八珍丸中阿魏酸含量测定

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[摘要]建立反相高效液相色谱法测定八珍丸中阿魏酸的含量。方法：采用奥泰公司 C18 色谱柱（218 mm×4.6mm，5μm），乙腈一0.085%磷酸溶液(17:83)，检测波长为316nm，流速为1.0ml/min，柱温为30℃。阿魏酸在9.6～48.0μg・mL-1范围内呈良好的线性关系（r=0.9998）。阿魏酸平均回收率分别为99.1％。结论：本法简便、准确，可用于八珍丸中阿魏酸的含量测定。

[关键词]八珍丸；含量；测定

中图分类号：F763 文献标识码：A

八珍丸为棕黑色的水蜜丸。八珍丸具有补气益血的功效。八珍丸由甘草五十克、当归一百五十克、 白芍一百克、党参一百克、白术（炒）一百克、茯苓一百克、川芎 七十五克、 熟地黄一百五十克组成。八珍丸临床常用于食欲不振、四肢乏力、气血两虚、面色萎黄、月经过多等症状。当归为伞形科当归属植物当归Angelica sinesis(Oliv. )Diels的干燥根 [1]。当归分布于湖南、湖北、贵州、云南、四川、青海、陕西等地。当归具有补血活血、调经止痛、润燥滑肠等功效，为医临床常用药。当归含有丁二酸、豆甾醇、异菖蒲烯、菖蒲、二烯谷甾醇、豆甾醇-D-葡萄糖甙、尿嘧啶蒿本内脂、正丁烯酰内酯、阿魏酸、烟酸等成份，其中阿魏酸为主要有效成分之一。现代药理研究显示，阿魏酸具有抑制血小板聚集，抗血栓，抗心肌缺血、缺糖、缺氧等药理作用[2].本实验采用高效液相色谱法对八珍丸中的阿魏酸的进行了含量测定。

1．仪器与试药

1.1仪器：Waters515高效液相色谱仪；N3000色谱工作站；Waters可变波长检测器。赛多利斯BPZn-D分析天平；)；KQ5200B型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；十万分之一电子分析天平(德国塞多利斯)；PHS一3TC(0．01级)精密数显酸度计(上海天达仪器有限公司)；PL5124型纯水机(PALL)。

1.2色谱柱：奥泰公司 C18 色谱柱（218 mm×4.6mm，5μm）。

1.3对照品：阿魏酸 购自中国药品生物制品检定所。

1.4试剂：甲醇、乙腈为色谱纯；水为纯化水，其它试剂均为分析纯。

1.5试药：八珍丸（批号：101001，101002，101003）

2．测定方法确定

2.1色谱条件

依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下。流动相：乙腈一0.085%磷酸溶液(17:83)，检测波长：316nm，流速：1.0m・min-1。柱温：30℃。理论板数按阿魏酸峰计算应不得低于2000。

2.2对照品溶液的制备

精密称取阿魏酸对照品适量，置容量瓶中，加70%甲醇制成每1mL含12ug的溶液，即得。

2.3提取方法确定

2.3.1提取溶媒的选择

在供试品溶液制备中，分别选用了水、70%甲醇、甲醇进行超声提取，结果表明70%甲醇分离效果、峰形及含量为最好，所以选择70%甲醇进行超声提取。

2.3.2提取时间的选择

取供试品适量，用70%甲醇溶解，超声波振荡分别提取20、25、30分钟，制备供试品溶液，含量结果表明：三种提取时间结果无明显差异，为保证提取完全并缩短处理时间，采用超声提取25分钟。

2.3.3供试品溶液的制备

取装量差异项下的供试品，研碎，称取1.05g，置具塞锥形瓶中，加入70%甲醇适量，密塞，超声处理(240W，40kHz)25min，放冷,过滤，挥干70%甲醇提取液，残渣用20ml70%甲醇溶解，摇匀，滤过。取续滤液，即得。

2.4 专属性试验

依照处方取除当归以外的药材，按样品制备工艺制成阴性对照样品，照2.3.3项下供试品溶液的制备方法制成阴性液，依上述方法测定，结果在阿魏酸出峰处阴性液无色谱峰，结果阴性试验没有干扰，表明本方法专属性良好。

2.5 精密度试验

精密称取阿魏酸对照品适量，加70%甲醇使溶解，制成浓度为12ug・mL-1的供试品溶液。照上述色谱条件，精密吸取10μl，连续进样6次，记录峰面积。结果，RSD=0.93%，表明本方法精密度良好。

2.6对照品的线性考察

精密称取阿魏酸对照品6.0mg，置25ml容量瓶中，加入70%甲醇溶液使溶解并稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取0.4、0.6、1.2、1.6、2.0mL，置于10mL量瓶中，加70%甲醇稀释至刻度，摇匀。分别精密上述溶液吸取10μL，注人液相色谱仪，依照2.1项下的色谱条件测定，记录色谱峰。以峰面积(Y)为纵坐标，对照品进样量(X)为横坐标，绘制标准曲线，计算回归方程为：y=1122.13x一1133.01（r=0.9998）。结果表明，阿魏酸在9.6～48.0μg・mL-1范围内呈良好的线性关系。

2.7重现性试验

称取同一批的八珍丸样品6份，按测定方法项下的方法制备供试品溶液，测定含量，并计算样品的RSD值，结果RSD为1.06%，结果表明此方法的重现性良好。

2.8准确度试验

精密称取已知含量的样品6份，分别加入一定量的阿魏酸对照品，上述方法进行测定，计算回收率，平均回收率为99.1%，RSD=0.96%。结果表明此方法的回收率良好。

2.9样品稳定性试验

取同一批八珍丸样品，按2.3项下的供试品制备方法制备供试品，将供试品置室温下放置，分别于第0、2、4、6、8、10小时，精密吸取供试品溶液10µl 注入液相色谱仪中，记录色谱图。测定八珍丸中阿魏酸的RSD=0.71%。结果表明供试品10小时内稳定。

2.10样品含量测定

依照上述含量测定方法，测定八珍丸三批样品中阿魏酸的含量，结果三批样品的含量分别为93、92、93ug・g-1。

3讨论

3.1 流动相的选择分别考察甲醇-水 (10∶90)，乙腈一0.085%磷酸溶液(17:83)，甲醇-水(18∶92)不同比例的流动相，结果以乙腈一0.085%磷酸溶液(17:83)为流动相为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用乙腈一0.085%磷酸溶液(17:83)为流动相为流动相。

3.2 检测波长的选择制备阿魏酸对照品稀释液照紫外-可见分光光度法（中国药典2010版一部 附录Ⅴ A），于190～900nm波长范围内进行全波长光谱扫描，记录吸收光谱。在316nm处有最大吸收峰，故选用316nm为检测波长。

本实验表明此方法可用于八珍丸中阿魏酸的含量测定。八珍丸中阿魏酸的含量为每克不低于90ug.

[参考文献]

[1]国家药典委员会.中国药典［S］.北京：二部，化学工业出版社，2010

[2]马瑞君，王钦，陈学林，等．当归的研究进展[J]．中草药，2002．33(3)：28