植物袋泡调味茶中粗多糖的测定
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【摘 要】目的：建立植物袋泡调味茶中粗多糖含量测定的方法。方法：相对分子质量1×104的高分子物质在80%乙醇溶液中沉淀，与水溶液中单糖和低聚糖分离，用碱性二价铜试剂选择性地从其他高分子物质中沉淀具有葡聚糖结构的多糖，用苯酚-硫酸反应以碳水化合物形式比色测定其含量，其显色强度与粗多糖中葡聚糖的含量成正比，以葡聚糖为指标，采用紫外-可见分光光度法可测定样品中粗多糖的含量。结果：葡聚糖在0.009736mg～0.097360mg间线性关系良好， 其线性回归方程为C=0.20411*Abs （r=0.99975）。平均回收率为118.84%（RSD%=6.74%）。结论：该方法简便、可靠，重复性好，适用于本品中粗多糖含量测定。
【关键词】植物袋泡调味茶；粗多糖
【中图分类号】R151 【文献标识码】A 【文章编号】1004-7484（2013）11-0785-01
植物袋泡调味茶系由罗汉果等搭配不同茶叶，经粉碎、混合等工艺制备而成的袋泡茶。茶叶和罗汉果中多糖含量较高，且已有研究表明茶多糖和罗汉果多糖有一定血糖保健作用，故选择粗多糖含量作为控制植物袋泡调味茶质量的指标。
1 仪器与试剂
1.1 仪器
电磁炉（美的集团）；旋转混匀器（广州仪科实验室技术有限公司）；台式低速离心机（上海医疗器械（集团）有限公司手术器械厂）；CRAY-1E紫外可见分光光度计（安捷伦科技（中国）有限公司）。
1.2 试剂[1]
所用试剂除特殊注明外，均为分析纯；所用水为去离子水或同等纯度蒸馏水。
1.2.1 乙醇溶液（80%）：20mL水中加入无水乙醇80mL。
1.2.2氢氧化钠溶液（100g/L）：称取100g氢氧化钠，加水溶解并稀释至1L，加入固体无水硫酸钠至饱和，备用。
1.2.3铜试剂储备液：称取3.0g CuSO4·5H2O，30.0g柠檬酸钠，加水溶解并稀释至1L，混匀，备用。
1.2.4铜试剂溶液：取铜试剂储备液50mL，加水50mL，混匀后加入固体无水硫酸钠12.5g并使其溶解。临用新配。
1.2.5洗涤液：取水50mL，加入10mL铜试剂溶液、10mL氢氧化钠溶液，混匀。
1.2.6硫酸溶液（10%）：取100mL浓硫酸加入800mL左右水中，混匀，冷却后稀释至1L。
1.2.7苯酚溶液（50g/L）：称取精制苯酚5.0g，加水溶解并稀释至100mL，混匀。溶液置冰箱中可保存1个月。
1.2.8葡聚糖标准储备液：准确称取相对分子量5×105、已干燥至恒重的葡聚糖标准品0.5000g，加水溶解并定容至50mL，混匀，置冰箱中保存。此溶液1mL含葡聚糖10.0mg。
1.2.9葡聚糖标准使用液：吸取葡聚糖标准储备液1.0mL，置于100mL容量瓶中，加水至刻度，混匀，置冰箱中保存。此溶液1mL含葡聚糖0.10mg。
2 方法与结果
2.1 线性范围
准确吸取葡聚糖标准使用液0、0.10、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00mL（相当于葡聚糖0、0.01、0.02、0.04、0.06、0.08、0.10mg）分别置于25mL比色管中，准确补充水至2.0mL，加入50g/L苯酚溶液1.0mL，在旋转混匀器上混匀，小心加入浓硫酸10.0mL，于旋转混匀器上小心混匀，置沸水浴中煮沸2min，冷却后用分光光度计在485nm波长处以试剂空白溶液为参比，1cm比色皿测定吸光度值。以葡聚糖为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。结果表明，葡聚糖在0.009736mg～0.097360mg间线性关系良好，线性回归方程为C=0.20411*Abs ，r=0.99975（见表1）。
2.6 专属性
由于植物袋泡调味茶没有添加辅料，空白对照即相当于以蒸馏水进行含量测定处理并显色，测定吸光度，结果空白对照测得蒸馏水中葡聚糖含量为0.00025mg/mL，干扰较小。
2.7 含量测定
2.7.1 样品处理
2.7.1.1 样品提取：称取混合均匀的茶包内容物3.0g，置于150mL锥形瓶中，精密加入水100mL，称重，于水浴中加热2h，放冷，加水补足减失重量。过滤，弃去初滤液，收集余下滤液供沉淀多糖。
2.7.1.2 沉淀粗多糖：准确吸取2.1项终滤液5.0mL，置于50mL离心管中，加入无水乙醇20mL，混匀5min后，以3000r/min离心5min，弃去上清液。残渣用80%（v/v）乙醇溶液数毫升洗涤，离心后弃上清液，反复操作3～4次。残渣用水溶解并定容至5.0mL，混匀后，供沉淀葡聚糖[1]。
2.7.1.3 沉淀葡聚糖：准确吸取2.2项终溶液2mL，置于20mL离心管中，加入100g/L氢氧化钠溶液2.0mL、铜试剂溶液2.0mL，于沸水浴中煮沸2min，冷却，以3000r/min离心5min，弃去上清液。残渣用洗涤液数毫升洗涤，离心后弃上清液，反复操作3次，残渣用10%（v/v）硫酸溶液2.0mL溶解并转移至50mL容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀。此溶液为样品测定液[1]。
2.7.1.4 样品测定：准确吸取样品测定液2.0mL置于25mL比色管中，加入50g/L苯酚溶液1.0mL，在旋转混匀器上混匀，小心加入浓硫酸10.0mL于旋转混匀器上小心混匀，置沸水浴中煮沸2min，冷却至室温，用分光光度计在485nm波长处，以试剂空白为参比，1cm比色皿测定吸光度值。从标准曲线上查出葡聚糖含量，计算样品中粗多糖含量[1]。
2.7.1.5 结果计算
式中 X为样品中粗多糖含量（以葡聚糖计）（mg/g）；m1为样品测定液中葡聚糖的质量（mg）；m2为样品空白液中葡聚糖质量（mg）；m3为样品质量（g）；V1为样品提取液总体积（mL）；V2为沉淀粗多糖所用样品提取液体积（mL）； V3为粗多糖溶液体积（mL）； V4为沉淀葡聚糖所用粗多糖溶液体积（mL）； V5为样品测定液总体积（mL）； V6为测定用样品测定溶液体积（mL）[1]。
2.7.2 含量测定结果
分别取植物袋泡调味茶（2012102501～2012102503批）各3.0g，按含量测定方法处理，于485nm处测定吸光度，计算粗多糖含量（见表6）。
3 结论
本文采用紫外可见分光光度法测定粗多糖含量，方法简便、可靠，重复性好，适用于植物袋泡调味茶质量控制。
参考文献：
[1] 王光亚. 保健食品功效成分检测方法[M].北京：中国轻工业出版社，2002