不同制备方法制备冰冻解冻去甘油红细胞质量研究
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【摘要】 目的 考察全自动细胞处理仪ACP215和传统手工制备冰冻解冻去甘油红细胞的质量差异。方法 将采集40袋400ml全血随机分2组， 全自动细胞处理仪ACP215组和传统手工法分离组， 对制备成的冰冻解冻去甘油红细胞进行血红蛋白质量、游离血红蛋白、白细胞残留量、甘油残留量的质量检测。结果 全自动细胞处理仪ACP215制备血红蛋白含量显著高于传统手工制备法， 甘油残留量和游离血红蛋白显著低于传统手工制备法， 差异具有统计学意义（P0.05）。结论 全自动细胞处理仪ACP215制备的冰冻解冻去甘油红细胞质量比传统手工制备冰冻解冻去甘油红细胞质量更好。
【关键词】 冰冻解冻去甘油红细胞；质量差异；全自动细胞处理仪ACP215
冰冻解冻去甘油红细胞主要适用于Rh（-）稀有血型红细胞的长期保存， 供临床稀有血型患者应急使用以及自身输血提供方便[1]。加入甘油后红细胞处于高渗状态， 必须用梯度洗涤方法去除甘油， 目前临床应用的冰冻解冻去甘油红细胞主要是机器和手工两种制备方法， 随着科技高速发展， 机洗冰冻红细胞， 因其操作时间短， 洗涤后的Rh（-）红细胞安全性及有效性均良好， 逐渐取代手工制备， 现将机洗ACP215制备冰冻解冻去甘油红细胞和传统手工制备冰冻解冻去甘油红细胞进行质量比较， 现报告如下。
1 材料与方法
1. 1 材料 复方甘油试剂（北京博德桑特）、三珠袋（北京博德桑特）、ACP215红细胞洗涤耗材（美国血技）、9%氯化钠（北京博德桑特）、0.9%氯化钠（山东威高）、输血器（江西洪达）、离心机（贺利氏6000I）、振荡器（金坛市）、-80℃冰箱（三洋）、无菌接驳机（泰尔茂）、恒温水浴箱（余姚市东方电工仪器厂）钨酸钠（天津化学试剂四厂）、氢氧化钠（天津博迪化工）、乙二醇（天津富宇精细化工）、无水乙醇（沈阳华东试剂厂）、稀释液（希森美康医用电子有限公司）、酚酞（沈阳华东试剂厂）、高碘酸钠（天津福晨化学试剂厂）、血浆游离血红蛋白试剂盒（北京瑞尔达生物科技）、溶血剂（希森美康医用电子有限公司）、山东威高滤白血袋。
1. 2 取样 采集40袋400 ml， 分A、B两组。
1. 3 方法
1. 3. 1 甘油化方法 将去白细胞悬浮红细胞或全血离心去上清， 将红细胞移至三珠袋中加甘油， 在振荡器上操作， 动作需轻柔。200 ml红细胞加甘油160 ml， 控制加甘油速度先慢后快， 前8 min40滴/ min左右， 逐渐提高滴速80滴/min左右， 25 min左右加完。在室温静止30 min送-80℃速冻保存。
1. 3. 2 洗脱甘油（手工）：用梯度洗涤方法， 先用9%NaCl溶液每200 ml全血一袋80ml浓盐， 先40滴/min左右， 2 min后80滴/ min， 7-8 min加完， 静止5 min， 再加入50 ml左右的0.9%NaCl， 速度控制在60滴/ min， 静止5 min后离心， 离心转速2300转， 离心时间为6 min。离心后去除上清， 再加0.9%NaCl 80～100滴/ min， 加150 ml左右离心， 离心转速2300转， 离心时间为6 min， 反复三次， 最后成品冰冻解冻去甘油红细胞毛重为240 ml/U。
1. 3. 3 ACP215制备：-80℃取出冰冻红细胞， 放入37～42℃水浴箱内融化， 4～5 min/袋， 融化后静止5 min， 利用无菌接驳机将血袋和ACP215全自动细胞处理仪的专用耗材连接， 所使用洗涤耗材同手工制备。按照预先编制的程序， 自动洗涤冰冻解冻去甘油红细胞。
1. 4 统计学方法 数据采用t检验（P
2 结果
2. 1 检测结果见表1。
2. 2 质量控制标准
血红蛋白含量：≥32 g/L；游离血红蛋白含量≤1g/L；白细胞残留量≤4×107/L；甘油残留量≤10 g/L [2]。
3 讨论
-80℃冰冻保存红细胞具有保存时间长、保存效果好的特点， 是目前最有效的红细胞长期保存方法 [3]， 是稀有血型输血以及自身输血重要手段。冷冻保存红细胞， 既争取了抢救时间， 又极大方便了临床用血， 近年来ACP215全自动细胞处理仪在我国使用已逐步取代手工制备， 手工制备存在消耗时间比较长， 每U4 h左右， 并且是半开放式制备， 存在被污染的安全隐患。而全自动处理仪制备出冰冻解冻去甘油红细胞属全封闭式， 制备时间短， 耗时1 h左右， 缩短临床患者等待抢救时间， 减少血液污染机率， 降低劳动强度， 洗涤效果良好， 实现血站自动化、标准化、规范化的制备模式， 机器制备是有效保证血液质量的前提。
参考文献
[1]康惠军， 叶萍. 临床输血等.北京：科学技术文献出版社， 2006.
[2]中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会.全血及成分血质量要求. 2012.
[3]靳鹏， 刘安， 曹伟， 等.新型冰冻红细胞洗涤机洗涤效果的研究.中国输血杂志， 2005， 18（3）：212-213.