≥6时，测量孔斑点数≥两倍对照孔斑点数[3]。PPD：试剂由四川成都生物技术公司生产（50 IU/mL）。将PPD 5IU注入左前臂内侧中上1/3内，使局部形成皮丘，72 h后观察结果，以局部硬结平均直径大小[（横径+纵经）/2]为依据，
1.3 统计学处理 应用SPSS 15.0进行所得数据进行统计分析，计数资料采用 字2检验，以P
2 结果
菌阴结核组67例患者中有60例T-SPOT.TB结果阳性，诊断敏感性为89.6%，肺炎组124例患者中有11例T-SPOT.TB结果阳性，诊断特异性为91.1%。其与PPD、结核抗体结果比较差异均有统计学意义（P
3 讨论
结核病现仍是威胁全球公共卫生的严重传染病之一。据世界卫生组织估计，2011年全世界范围新增结核患者870万例，死于结核的人数约140万[5]。我国结核病患病人数位居全世界第2位，全球感染结核分枝杆菌的人数达到5.5亿，现有结核患者约450万，每年死于肺结核的人数约13万[2]。而这一数据近年仍呈上升趋势。因此快速准确的诊断结核病，对结核的防控至关重要。
国内现有的诊断结核的方法有很多，但其诊断敏感性均不高，临床应用不佳。T细胞的γ干扰素释放试验（TIGRAs）是结核病诊断领域的重要进展。其包括了基于全血细胞培养的酶联免疫吸附试验（ELISA）和基于外周血淋巴细胞（PBMC）培养的酶联免疫斑点试验（ELISPOT）。其原理是使用2种特异性抗原，即早期分泌抗原靶蛋白（ESAT-6）和培养滤过蛋白-10（CFP-10）来刺激体内受到结核抗原刺激致敏的T淋巴细胞分泌IFN-γ，检测γ干扰素细胞数目，从而能准确判断机体是否存在结核感染[6]。这两种抗原在所有卡介苗的菌株及非结核分枝杆菌中均不存在，因此其结果不受卡介苗接种和非结核分枝杆菌的影响，对结核感染有着较高的诊断价值。
基于以上原理而设计的T-SPOT.TB技术是目前TIGRAs诊断结核感染的最主要的方法之一。目前相关研究资料结果显示T-SPOT.TB对于结核的辅助诊断价值较高。Lee等[1]的前瞻性研究结果提示T-SPOT.TB诊断结核的敏感性和特异性分别为96.6%和84.7%。Dai等[7]meta分析结果提示T-SPOT.TB对结核诊断的敏感性为88%，特异性为89%。乐军等[8]国内科研工作者的研究提示T-SPOT.TB对我国结核感染诊断的敏感性和特异性分别为95.5%和93.3%。霍菲菲等[9]对肺外结核的研究结果提示T-SPOT.TB对肺外结核诊断的敏感性为93.5%。高梦秋等[10]比较了酶联免疫吸附试验法检测MTB特异性细胞免疫反应（A.TB）和T-SPOT.TB两种方法在结核病中的诊断意义，其结果显示两者诊断性能相似，T-SPOT.TB对结核病的诊断敏感性和特异性分别为90.7%和78.9%。本文研究了T-SPOT.TB在菌阴肺结核中的诊断价值，结果显示其对菌阴肺结核诊断的敏感性和特异性均较高，分别为89.6%和91.1%，和传统的PPD、结核抗体检查相比具有更高的敏感性和特异性，可有效的指导菌阴结核的诊断。
菌阴肺结核临床诊断较为困难，PPD、结核抗体因其较高的假阳性和假阴性，常可能造成临床的漏诊及误诊。T-SPOT.TB对结核病的诊断显示出高敏感性和特异性，且其操作简单快捷，可用来辅助诊断菌阴肺结核，为患者的早期治疗、早期诊断提供帮助。
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（收稿日期：2013-06-07） （本文编辑：郎威）