毛茛总苷成分的HPLC—PDA条件优化研究

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摘要：目的：研究建立中药毛茛总苷类成分的hplc-pda分析方法。方法：采用HPLC-PDA对毛茛总苷样品进行了分析。结果：最终确定毛茛总苷HPLC的分析条件，同时对毛茛总苷成分进行了初步分析。

中药毛茛（Ranunculus japonicus Thunb）是多年生草本毛茛（Ranunculaceae）毛茛属（Ranunculus）植物，以带根全草入药。毛茛具有利湿，消肿，止痛，退翳，截疟，杀虫的功效。民间常用于胃痛，黄疸，疟疾，淋巴结结核，翼状胬肉、角膜云翳，灭蛆、杀孑孓。主治主治黄疸，哮喘，疟疾，偏头痛，牙痛，鹤膝风，风湿关节痛，目生翳膜，瘰疬，痈疮肿毒[1-3]。

目前对于毛茛的化学成分的研究并不多见，目前为止，仅有报道发现从毛茛中分离出香豆素类化合物2个，滨蒿内酯，东莨菪内酯，黄酮类化合物4个小麦黄素，木犀草素，5-羟基-6，7-二甲氧基黄酮，5-羟基-7，8-二甲氧基黄酮，酚酸类1个原儿茶酸，内酯类化学物2个白头翁素，小毛茛内酯，萜类化合物3个β-谷甾醇，豆甾醇，β-胡萝卜苷和三个简单内酯毛茛苷元，异毛茛苷元，二氢毛茛苷元以2：1：1为比例的混合物[4-5]。本实验采用HPLC-PDA分析毛茛总苷中主要化学成分，对液相条件进行了优化选择，旨在为毛茛总苷中主要化学成分进一步分析进行液相条件摸索和色谱条件选择。

2.实验部分

2.1 实验材料

毛茛全草采自江西省九江市，原植物由广东药学院刘基柱讲师鉴定为毛茛科Ranunculaceae毛茛属植物毛茛Ranunculus japonicusThunb。

2.2实验试剂

甲醇（分析纯，天津市富宇精细化工有限公司）；甲醇（色谱纯，德国Merck 公 司）；乙腈（色谱纯，德国Merck 公司）；甲酸（色谱纯，Dikma公司）；乙醇（分析纯，天津市富宇精细化工有限公司）；去离子水由超纯水仪制的，其他试剂均购自广州化学试剂公司（广州）。

2.3实验仪器

2996高效液相色谱仪（PAD检测器）（Waters公司）（四元双泵）HPLC色谱柱： Waters HPLC XTerra?Rp C18 column （18.5μm，4.6×250mm）。（Waters公司）；BP210D分析天平（Sartorius公司）KQ-250B型超声波清洗器（昆山市超声波仪器厂）；1810B型自动双重水蒸馏器（上海玻璃仪器厂）；Arium611 UV纯水器（德国赛多利斯公司）。

2.4毛茛总苷样品制备

毛茛毛茛全草晾干切碎，85%乙醇回流提取3次，过80目筛，合并提取液，减压浓缩回收溶剂，等体积的醋酸乙酯萃取若干次至醋酸乙酯层为浅绿色。下层（水层）蒸干溶剂，得膏状物经D-101大孔树脂吸附，水洗，弃去，再用纯乙醇洗脱，收集此部位，蒸干乙醇得膏状物即毛茛总苷。

2.5供试品制备

供试品制备：精密称取毛茛总苷样品0.05g，加甲醇水（1：1v/v）超声溶解，甲醇水（1：1v/v）定容至10mL，0.22μm微孔滤膜过滤，待分析.

2.6HPLC-PDA分析实验条件

毛茛总苷极性较大，根据文献选择二元洗脱溶剂，液相系统选择为Waters公司2996高效液相色谱仪（PAD检测器），色谱柱为HPLCXTerra?RpC18column（18.5μm，4.6×250mm），柱温30℃。